一、CONSTRUCTION AND EXPRESSION OF A HUMAN-MOUSE CHIMERIC ANTIBODY AGAINST HUMAN BLADDER CANCER（论文文献综述）
郝攀,张春丽,马超,马欢,陈雪琪,殷雷,闫平,王荣福[1]（2015）在《131I-BDI-1在荷人膀胱癌裸鼠体内的药代动力学研究》文中研究表明[目的]用131I标记人膀胱癌特异性单克隆抗体BDI-1,探讨其在荷瘤裸鼠体内的生物分布及药代动力学参数,为其作为膀胱癌诊断和治疗的新型靶向药物提供基础数据。[方法]用Ch-T法进行BDI-1的131I标记,标记完成后,采用Sephadex G-25分离纯化,用纸层析法测定标记产物的放化纯度,经尾静脉注入到荷人膀胱癌裸鼠体内,在不同时间处死裸鼠,测定裸鼠体内生物分布,采用DAS 2.0软件计算药代动力学参数。[结果]静注后,131IBDI-1主要分布于荷瘤裸鼠肝脏、脾脏、肾脏和肿瘤等组织。血液药—时曲线符合开放性二房室分布模型,其中分布相半衰期[t1/2（α）]为0.1693h,消除相半衰期[t1/2（β）]为69.315h,峰值时间tmax为0.033h,平均血浆清除率为67.154L/（h·kg）,曲线下面积AUC0-t为904.006mg/L·h-1;药物在肿瘤中摄取的峰时为72h。[结论]131I-BDI-1在荷人膀胱癌裸鼠中具有特异的肿瘤摄取,其在血液中清除较快,而在肿瘤中具有较快的吸收半衰期及较长的清除半衰期,适合作为一种肿瘤的靶向诊断与治疗药物。
安萌[2]（2013）在《抗人CD86单链抗体的研制及生物学功能研究》文中研究指明CD86（又称B7-2）是表达在抗原提呈细胞（antigen-presenting cell，APC）表面的重要共刺激分子，其受体是表达在T细胞表面的CD28分子。CD86与CD28结合转导的信号，对T细胞的活化、增殖与功能发挥起着重要作用。CD86的编码基因为1120bp，由306个氨基酸组成，属于Ⅰ型跨膜糖蛋白。单链抗体（single chainvariable fragment，scFv）是一种新型重组抗体，是将抗体重链可变区（VH）和轻链可变区（VL）用一条弹性短肽连接而成的小分子抗体片段，此类抗体的优点是分子量小、免疫原性弱、渗透性强、并具有药物导向及中和毒素等功能。本研究在成功制备了鼠抗人CD86单克隆抗体及其相应人-鼠嵌合抗体的基础上，构建了抗人CD86-scFv的真核表达载体并在CHO细胞中得到稳定表达，进而对该抗体的生物学功能进行了初步研究。第一部分抗人CD86单链抗体（CD86-scFv）的构建及表达目的：构建抗人CD86-scFv基因并在CHO细胞中表达，筛选稳定表达该抗体的细胞株。方法：采用RT-PCR从分泌鼠抗人CD86单克隆抗体的杂交瘤细胞株（克隆号：1D1）中克隆VH及VL基因。重叠延伸拼接PCR（gene splicing by overlap extensionPCR，SOE-PCR）方法构建具有前导肽的L-VH-Linker-VL单链抗体基因，并克隆至真核表达载体pIRES2-EGFP。脂质体转染法转染至中华仓鼠卵巢细胞（CHO），G418加压筛选，采用流式细胞术鉴定出稳定表达抗人CD86-scFv的细胞株。结果：构建的抗人CD86-scFv基因全长为780bp，测序后经BLAST比对，证明该序列为鼠源亲本抗体的可变区基因，并含有信号肽、连接肽以及His标签。转染CHO细胞，G418加压筛选后获得了稳定表达抗人CD86-scFv的细胞株，命名为SA-IV。培养上清与L929-CD86细胞的阳性结合率为64.8%。结论：成功构建了稳定表达抗人CD86-scFv的细胞株SA-IV，为进一步研究该抗体的生物学活性提供了物质基础。第二部分抗人CD86-scFv的生物学功能研究目的：制备抗人CD86-scFv，分析其与不同人源细胞株膜型CD86分子的结合特性及介导的生物学功能。方法：大批量培养细胞株SA-IV，收集上清，ProfinityTMIMAC镍预装柱分离纯化CD86-scFv。采用流式细胞术分析CD86-scFv对基因转染细胞株L929-CD86以及天然表达CD86分子的人B系淋巴瘤细胞Raji和Daudi膜型CD86分子的识别。竞争抑制实验分析该抗体与鼠源亲本抗体1D1竞争结合相应抗原的能力。在Raji细胞的培养体系中加入不同浓度的CD86-scFv，MTT法分析CD86-scFv对Raji细胞增殖的影响，流式细胞术分析该抗体诱导Raji细胞凋亡的作用。CD86-scFv与Raji细胞共孵育后接种BABL/c裸鼠，观察抗体对肿瘤细胞成瘤性的影响。结果：经大量培养SA-IV并收集培养上清，镍预装柱分离纯化CD86-scFv的得率为4.2mg/L。CD86-scFv能特异性识别L929-CD86、Raji以及Daudi细胞表面的CD86分子，阳性结合率分别为67.0%、72.3%及80.5%。该抗体对鼠源亲本抗体1D1具有竞争结合能力。在Raji细胞培养体系中加入CD86-scFv，细胞生长抑制率为28.3%，凋亡率为11.2%。Raji细胞与CD86-scFv共孵育后接种BALA/c裸鼠，成瘤（直径4-5mm）时间较对照组推迟6-8天，在60天的观察期内，抗体处理组肿瘤的平均体积较对照组小30%。结论：研制的抗人CD86-scFv能够与相应抗原分子结合，体内、外对高表达CD86分子的肿瘤细胞均具有生长抑制作用。
晁开,黄华梁,郭霭光[3]（2009）在《高亲和力抗膀胱癌单链抗体筛选及亲和力测定》文中研究说明以膀胱癌细胞系BIU-87膜抗原为亲和底物,从抗膀胱癌噬菌体人源化单链抗体库中筛选出4个高亲和力改形单链抗体.ELISA结果和NH4SCN洗脱法数据显示,它们对膀胱癌细胞膜抗原的亲和活性显着高于鼠源单链抗体.同时以多种蛋白检验了其亲和作用的特异性.
张文娟[4]（2009）在《REV囊膜糖蛋白env基因的原核表达及单克隆抗体的制备与应用》文中进行了进一步梳理以禽网状内皮组织增生症病毒（REV）前病毒全基因cDNA克隆质粒DNA（pB101）为模板,采用PCR扩增技术,扩增出1200bp大小的env基因片段,并将其克隆到PGEX-4T-3表达载体上,经测序鉴定结果显示,成功构建了PGEX-4T-3-env表达质粒。将该质粒转化到大肠杆菌BL21中,通过IPTG诱导、SDS-PAGE检测结果显示,env基因在大肠杆菌中以包涵体的形式进行了高效表达。以尿素溶解液洗涤并溶解包涵体蛋白,4℃复性后用GST融合蛋白纯化试剂盒纯化;将纯化产物用牛凝血酶酶解切除GST标签蛋白便获得了纯env基因囊膜糖蛋白,用Western blot对该蛋白进行检测分析结果表明,env基因表达的蛋白具有良好的反应原性,能够很好的识别REV抗体。用纯化的env蛋白为包被抗原,建立了检测抗REV抗体的间接ELISA（ienv-ELISA）。经对ienv-ELISA的最佳工作条件测定结果表明,抗原最佳包被浓度为10mg/ml、血清的最佳稀释度为1:500,二抗的最佳稀释度为1:5000,最佳包被液为TB,最佳显色时间为15min。经重复性试验、特异性试验和对比试验结果显示,建立的ienv-ELISA方法有良好的可重复性,标准差均小于15%;与鸡IBDV MDV NDV AIV等病毒阳性抗体均无交叉反应;与全病毒ELISA（REV-ELISA）和IFA准确性符合率均超过90%。用纯化的env蛋白免疫Babl/c小鼠,用聚乙二醇（PEG）介导Babl/c小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合。经选择性培养、有限稀释法克隆化和纯化的env蛋白进行筛选,获得了16株能稳定分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞株（分别命名为: 0.5-2E12、3-2A11、3-2B3、3-2F3、1-2E3、3D2、1-2D8、1-2E9、1-1A4、1-2B5、1-2B4、1-2C1、1-2C2、1-2D1、1-2D11、1-2H8）。Western blot分析表明,16株杂交瘤细胞分泌的单克隆抗体均能特异性的识别env蛋白;间接免疫荧光试验（IFA）检测结果显示,有6株（0.5-2E12、3-2B3、1-2E3、3D2、1-2D8、1-2H8）杂交瘤细胞分泌的单克隆抗体能特异性的识别REV全病毒。将6株杂交瘤细胞注射Balb/c小鼠制备腹水,间接ELISA检测其腹水的抗体效价均超过105;将腹水蛋白进行浓缩、纯化,测定其浓度为8mg/ml。用纯化单抗建立检测REV的双抗体夹心ELISA方法,通过对该方法进行最佳工作条件优化结果表明,单抗、多抗和二抗的最佳工作浓度分别为1:1600、1:8000和1:5000、最佳包被液为CB。用该方法与几种常见的鸡的传染病病毒（IBDV MDV NDV AIV）进行特异性试验,结果均未发生交叉反应,说明该方法对REV检测具有高度特异性。重复性试验结果显示该方法具有良好的可重复性。
周丽君,王欲晓,王琰[5]（2008）在《CDR3导向抗体库法人源化抗膀胱癌Fab的鉴定》文中研究说明目的:对通过CDR3导向抗体库法筛选到的3株人源化膀胱癌噬菌体抗体进行进一步分析鉴定。方法:用ELISA方法对筛选特异性克隆进行特异性鉴定、抗原表位的核实;采用硫氰酸盐洗脱ELISA法评估其亲和力;选用活性较高的克隆进行膀胱癌组织的免疫组化实验。结果:3株阳性克隆可溶性表达后能够与膀胱癌EJ细胞特异性结合;与鼠源噬菌体抗体（BDI）相比,2株克隆的亲和指数比较低,均为0.25mol/L,1株克隆的亲和指数为0.7mol/L,略低于鼠源的亲和指数（0.9mol/L）的水平。选择活性较高的克隆进行膀胱癌组织的免疫组化实验,显示该克隆能够与癌组织特异性结合。结论:用CDR3导向库法获得的人源抗体片段基本保持了原鼠源单克隆抗体（mAb）BDI的特性。
翁伟平[6]（2008）在《GST-LRF融合蛋白纯化及单克隆抗体的制备》文中研究指明Luman募集因子（Luman-recruiting factor,LRF）是碱性亮氨酸拉链蛋白转录因子,是Luman活化过程中必需的辅助因子,募集Luman进入特定的亚核区,促进有活性的转录复合物的形成。目前,对于LRF的生理功能尚不清楚,获得其单克隆抗体对于研究LRF的生理功能有非常重要的意义。本研究测定分析了GST-LRF融合蛋白在E.coli BL21（DE3）中高效表达的条件,以纯化的目的蛋白作为抗原,免疫BALB/C小鼠,制备单克隆抗体并进行鉴定。获得以下结果:1 GST-LRF融合蛋白（glutathione S-transferase,GST）在E.coli BL21（DE3）中高效表达的条件为:37℃、0.1 mmol/L IPTG、诱导表达5 h。电洗脱法纯化得到了高纯度的目的蛋白。2确定了检测抗GST-LRF融合蛋白抗体的间接ELISA的最佳作用条件:辣根过氧化物酶标记山羊抗小鼠IgG （酶标二抗）的工作浓度为1:1 200;包被抗原为10μg/mL;包被液为pH 9.6,0.05 M碳酸盐缓冲液;包被条件选择37℃作用2 h或4℃过夜;封闭液为1.0%明胶,封闭条件为37℃作用1 h。3用间接ELISA筛选阳性孔,通过有限稀释法筛选出3株分泌抗GST-LRF单克隆抗体的杂交瘤细胞株:A2E4、B2G6、D2F5。4采用腹水诱生法制备了A2E4、B2G6、D2F5 3株杂交瘤细胞的单克隆抗体,间接ELISA测定腹水抗体效价均为1:10 000,交叉性试验表明制备的单抗具有特异性,ELISA测定抗体的相对亲和力分别为:0.773μg/mL、0.800μg/mL和0.355μg/mL。
潘雪娜[7]（2007）在《抗人膀胱癌单抗BDI-1的制备、鉴定及～（99m）Tc-标记的放射免疫显像实验研究》文中研究指明膀胱癌是我国男性泌尿生殖系统最常见的恶性肿瘤,目前对膀胱癌的诊断和治疗手段很多,利用单克隆抗体导向诊断和治疗膀胱癌也是其中较有应用前景的方法之一。本实验采用杂交瘤细胞接种小鼠诱生腹水的方法制备单克隆抗体BDI-1,用亲和层析法提纯抗体,运用氯化亚锡还原法完成99mTc对BDI-1的标记,并以99mTc-免疫球蛋白作为对照,进行荷人膀胱癌裸鼠的放射免疫显像研究。实验研究结果表明:杂交瘤诱生腹水法可制备大量抗体,亲和层析法可以提纯较高效价的抗体。SPECT显像结果可见,裸鼠尾静脉注射99mTc-BDI-1 6h后抗体能够浓聚在肿瘤组织中,并随时间的延长T/NT增加,24小时后可以达到22.7,BDI-1显示了良好的免疫活性和良好的肿瘤导向定位的特性,有望成有膀胱癌早期诊断和治疗的良好载体。
周丽君,王欲晓,白银,余莉章,王琰[8]（2006）在《抗膀胱癌人-鼠嵌合抗体分离纯化及生物性能的测定》文中研究表明膀胱癌是泌尿系统常见的恶性肿瘤之一,其发病率和死亡率近年来呈明显上升趋势,严重威胁着人类健康。目前临床上常规采用的方法包括肿瘤的部分切除及辅助BCG或化疗药物的膀胱灌注治疗到膀胱全切除,但从根本上还不能够完全消除肿瘤的复发、进展和转移。单克隆抗体为其的诊断和治疗提供了一个新方法。近年来,随着基因工程技术
张春丽,王荣福[9]（2005）在《膀胱癌的放射免疫显像与放射免疫治疗》文中研究说明
安怀杰,刘志刚,俞炜源[10]（2004）在《治疗性全抗体的表达及其研究进展》文中进行了进一步梳理治疗性全抗体是一类前景良好的治疗药物,具有潜在的巨大市场。截至2003年6月,美国FDA批准的治疗性全抗体有20种。全抗体表达是抗体工程的研究重点之一,本文对全抗体的表达及其研究进展进行了阐述。
二、CONSTRUCTION AND EXPRESSION OF A HUMAN-MOUSE CHIMERIC ANTIBODY AGAINST HUMAN BLADDER CANCER（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、CONSTRUCTION AND EXPRESSION OF A HUMAN-MOUSE CHIMERIC ANTIBODY AGAINST HUMAN BLADDER CANCER（论文提纲范文）
（1）131I-BDI-1在荷人膀胱癌裸鼠体内的药代动力学研究（论文提纲范文）
| 1材料与方法 |
| 1.1主要材料 |
| 1.2方法 |
| 1.2.1细胞培养和裸鼠模型的建立 |
| 1.2.2131I-BDI-1的制备 |
| 1.2.3131I-BDI-1的纯化 |
| 1.2.4荷瘤裸鼠生物学分布 |
| 1.2.5药代动力学参数计算 |
| 2结果 |
| 2.1131I-BDI-1在组织中的生物分布曲线 |
| 2.2131I-BDI-1血液药代动力学参数 |
| 3讨论 |
（2）抗人CD86单链抗体的研制及生物学功能研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 研究背景 |
| 1. B7 分子的结构及表达 |
| 2. 基因工程抗体的表达 |
| 3. B7 分子与疾病 |
| 4. 基因工程抗体的研制及应用研究 |
| 参考文献 |
| 第一部分 抗人 CD86 单链抗体（scFv）的构建及表达 |
| 1. 材料和试剂 |
| 2. 方法 |
| 3. 结果 |
| 4. 讨论 |
| 参考文献 |
| 第二部分：抗人 CD86-scFv 的生物学功能研究 |
| 1. 试剂和材料 |
| 2. 实验方法 |
| 3 实验结果 |
| 4. 讨论 |
| 参考文献 |
| 全文总结与展望 |
| 综述：基因工程小分子抗体的研制及应用研究 |
| 参考文献 |
| 本研究所获得的基金资助 |
| 硕士研究生期间发表的论文 |
| 缩略词 |
| 致谢 |
（3）高亲和力抗膀胱癌单链抗体筛选及亲和力测定（论文提纲范文）
| 1 实验部分 |
| 1.1 材料与试剂 |
| 1.2 方法 |
| (1) 噬菌体原库的制备 |
| (2) 高亲和力单链抗体序列筛选 |
| (3) 单链抗体亲和力判定 |
| (4) 相对亲和力指数测定 |
| (5) 亲和特异性检验 |
| 2 实验及结果 |
| 2.1 人源化改形单链抗体库的筛选 |
| 2.2 亲和力判定 |
| 2.3 亲和力指数测定 |
| 2.4 亲和特异性检测 |
| 2.5 4个单链抗体序列比较 |
| 3 讨论 |
（4）REV囊膜糖蛋白env基因的原核表达及单克隆抗体的制备与应用（论文提纲范文）
| 摘要 |
| 英文摘要 |
| 引言 |
| 1、禽网状内皮组织增生症 |
| 1.1 病原学 |
| 1.2 流行病学 |
| 1.3 发病机理 |
| 1.4 临床症状及病理变化 |
| 1.5 诊断 |
| 1.6 防制 |
| 2、单克隆抗体技术 |
| 2.1 单抗技术的基本原理 |
| 2.2 单克隆抗体的特点 |
| 2.3 单克隆抗体技术的应用 |
| 2.4 单克隆抗体技术展望 |
| 3、本试验的目的意义 |
| 试验一 REV 囊膜糖蛋白 env 基因的原核表达及纯化 |
| 1.材料与方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.2 方法 |
| 1.2.1 PGEX-4T-3-env 原核表达质粒的构建与鉴定 |
| 1.2.2 Env 基因表达 |
| 1.2.3 重组蛋白的提取、纯化 |
| 1.2.4 Eev 蛋白特异性测定 |
| 2 结果 |
| 2.1 PCR 扩增env 基因 |
| 2.2 重组质粒的鉴定 |
| 2.3 重组原核表达质粒的序列测定 |
| 2.4 Env 蛋白表达 |
| 2.5 重组蛋白的酶解 |
| 2.6 蛋白的 Western blot 分析 |
| 3 讨论 |
| 试验二 检测抗 REV 抗体间接 ELISA 法的建立 |
| 1. 材料与方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.2 方法 |
| 1.2.1 Ienv-ELISA 方法的建立 |
| 1.2.2 特异性实验 |
| 1.2.3 重复性试验 |
| 1.2.4 Ienv-ELISA 与iREV-ELISA 比较 |
| 1.2.5 Ienv-ELISA 与 IFA 比较 |
| 2 结果 |
| 2.1 Ienv-ELISA 方法的建立 |
| 2.1.1 Ienv-ELISA 试验条件的优化 |
| 2.1.2 临界值的确定 |
| 2.1.3 重复性试验 |
| 2.1.4 特异性试验 |
| 2.2 Ienv-ELISA 与iREV-ELISA 比较 |
| 2.3 Ienv-ELISA 与IFA 比较 |
| 3 讨论 |
| 试验三 抗 env 蛋白单克隆抗体的制备 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.2 方法 |
| 1.2.1 动物免疫 |
| 1.2.2 细胞融合 |
| 1.2.4 杂交瘤细胞的筛选 |
| 1.2.5 杂交瘤细胞的克隆化 |
| 1.2.6 单克隆抗体腹水的制备 |
| 1.2.7 单克隆抗体的初步鉴定 |
| 2 结果 |
| 2.1 细胞融合与筛选 |
| 2.2 单克隆抗体的鉴定 |
| 3 讨论 |
| 试验四 检测REV抗原双抗体夹心ELISA方法的建立 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.2 方法 |
| 1.2.1 腹水型单抗的纯化 |
| 1.2.2 夹心 ELISA 方法的建立 |
| 1.2.3 重复性实验 |
| 1.2.4 特异性交叉试验 |
| 2 结果 |
| 2.1 单克隆抗体纯化结果 |
| 2.2 夹心 ELISA 方法的建立 |
| 2.2.1 多抗和单抗最佳稀释度的确定 |
| 2.2.2 包被液种类的选择 |
| 2.2.3 酶标二抗最佳稀释度的确定 |
| 2.2.4 临界值的确定 |
| 2.2.5 特异性试验 |
| 2.2.6 重复性试验 |
| 3 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
| 攻读硕士学位期间发表论文 |
（5）CDR3导向抗体库法人源化抗膀胱癌Fab的鉴定（论文提纲范文）
| 1 材料和方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.2 方法 |
| 1.2.1 可溶性Fab抗体的表达及检测 |
| 1.2.2 相对亲和力的测定 |
| 1.2.3 免疫组化实验 |
| 2 结果 |
| 2.1 可溶性Fab抗体的表达及检测 |
| 2.2 相对亲和力的测定 |
| 2.3 肿瘤组织免疫组化实验 |
| 3 讨论 |
（6）GST-LRF融合蛋白纯化及单克隆抗体的制备（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 第一章 LUMAN 募集因子和融合蛋白纯化及单克隆抗体的研究进展 |
| 1.1 LUMAN 募集因子的研究现状 |
| 1.1.1 LUMAN 募集因子的发现及功能 |
| 1.1.2 LRF 与未折叠蛋白反应（UNFOLDED PROTEIN RESPONSE, UPR） |
| 1.2 融合蛋白纯化 |
| 1.2.1 包涵体的形成机制 |
| 1.2.2 包涵体蛋白的处理 |
| 1.3 单克隆抗体的发展与应用 |
| 1.3.1 单抗技术的基本原理 |
| 1.3.2 单克隆抗体在医学领域的应用 |
| 1.3.3 单克隆抗体技术的研究进展 |
| 第二章 GST-LRF 融合蛋白在大肠杆菌中表达条件的优化及纯化 |
| 2.1 材料与方法 |
| 2.1.1 材料 |
| 2.1.2 方法 |
| 2.1.3 融合蛋白的纯化 |
| 2.2 试验结果 |
| 2.2.1 温度对蛋白表达的影响 |
| 2.2.2 诱导剂浓度对蛋白表达的影响 |
| 2.2.3 诱导时间对蛋白表达的影响 |
| 2.2.4 重组蛋白可溶性分析 |
| 2.2.5 GLUTATHIONE SEPHAROSE 48 亲和层析柱法和电洗脱法纯化GST-LRF 融合蛋白的比较 |
| 2.2.6 蛋白浓度测定 |
| 2.3 讨论 |
| 第三章 间接ELISA 法检测GST-LRF 融合蛋白抗体效价方法的建立 |
| 3.1 材料与方法 |
| 3.1.1 主要试剂 |
| 3.1.2 仪器 |
| 3.1.3 酶联免疫吸附试验（ELISA）使用试剂的配制 |
| 3.1.4 方法 |
| 3.2 结果与分析 |
| 3.2.1 酶标二抗工作浓度的选择 |
| 3.2.2 最佳包被条件及封闭条件的选择 |
| 3.2.3 最佳包被液的选择 |
| 3.2.4 包被时间和包被温度的选择 |
| 3.2.5 封闭液封闭时间的选择 |
| 3.2.6 ELISA 操作程序的最佳条件的确定 |
| 3.3 讨论 |
| 第四章 抗GST-LRF 融合蛋白杂交瘤细胞株的建立 |
| 4.1 材料与方法 |
| 4.1.1 主要试剂 |
| 4.1.2 主要仪器 |
| 4.1.3 实验动物及瘤细胞 |
| 4.1.4 方法 |
| 4.2 结果与分析 |
| 4.2.1 SP2/0 骨髓瘤细胞的培养 |
| 4.2.2 饲养层细胞的制备 |
| 4.2.3 细胞融合 |
| 4.2.4 杂交瘤细胞株的筛选 |
| 4.3 讨论 |
| 4.3.1 饲养层细胞 |
| 4.3.2 杂交瘤细胞的筛选及克隆 |
| 4.3.3 细胞融合 |
| 4.4 小结 |
| 第五章 抗GST-LRF 融合蛋白单克隆抗体的制备及性质分析 |
| 5.1 材料与方法 |
| 5.1.1 主要试剂 |
| 5.1.2 主要仪器 |
| 5.1.3 试验动物及细胞 |
| 5.1.4 方法 |
| 5.2 结果 |
| 5.2.1 抗GST-LRF 融合蛋白单克隆抗体效价的测定 |
| 5.2.2 单克隆抗体与LUMAN、ZHANGFEI 等蛋白的交叉反应 |
| 5.2.3 单克隆抗体亲和性的测定 |
| 5.2.4 腹水中抗体蛋白含量的测定 |
| 5.3 讨论 |
| 5.3.1 单克隆抗体制备与纯化 |
| 5.3.2 单克隆抗体的特异性 |
| 5.3.3 单克隆抗体亲和性的测定 |
| 5.4 小结 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 致谢 |
| 作者简介 |
（7）抗人膀胱癌单抗BDI-1的制备、鉴定及～（99m）Tc-标记的放射免疫显像实验研究（论文提纲范文）
| 提要 |
| 英文缩略表 |
| 第一部分文献综述 |
| 一、膀胱癌 |
| 二、BIU-87 细胞系 |
| 三、杂交瘤技术原理 |
| 四、单克隆抗体 |
| 五、肿瘤放射性核素显像的进展 |
| 六、立题依据 |
| 第二部分 实验研究 |
| 一、材料与方法 |
| （一） 主要试剂 |
| （二） 主要器材及仪器 |
| （三） 细胞株 |
| （四） 实验动物 |
| （五） 实验方法 |
| （六） 动物模型的建立 |
| （七） ~(99m)Tc-BDI-1 的制备 |
| （八） 皮下荷瘤裸鼠~(99m)Tc-BDI-1 显像研究 |
| （九） 皮下荷瘤裸鼠~(99m)Tc-球蛋白液体显像研究 |
| （十） 统计学方法 |
| 二、结果 |
| （一） 细胞实验结果 |
| （二） AKTA 层析仪收集抗体峰结果 |
| （三） SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳结果 |
| （四） 免疫荧光结果 |
| （五） 点印迹结果 |
| （六） ELISA 结果 |
| （七） ~(99m)Tc-BDI-1 和~(99m)Tc-球蛋白的物理性状和放化纯度结果 |
| （八） 动物模型建立结果 |
| （九） 动物实验结果 |
| 三、讨论 |
| （一） ~(99m)Tc-BDI-1的制备及标记 |
| （二） ~(99m)Tc-BDI-1和~(99m)Tc-球蛋白荷瘤裸鼠显像研究 |
| 四、结论 |
| 参考文献 |
| 博士期间发表文章 |
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 致谢 |
（9）膀胱癌的放射免疫显像与放射免疫治疗（论文提纲范文）
| 1 膀胱癌的放射免疫显像与放射免疫治疗的方法 |
| 1.1 静脉给药法 |
| 1.2 膀胱灌注法[5] |
| 2 单克隆抗体及其在膀胱癌放射免疫显像与放射免疫治疗中的应用 |
| 2.1 抗粘蛋白MCU1的单克隆抗体 |
| 2.1.1 C595 (又称为NCRC48) |
| 2.1.2 AUA1 |
| 2.1.3 HMFG |
| 2.2 抗皮质生长因子受体 (EGFR) 的单克隆抗体 |
| 2.3 直接针对膀胱癌细胞制备的单克隆抗体 |
| 2.3.1 BLCA-38, BLCA-8与C1-137 |
| 2.3.2 BDI-1 BDI-1是针对人膀胱癌细胞系BIU-87制备的单克隆抗体。 |
| 2.4 其他 |
| 2.4.1 抗癌胚抗原CEA单克隆抗体 |
| 2.4.2 针对cytokeratin8的单克隆抗体 |
| 3 存在问题与进展 |
（10）治疗性全抗体的表达及其研究进展（论文提纲范文）
| 1 全抗体的分τ结构和功能 |
| 2 表达系统 |
| 2.1 在哺乳动物细胞中的表达 |
| 2.2 在植物中的表达 |
| 2.3 在细菌中的表达 |
| 2.4 在动物乳腺细胞中的表达 |
四、CONSTRUCTION AND EXPRESSION OF A HUMAN-MOUSE CHIMERIC ANTIBODY AGAINST HUMAN BLADDER CANCER（论文参考文献）
- [1]131I-BDI-1在荷人膀胱癌裸鼠体内的药代动力学研究[J]. 郝攀,张春丽,马超,马欢,陈雪琪,殷雷,闫平,王荣福. 肿瘤学杂志, 2015(04)
- [2]抗人CD86单链抗体的研制及生物学功能研究[D]. 安萌. 苏州大学, 2013(11)
- [3]高亲和力抗膀胱癌单链抗体筛选及亲和力测定[J]. 晁开,黄华梁,郭霭光. 甘肃科学学报, 2009(02)
- [4]REV囊膜糖蛋白env基因的原核表达及单克隆抗体的制备与应用[D]. 张文娟. 山东农业大学, 2009(03)
- [5]CDR3导向抗体库法人源化抗膀胱癌Fab的鉴定[J]. 周丽君,王欲晓,王琰. 细胞与分子免疫学杂志, 2008(04)
- [6]GST-LRF融合蛋白纯化及单克隆抗体的制备[D]. 翁伟平. 西北农林科技大学, 2008(11)
- [7]抗人膀胱癌单抗BDI-1的制备、鉴定及～（99m）Tc-标记的放射免疫显像实验研究[D]. 潘雪娜. 吉林大学, 2007(03)
- [8]抗膀胱癌人-鼠嵌合抗体分离纯化及生物性能的测定[A]. 周丽君,王欲晓,白银,余莉章,王琰. 第九届全国肿瘤生物治疗学术会议论文集, 2006
- [9]膀胱癌的放射免疫显像与放射免疫治疗[J]. 张春丽,王荣福. 标记免疫分析与临床, 2005(03)
- [10]治疗性全抗体的表达及其研究进展[J]. 安怀杰,刘志刚,俞炜源. 生物技术通讯, 2004(03)