一、Transforming growth factor-β1 suppresses serum deprivation-induced apop-tosis via activation of ERK1/ERK2 and the inhibition of p38 activity and ceramide production（论文文献综述）
Matias Estaras,Antonio Gonzalez[1]（2021）在《Modulation of cell physiology under hypoxia in pancreatic cancer》文中研究指明In solid tumors, the development of vasculature is, to some extent, slower than the proliferation of the different types of cells that form the tissue, both cancer and stroma cells. As a consequence, the oxygen availability is compromised and the tissue evolves toward a condition of hypoxia. The presence of hypoxia is variable depending on where the cells are localized, being less extreme at the periphery of the tumor and more severe in areas located deep within the tumor mass. Surprisingly, the cells do not die. Intracellular pathways that are critical for cell fate such as endoplasmic reticulum stress, apoptosis, autophagy, and others are all involved in cellular responses to the low oxygen availability and are orchestrated by hypoxia-inducible factor. Oxidative stress and inflammation are critical conditions that develop under hypoxia. Together with changes in cellular bioenergetics, all contribute to cell survival. Moreover, cell-to-cell interaction is established within the tumor such that cancer cells and the microenvironment maintain a bidirectional communication. Additionally, the release of extracellular vesicles, or exosomes, represents short and long loops that can convey important information regarding invasion and metastasis. As a result, the tumor grows and its malignancy increases. Currently, one of the most lethal tumors is pancreatic cancer. This paper reviews the most recent advances in the knowledge of how cells grow in a pancreatic tumor by adapting to hypoxia. Unmasking the physiological processes that help the tumor increase its size and their regulation will be of major relevance for the treatment of this deadly tumor.
张树文[2]（2021）在《基于氧化应激探讨槲皮素防治椎间盘退变的实验研究》文中认为目的:（1）以D-半乳糖构建髓核细胞衰老模型,并探讨其诱导髓核细胞衰老的氧化应激机制;（2）分析槲皮素对D-半乳糖诱导髓核细胞衰老、衰老相关分泌表型以及细胞外基质合成、分解代谢的影响;探讨槲皮素通过p38 MAPK信号通路调控自噬减轻D-半乳糖诱导髓核细胞衰老退变的分子机制;（3）经皮细针纤维环穿刺建立SD大鼠尾椎椎间盘退变模型,探究槲皮素在椎间盘退变防治中的作用。方法:（1）通过CCK-8细胞活性实验、细胞周期实验评估D-半乳糖对髓核细胞增殖活性的影响;应用衰老相关标记物检测D-半乳糖对髓核细胞衰老及衰老相关分泌表型的影响;通过RT-q PCR、免疫荧光以及翻红O染色分析D-半乳糖诱导髓核细胞衰老对细胞外基质代谢的影响;通过检测细胞内活性氧ROS、超氧化物歧化酶SOD和脂质过氧化产物MDA明确D-半乳糖诱导髓核细胞衰老的氧化应激机制。（2）通过CCK-8细胞活性实验、细胞周期实验评估槲皮素对D-半乳糖抑制髓核细胞增殖活性的影响;通过β-半乳糖甘酶染色、β-半乳糖甘酶活性、RT-q PCR等分析槲皮素对D-半乳糖诱导髓核细胞衰老及衰老相关分泌表型的影响;使用条件培养基共培养模式分析槲皮素抑制髓核细胞衰老及衰老相关分泌表型对单核巨噬细胞迁移和极化作用的影响;通过Western blot分析槲皮素对MAPK（JNK、ERK、p38）信号通路的影响。（3）通过Western blot、免疫荧光以及电镜扫描明确槲皮素对髓核细胞自噬的激活作用;使用3-MA抑制剂抑制自噬明确槲皮素通过激活自噬减轻D-半乳糖诱导的髓核细胞衰老和细胞外基质降解的保护作用;使用p38MAPK抑制剂SB203580明确槲皮素通过调节p38MAPK介导的自噬保护椎间盘退变。（4）通过X线透视和MRI扫描在影像学上评估槲皮素防治椎间盘退变的作用;使用HE染色评估椎间盘的病理变化,阿利新蓝和翻红O-固绿染色、免疫组织化学分析椎间盘组织中细胞外基质蛋白聚糖的含量和分布;应用免疫组织化学评估槲皮素对细针穿刺诱导椎间盘细胞凋亡和自噬指标的影响。结果:（1）CCK-8细胞增殖活性和细胞周期结果表明50g/L的D-半乳糖明显降低髓核细胞的增殖活性并出现细胞周期G1期阻滞;β-半乳糖甘酶染色、β-半乳糖甘酶活性以及衰老相关蛋白p53、p21、p16均明显增加;RT-q PCR结果提示衰老相关分泌表型在衰老髓核细胞中明显增加,以CCL2和MMP13最为显着;RT-q PCR、免疫荧光、翻红O染色结果表明衰老髓核细胞中II型胶原和蛋白聚糖明显降低;D-半乳糖诱导氧化应激反应,包括ROS和MDA含量的升高以及超氧化物歧化酶SOD活性的降低。（2）CCK-8结果表明25u M槲皮素对髓核细胞活性无影响,且逆转D-半乳糖对髓核细胞活性的抑制作用;细胞周期结果表明槲皮素减轻D-半乳糖引起的G1周期阻滞;条件培养基对单核巨噬细胞的迁移和极化实验表明槲皮素抑制髓核细胞衰老的条件培养基减少了单核巨噬细胞的迁移和向M1型巨噬细胞的极化作用;Western blot结果表明槲皮素通过调节JNK、ERK、p38 MAPK信号通路保护髓核细胞免受氧化应激损伤。（3）Western Blot、免疫荧光以及电镜结果表明槲皮素可以激活自噬并通畅自噬流,自噬相关蛋白Beclin-1和LC3II/I的表达升高,p62表达降低,给予3-MA预处理髓核细胞明显降低了槲皮素对髓核细胞自噬激活的作用;抑制自噬减少了槲皮素对髓核细胞外基质的保护作用,促进衰老相关蛋白和衰老相关分泌的表达;槲皮素降低了由D-半乳糖引起的p38MAPK、m TOR的磷酸化水平,抑制p38MAPK的磷酸化可以激活髓核细胞自噬并促进自噬流通畅。（4）细针穿刺成功构建椎间盘退变模型,椎间盘高度指数明显降低、Pfirrmann分级明显升高;槲皮素延缓细针穿刺诱导的椎间盘退变,增加椎间盘高度指数,降低Pfirrmann分级。HE染色结果表明模型组髓核面积减小,细胞数量减少,髓核与纤维环结构紊乱,槲皮素延缓椎间盘退变的进展,改善病理改良评分。阿利新蓝、翻红O-固绿以及蛋白聚糖免疫组织化学染色结果提示穿刺模型组损伤区髓核组织蛋白聚糖大量丢失且异常分布,槲皮素有效减少了蛋白聚糖的丢失和异常分布。免疫组织化学分析凋亡相关蛋白Bax和自噬相关蛋白Beclin-1,研究结果表明槲皮素处理减轻髓核细胞凋亡并促进髓核细胞的自噬水平。结论:（1）50g/L的D-半乳糖通过氧化应激途径诱导髓核细胞衰老和衰老相关分泌表型,降低髓核细胞活性,阻滞细胞周期,且加速细胞外基质分解代谢。（2）槲皮素预处理通过调控MAPK信号通路改善D-半乳糖诱导的髓核细胞衰老和衰老相关分泌表型的表达。（3）槲皮素通过p38MAPK介导的自噬抑制氧化应激诱导髓核细胞衰老退变。（4）槲皮素减轻细针穿刺诱导的椎间盘退变,影像学和组织病理学结果证实了其对椎间盘退变潜在的防治效果。
程劲[3]（2020）在《氢化镁调控PLIN2缓解结晶肾损伤的作用和机制研究》文中指出研究背景肾结石是全球的常见疾病,可以导致慢性肾脏病,甚至肾脏丧失,给许多国家带来了沉重的社会经济和医疗负担。2017年全国关于肾结石的流行病调查显示:肾结石的发生率为6.4%,且10年的复发率为52%。肾结石的发病率在全球范围内都在增加,这些增加在性别、种族和年龄上都可以看到,代谢功能障和饮食习惯的改变可能是一个关键的驱动力,此外,全球变暖可能会影响这些趋势。最近的流行病学研究表明,肾结石与心血管疾病、高血压、肥胖、糖尿病、代谢综合征有关,这些都是公认的慢性肾脏病（Chronic Kidney Disease,CKD）危险因素。因此,深入研究肾结石的发生、发展机制,加强预防和治疗迫在眉睫。大量的研究已经证实80-90%的结石成分为草酸钙（calcium oxalate,Ca Ox）。无论是动物实验还是临床实验均显示,肾小管上皮细胞暴露于高草酸或Ca Ox结晶中,晶体中会产生过量的活性氧（Reactive Oxygen Species,ROS）,导致损伤和炎症。在结石患者和实验诱导的Ca Ox肾结石大鼠的尿液中都可以检测到氧化应激和炎症的主要标志。抗氧化处理可以减少草酸钙结晶肾动物模型的肾脏损伤。由此可见,氧化应激和炎症反应在整个Ca Ox结石形成、进展过程中起着重要作用。氢作为自然界最简单和最丰富的元素,曾经被认为对高等生物没有任何生物学效应,自日本科学家发现氢气可通过选择性抗氧化治疗疾病后,氢气在各个领域得到广泛的关注和研究,且发现氢气在多种疾病模型和人类疾病中显示出预防和治疗效果。近年来,固态氢载体的生物学效应,成为氢医学的热点。纳米氢化镁（MagnesiumHydride,Mg H2）是一种新型高效的镁基储氢材料,具有高储氢、质量轻等优点,能够水解缓慢释放氢气,持续时间长。2016年首次有学者将氢化镁用于生物学研究,研究结果提示氢化镁能够改善喂食高脂饮食的野生型小鼠的血浆甘油三酯水平,并延长了它们的平均寿命,可能的机制是氢化镁在体内产生氢气,氢气刺激过氧化物酶体增殖物激活受体γ共激活因子-1α（PGC-1α）基因表达促进脂肪酸代谢。因为氢化镁较氢气具有携带方便,使用方便,且体内缓慢释放氢气,具有一定的量效关系,所以推测氢化镁对结晶肾损伤模型应有一定的改善作用。但是氢化镁对结晶肾损伤的保护机制仍不明确,需要进一步研究。Perilipin2（PLIN2）是一种脂肪相关分化蛋白,主要定位于细胞内脂滴表面,促进胞内脂滴形成,保护甘油三酯免受脂解。PLIN2作为特异性性标记物可以推测动脉粥样硬化的脂质积聚情况,而且还可以影响多种代谢相关性疾病如胰岛素抵抗、糖尿病、脂肪肝及肥胖症等都。本研究旨在探讨氢化镁是否具有改善结晶肾模型肾损伤的程度及是否能够通过PLIN2发挥其改善作用。研究目的一、氢化镁改善草酸盐诱导的结晶肾损伤的作用研究二、氢化镁缓解结晶肾损伤的潜在靶点筛选三、氢化镁调控PLIN2缓解结晶肾损伤的机制研究研究方法一、动物模型的建立及分组动物实验一:购买36只雄性野生型C57B/L6小鼠（8周龄）,随机分为6组,分别是盐水组（Con,n=6）、乙醛酸盐组（Gly,n=6）、乙醛酸盐+氢化镁50mg/Kg组（Gly+MH50,n=6）、乙醛酸盐+氢化镁100mg/Kg组（Gly+MH100,n=6）、乙醛酸盐+氢化镁200mg/Kg组（Gly+MH200,n=6）、乙醛酸盐+氢化镁400mg/Kg组（Gly+MH400,n=6）。动物实验二:另40只雄性C57BL/6小鼠（8周龄）,随机分为5个实验组:盐水组（Con,n=8）;乙醛酸诱导的草酸钙结晶组（Gly,n=8）;乙醛酸+氢化镁组（GH,n=8）;乙醛酸+氢氧化镁组（GOH,n=8）;乙醛酸+玉米油组（GV,n=8）。动物实验一:提前2天分别使用50、100、200、400 mg/kg剂量的Mg H2灌胃治疗。第3天给予乙醛酸盐腹腔注射造模,1天一次,连续注射5天,第8天处死小鼠。动物实验二:提前2天分别予氢化镁（200mg/kg）、氢氧化镁（450mg/kg）、玉米油0.1ml灌胃,第3天给予乙醛酸盐腹腔注射造模,1天一次,连续注射5天,第8天处死小鼠。二、肾组织病理染色肾组织取材固定后,进行常规脱水、透明、浸蜡、包埋、切片、烘片,按照实验步骤,进行H&E、Masson、Vonkossa、免疫组化、免疫荧光等染色,使用光学显微镜和荧光显微镜进行拍照。三、小鼠肾功能及氧化应激指标的检测小鼠麻醉后,眼球取血、静置、离心、取上清,备用。采取竞争法酶联免疫吸附检测技术（ELISA）,购买相应检测指标的Kit,根据实验步骤检测。四、细胞培养、分组和干预使用小鼠肾小管上皮细胞（TCMK-1）作为体外实验细胞,配制DMEM培养基,在DMEM培养基中加入10%胎牛血清和1%双抗（青霉素-链霉素-两性霉素B溶液）。细胞实验分组:Con组:TCMK-1细胞,每天定时观察细胞状态、更换新鲜培养基未添加任何刺激;Na Ox组:加入草酸钠浓度（0.5m M）共孵育,在培养箱中培养24小时;Na Ox+H2组:加入草酸钠浓度（0.5m M）后放入含氢细胞培养箱12小时,12小时后取出放培养箱中继续培养。Con+H2组:TCMK-1细胞同样放入含氢细胞培养箱12小时,12小时后取出放培养箱中继续培养。五、细胞活力检测使用CCK-8检测试剂盒检测,根据实验步骤,在96孔培养板中加入不同浓度的草酸钠,在培养箱中孵育不同的时间,另一个96孔板增加含氢培养,最后加入CCK-8溶液,利用酶标仪测定其在450nm处OD值。六、细胞内ROS检测配制DCFH-DA至10umol/l,将收集好的细胞置于DCFH-DA中,放入细胞培养箱内20分钟取出,流式细胞仪检测DCF水平。七、细胞线粒体膜电位的检测根据试剂盒的说明将CCCP（10m M）1:1000加入到细胞培养液中,配成终浓度10μM,孵育细胞20分钟,装载JC-1,通过流式细胞仪检测线粒体的膜电位。八、组织与细胞蛋白检测利用总蛋白提取试剂提取组织或细胞蛋白,研磨、离心、取上清液,BCA法检测样品蛋白的浓度,加入SDS-PAGE蛋白上样缓冲液（5X）,100℃金属浴,5-10min。-20℃冰箱保存,通过蛋白免疫印迹法检测进目的蛋白水平。九、组织和细胞RNA检测使用Trizol试剂提取组织或细胞总RNA,检测RNA浓度,利用商品化kit使m RNA转变为c DNA,SYBR Green染料法检测实时荧光定量PCR。十、代谢组学、高通量转录组检测和生物信息学预测利用超高压液相色谱-四级杆-时间飞行串联质谱（UPLC/Q-TOF-MS）方法检测肾组织代谢组学。高通量转录组检测步骤:肾组织总RNA提取、总RNA纯度和完整性检测、文库构建、上机测序、测序数据质控、序列比对分析、表达量分析、表达量差异分析、RNA-SEQ筛选差异基因、GO分析及KEGG分析、差异基因筛选及验证。使用NCBI GEO Data Sets验证PLIN2在肾脏的表达水平。预测PLIN2上游转录因子步骤:首先利用NCBI网站（https://www.ncbi.nlm.nih.gov/）搜索PLIN2上游启动子序列;接着利用UCSC数据库（http://genome.ucsc.edu/）预测与PLIN2启动子结合的转录因子;然后利用JASPAR数据库（http://jaspar.genereg.net/）分析预测的转录因子与PLIN2上游启动子序列的结合位点。十一、统计学方法计量数据采用（均数±标准误）表示,应用Grapha Pad软件绘制统计图表绘制及分析数据,采用两独立样本t检验和单因素方差分析one-way ANOVA进行各组之间的统计分析,各组间两两比较采用Tukey post-hoc检验,p<0.05表示组间有统计学差异。结果一、氢化镁改善结晶肾损伤的病理评价（一）氢化镁治疗结晶肾损伤的具有剂量效应关系通过给予不同剂量的氢化镁干预乙醛酸盐诱导结晶肾损伤小鼠,肾组织行H&E、Masson、Vonkossa染色等,发现随着氢化镁剂量的增加,肾损伤程度逐渐减轻,而且结晶/结石沉积有所减少,氢化镁200mg/kg和400mg/kg改善作用无明显差异,为后续动物实验奠定了基础。（二）氢化镁改善结晶肾损伤模型肾功能及肾小管损伤小鼠肾组织病理结果显示,乙醛酸盐诱导的小鼠肾小管急性损伤明显,伴有大量草酸钙结晶沉积,且纤维化相关指标FN、TGF-β显着高表达,TUNEL染色,凋亡细胞明显,氢化镁治疗组,不仅小管急性损伤有所改善,草酸钙结晶也明显减少及FN、TGF-β、凋亡细胞均显着减少。同时氢化镁治疗组小鼠肾功能有所改善。氢氧化镁组和玉米油组均无上述作用。二、氢气对草酸钠处理后的TCMK-1细胞活力及氧化应激的影响细胞CCK8结果提示氢气可以改善草酸钠诱导的TCMK-1细胞活力的下降。草酸钠诱导TCMK-1细胞内ROS水平升高,并使线粒体膜电位下降,氢气能够降低草酸钠诱导产生的ROS,并通过上调线粒体膜电位改善线粒体的功能。三、小鼠肾组织代谢组学分析用UPLC-Q-TOF/MS分析5组小鼠肾组织匀浆（Con,Gly,GH,GOH,GV）样品,结果显示草酸钙晶体肾损伤模型出现代谢紊乱,主要包括能量代谢、磷脂代谢和氨基酸代谢途径的变化,而氢化镁治疗在一定程度回调上述代谢紊乱,其中以磷脂代谢回调最显着。磷脂作为生物膜的主要成分,在氢化镁治疗后显着逆转,表明氢化镁的治疗可能是通过细胞膜保护实现的。四、小鼠肾组织高通量转录组测序与分析利用RNA-SEQ对氢化镁治疗的结晶肾小鼠进行差异基因筛选,得到差异基因总数2539,其中上调基因总数1543个,下调基因996个,并对差异基因进行GO分析及KEGG分析。选择部分差异基因进行q RT-PCR验证,与测序结果相一致。结合肾组织代谢组学结果,选择与脂质代谢高度相关的PLIN2基因作为下一步研究对象。五、PLIN2相关转录因子生物信息学预测和体内外验证利用生物信息学筛选出4个重要的PLIN2上游转录因子,分别是STAT4、C-JUN、PPARγ和PPARα,选择强相关的C-JUN和STAT4进行下一步验证发现p-C-JUN在结晶肾小鼠肾组织中高表达,且定位于肾小管上皮细胞胞核内,体内外实验WB检测也证实p-C-JUN在模型组升高,氢化镁治疗后可回调,与PLIN2趋势一致,p-STAT4在小鼠模型中没有高表达,且没有定位在上皮细胞核内。六、氢化镁改善结晶肾损伤小鼠氧化应激、炎症和脂质过氧化水平体内实验:利用ELISA方法,检测结晶肾小鼠血清炎症指标（TNF-α,IL-1β）,氧化应激指标（GSH,NO）,脂质过氧化指标（MDA,4HNE）,结果提示,氢化镁可以有效的改善结晶肾损伤的炎症反应、氧化应激和脂质过氧化水平。体外实验:流式细胞仪记录草酸钠处理后TCMK-1细胞内ROS的水平和线粒体膜电位,结果提示,Na Ox组细胞内ROS水平升高,线粒体膜电位下降,氢气处理后,上述指标均可回调。结论一、氢化镁能够有效的缓解结晶肾肾小管损伤,改善肾功能,改善机体炎症、氧化应激和凋亡水平。二、氢化镁可能是通过清除ROS,抑制C-JUN活化,下调PLIN2,改善脂质过氧化来实现的。
金山[4]（2020）在《TGF-β1的岩藻糖基化修饰对卵巢癌细胞线粒体自噬的影响及机制》文中研究指明目的:在课题组前期工作基础上,检测TGF-β1对卵巢癌细胞自噬和线粒体自噬的影响;构建Lewis y抗原过表达或低表达的卵巢癌细胞系,检测TGF-β1的岩藻糖基化修饰对卵巢癌自噬和线粒体自噬的影响,并对其调控机制进行初步探讨,为卵巢癌的治疗寻找新的靶点提高理论依据。研究方法:1、通过Western blot检测不同浓度和时间点的TGF-β1作用下卵巢癌细胞自噬相关蛋白表达的变化。通过免疫荧光检测TGF-β1处理后卵巢癌细胞中LC3变化情况。添加自噬抑制剂氯喹（Chloroquine,CQ）阻断自噬流,通过Western blot、免疫荧光等方法观察TGF-β1作用后卵巢癌细胞自噬流的变化情况。瞬时转染双荧光标记的LC3腺病毒后检测TGF-β1作用下卵巢癌细胞自噬流的变化情况。通过TMRM染色检测TGF-β1作用前后卵巢癌细胞线粒体膜电位变化情况。继而通过Western blot检测不同浓度和时间点TGF-β1作用下对卵巢癌细胞线粒体自噬发生的影响。通过免疫荧光检测TGF-β1作用下线粒体自噬相关蛋白PINK1的表达情况。通过Annexin V/FITC流式方法检测不同浓度TGF-β1作用下卵巢癌细胞凋亡发生情况。随之添加自噬抑制剂3-Methyladenine（3-MA）后检测卵巢癌细胞凋亡发生水平的变化。2、首先分别转染FUT1质粒和shFUT1病毒,构建Lewis y抗原过表达和低表达卵巢癌细胞模型,检测Lewis y和TGF-β1的表达,并利用免疫共沉淀方法验证TGF-β1和Lewis y抗原结构关系。我们继而在此细胞模型的基础上重新检测第一部分方法内容。3、通过Western blot检测TGF-β1作用后卵巢癌细胞中TAK1蛋白表达。转染siTAK1后分别通过Western blot、免疫荧光、双荧光标记的LC3腺病毒、TMRM检测TGF-β1作用下干扰TAK1表达对卵巢癌细胞自噬、自噬流、线粒体膜电位及线粒体自噬发生的变化情况;同时检测相关通路变化情况。结果:1、随着TGF-β1处理浓度的升高自噬因子LC3Ⅱ/Ⅰ、Beclin-1、Atg5和Atg7的表达水平也增高,同时p62的蛋白表达下调,并均呈浓度依赖性。不同时间点TGF-β1作用下,LC3Ⅱ/Ⅰ、Beclin-1、Atg5、Atg7等在12、24、48h达到蛋白水平的峰值,p62则与时间呈负相关。用免疫荧光检测LC3的变化,TGF-β1作用后LC3荧光呈红色明亮小斑点,而未处理组荧光呈散在红色荧光。用CQ处理TGF-β1添加前后的细胞,TGF-β1处理后LC3的表达水平升高更明显,同时Beclin-1、Atg5、Atg7、p62等蛋白表达情况进一步验证了上述结果。免疫荧光检测下,TGF-β1组LC3的红色荧光小斑点增多更明显。用Ad-m RFP-GFP-LC3腺病毒转染细胞,与对照组相比,TGF-β1显着促进呈黄色荧光信号的自噬小体的积累。TMRM检测提示TGF-β1引起细胞线粒体膜电位去极化。不同浓度TGF-β1处理后,PINK1、Bnip3、Parkin等线粒体自噬蛋白表达均随着TGF-β1浓度升高而增高,呈浓度依赖性。不同时间点TGF-β1作用下,PINK1、Bnip3、Parkin等蛋白均在24h达到峰值;免疫荧光检测发现与对照组相比,TGF-β1作用24h后PINK1荧光明显增强,表达明显升高。流式检测发现,随着TGF-β1浓度的增加,卵巢癌细胞凋亡率亦增加,呈浓度依赖性;自噬抑制剂3-MA处理后可以部分逆转TGF-β1导致的细胞凋亡。2、FUT1基因转染后,细胞中Lewis y表达增加,TGF-β1及其上的Lewis y表达较转染前增加,同时发现自噬相关蛋白LC3Ⅱ/Ⅰ、Beclin-1、Atg5和Atg7的蛋白表达均增高,p62蛋白水平下调;同时促进TGF-β1对细胞自噬的作用。FUT1基因转染后,细胞TMRM染色荧光变弱,线粒体膜电位呈去极化;并促进了TGF-β1引起的线粒体膜电位去极化。FUT1基因转染后,线粒体自噬相关蛋白PINK1、Bnip3、Parkin等表达增高,且促进TGF-β1对线粒体自噬的作用。转染shFUT1后结果与之相反。shFUT1转染后,细胞凋亡率增高,部分逆转TGF-β1引起的细胞凋亡。3、TGF-β1作用下细胞中TAK1蛋白表达增加。在TGF-β1作用下,转染siTAK1后抑制卵巢癌细胞自噬以及线粒体自噬相关蛋白的表达和线粒体膜电位的去极化;FUT1基因转染后,部分逆转了上述现象。在TGF-β1作用下,转染siTAK1后,PI3K、Akt、ERK1/2无明显改变,但p-PI3K、p-Akt、p-ERK1/2表达明显下调;添加MEK或PI3K通路抑制剂后TAK1对自噬和线粒体自噬的作用下调。TGF-β1处理后,mTOR表达无明显改变,p-mTOR表达下调,FUT1基因转染后,p-mTOR蛋白下调更加明显,干扰TAK1后则减弱了p-mTOR蛋白的下调。结论:1、TGF-β1促进卵巢癌细胞自噬的发生,并呈浓度依赖性;引起细胞线粒体膜电位去极化,促进卵巢癌细胞线粒体自噬的发生。TGF-β1引起细胞发生凋亡,呈浓度依赖性;抑制自噬可以部分逆转TGF-β1诱导的细胞凋亡。2、TGF-β1存在Lewis y抗原修饰,且TGF-β1的Lewis y抗原修饰进一步促进卵巢癌细胞自噬的发生;加剧线粒体膜电位的去极化,增强线粒体自噬的发生。TGF-β1的Lewis y抗原修饰减弱TGF-β1诱导细胞凋亡的作用。3、TGF-β1通过TAK1诱导卵巢癌细胞发生自噬,引起膜电位的去极化以及线粒体自噬的发生,TGF-β1的Lewis y抗原修饰进一步促进上述作用。TGF-β1与其受体结合激活TAK1,通过磷酸化PI3K/Akt以及ERK1/2信号通路,调控下游mTOR蛋白的磷酸化,进而影响自噬和线粒体自噬相关蛋白的表达,从而调控自噬和线粒体自噬的发生。
Mei Li Ng,Nagendra S Yarla,Mario Menschikowski,Olga A Sukocheva[5]（2018）在《Regulatory role of sphingosine kinase and sphingosine-1-phosphate receptor signaling in progenitor/stem cells》文中研究表明Balanced sphingolipid signaling is important for the maintenance of homeostasis. Sphingolipids were demonstrated to function as structural components, second messengers, and regulators of cell growth and survival in normal and disease-affected tissues. Particularly, sphingosine kinase 1 （SphK1） and its product sphingosine-1-phosphate （S1P） operate as mediators and facilitators of proliferation-linked signaling. Unlimited proliferation （selfrenewal） within the regulated environment is a hallmark of progenitor/stem cells that was recently associated with the S1P signaling network in vasculature, nervous,muscular, and immune systems. S1P was shown to regulate progenitor-related characteristics in normal and cancerstemcells（CSCs） viaG-protein coupled receptorsS1Pn（n=1 to 5）. The SphK/S1P axis is crucially involved in the regulation of embryonic development of vasculature and the nervous system, hematopoietic stem cell migration, regeneration of skeletal muscle, and development of multiple sclerosis. The ratio of the S1P receptor expression, localization, and specific S1P receptoractivated downstream effectors influenced the rate of selfrenewal and should be further explored as regeneration related targets. Considering malignant transformation,it is essential to control the level of self-renewal capacity.Proliferation of the progenitor cell should be synchronized with differentiation to provide healthy lifelong function of blood, immune systems, and replacement of damaged ordead cells. The differentiation-related role of SphK/S1P remains poorly assessed. A few pioneering investigations exploredpharmacologicaltoolsthattargetsphingolipid signaling and can potentially confine and direct self-renewal towards normal differentiation. Further investigation is required to test the role of the SphK/S1P axis in regulation of self-renewal and differentiation.
李国华[6]（2018）在《orexin-A对缺氧海马神经元的作用及机制研究》文中研究指明前言阻塞性睡眠呼吸暂停综合征（obstructive sleep apnea,OSA）是一种十分普遍但并未被全面认识的疾病,对各个年龄段的患者均可带来心血管及神经系统的健康危害。其发作时由于频繁的呼吸暂停和上呼吸道部分或完全阻塞导致睡眠时反复发生间歇性低氧血症、高碳酸血症,微觉醒或觉醒,扰乱睡眠结构[1]。近年来,阻塞性睡眠呼吸暂停综合征的患者经常被报道出现认知损害[2-4]。这种认知障碍与相关大脑区域的损伤密切相关,尤其是海马,在间歇性缺氧产生（intermittent hypoxi,IH）过量的一系列活性氧簇（reactive oxygen species,ROS）[5]的介导下可能发生细胞凋亡,引起空间记忆和学习受损[6]。OSA患者经常伴随着orexin-A水平的增加[7,8]。Orexin是一种多功能兴奋性神经肽,通过激活 orexin-1 受体（orexin receptor 1,OX1R）和 orexin-2 受体（orexin receptor 2,OX2R）来发挥多种生理功能的调节作用,如睡眠-觉醒的调节。此外,Orexin系统还参与海马等与学习记忆功能相关脑区的功能活动。虽然进行了诸多研究OSA与认知障碍的相关研究,但是,目前OSA引起认知功能损害的确切机制尚不完全明确。本实验拟从体外观察orexin-A对间歇性缺氧状态下海马神经元的作用,并进一步探究其潜在作用通路及分子机制。目的建立大鼠海马神经元间歇性缺氧模型,利用检测细胞凋亡率评价orexin-A对缺氧状态下海马神经元的影响。首先,利用Western blot检测p-ERK1/2的表达,以明确orexin-A诱导ERK1/2磷酸化加重了缺氧状态下海马神经元的损伤,并采用MEK阻滞剂U0126抑制ERK1/2通路以进一步验证;其次,利用siRNA技术分别沉默PLC β 1和PLC β 4,以明确在引起ERK1/2活化的orexin-A-OXlR/OX2R-Gq-PLC-/PKC信号通路中具体是哪一个PLC亚单位参与。方法1.急性分离出生24h内的Wistar大鼠海马组织,用胰蛋白酶消化与机械吹打相结合的方法分离海马神经元进行原代细胞培养。培养过程中观察神经元的形态学特征,并采用免疫细胞化学技术,用神经元特异性烯醇化酶（neuron-specific enolase,NSE）抗体鉴定神经元纯度。2.培养4d的大鼠海马神经元用于实验研究,放入三气培养箱中,缺氧（1%02,5%CO2 和 94%N2）5min 复氧（21%O2,5%CO2 和 74%N2）1Omin,共进行 64 次循环;orexin-A处理组海马神经元在给予间歇性缺氧后,加入orexin-A使其终浓度分别为1nM,3nM,1OnM和100nM。继续培养48h后,收集各组细胞Annexin V-FITC/PI双染后入流式细胞仪进行细胞凋亡率检测。3.将体外培养4d的大鼠海马神经元随机分为对照组、IH组、IH+orexin-A（100Nm/L）组和 IH+orexin-A（100Nm/L）+U0126 组,干预处理后继续培养 48h,提取各组海马神经元总蛋白,采用Western blot法检测p-ERK1/2的表达。4.将体外培养4d的大鼠海马神经元随机分为对照组、IH组、IH+orexin-A（100Nm/L）组和 IH+orexin-A（100Nm/L）+U0126 组,干预处理后继续培养 48h,收集各组细胞Annexin V-FITC/PI双染后入流式细胞仪进行细胞凋亡率检测。5.将体外培养4d的大鼠海马神经元随机分为control siRNA（-）组、control siRNA（+）组、siRNA-PLCβ1（-）组、siRNA-PLCβ1（+）组、siRNA-PLCβ 4（-）组和 siRNA-PLC β 4（+）组。（-）组给予 1H 处理、（+）组给予 IH+orexin-A干预处理后继续培养48h,提取各组海马神经元总蛋白,采用Western blot法检测p-ERK1/2的表达。6.将体外培养4d的大鼠海马神经元随机分为control siRNA（-）组、control siRNA（+）组、siRNA-PLCβ1（-）组、siRNA-PLCβ1（）组、siRNA-PLCβ 4（-）组和 siRNA-PLC β 4（+）组。（-）组给予 IH 处理、（+）组给予 IH+orexin-A干预处理继续培养48h,收集各组细胞Annexin V-PE/7AAD双染后入流式细胞仪进行细胞凋亡率检测。结果1.细胞形态学特征:刚种植时所有细胞呈圆形,胞体小而透亮,大小均匀,悬浮分布于种植液中。种植24h后可见细胞贴壁良好,胞体增大,折光性好,呈梭形或不规则形,绝大部分细胞伸出短小突起。种植40h后神经元胞体进一步增大,突起明显伸长,可见清晰树突和轴突,相邻细胞间形成联系,突起进一步延伸,相互交织成网状。第7-10天胞体饱满透亮,突起连接更为紧密,细胞呈现集中分布趋势。2.神经元纯度检测:将培养8d的海马神经元爬片采用免疫细胞化学技术,神经元的胞浆和突起被染成绿色,镜下计数后神经元纯度可达90.5%。3.海马神经元凋亡率检测:①海马神经元经间歇性缺氧处理后,分别于6h、24h、48h进行神经细胞凋亡率检测,结果显示,海马神经元的凋亡率逐渐从6.73±1.22%上升至 10.80±0.92%、15.5±1.51%和 25.8±2.01%。②海马神经元给予间歇性缺氧再经过orexin-A干预处理,48小时后进行细胞凋亡率检测。与单纯给予间歇性缺氧的海马神经元凋亡率（26.8±1.87%）相比,orexin-A处理后海马神经元凋亡率增加,分别是28.5±2.11%（orexin-A 1Nm/L）、31.8±1.98%（orexin-A3Nm/L）、36.2±2.27%（orexin-A 10Nm/L）和 35.5±2.46%（orexin-A 100Nm/L）并随orexin-A终浓度的升高而进一步增加。当orexin-A 终浓度≥10Nm/L时,海马神经元凋亡率有显着性增高（P<0.05）。4.慢病毒转染效率测定三组腺病毒（control siRNA、siRNA-PLCβ1 和 siRNA-PLCβ4）转染效率均>90%。5.Orexin-A加重缺氧海马神经元损伤的作用通过ERK1/2磷酸化产生①大鼠海马神经元给予间歇性缺氧处理后,与对照组相比p-ERK1/2表达量增加（P<0.05）;再加入orexin-A作用后,p-ERK1/2表达量进一步升高,显着高于IH组（P<0.05）;给予U0126预处理后,海马神经元p-ERK1/2表达量低于IH+orexin-A 组（P<0.05）。②IH组大鼠海马神经元与对照组相比凋亡率增加（P<0.05）;加入orexin-A作用后,细胞凋亡率较IH组又明显升高（P<0.05）;给予U0126预处理的IH+orexin-A组海马神经元凋亡率较IH+orexin-A组显着降低（P<0.05）。（见图3）6.Orexin-A通过PLCβ1引起ERK1/2磷酸化加重缺氧海马神经元损伤①大鼠海马神经元经过IH+orexin-A处理后,control siRNA（+）组和siRNA-PLCβ4（+）组p-ERK1/2表达量分别较各自对照组control siRNA（-）组和siRNA-PLCβ4（-）组显着升高（P<0.05）;而 siRNA-PLCβ1（+）组经过 IH+orexin-A处理后,p-ERK1/2表达量较对照组siRNA-PLCβ1（-）组无明显变化。②沉默大鼠海马神经元PLCβ1基因后给予IH+orexin-A处理,细胞凋亡率较对照组siRNA-PLCβ1（-）组明显降低（P<0.05）;而沉默大鼠海马神经元PL Cβ1基因组和空病毒组细胞凋亡率较各自对照组无明显变化。结论1.本课题所采用方法培养的大鼠海马神经元在数量、纯度及存活能力方面均较好。2.间歇性缺氧诱导的海马神经元凋亡是一个渐进性过程,呈时间依赖性。3.Orexin-A对缺氧海马神经元具有损伤性作用。同时这种损害性作用具有浓度依赖性,在orxin-A终浓度≥10Nm/L时出现,随着orexin-A终浓度的增加,细胞凋亡率增加。4.Orexin-A加重缺氧海马神经元损伤的作用通过ERK1/2磷酸化产生。U0126可抑制orexin-A诱导的ERK1/2磷酸化水平升高,减轻orexin-A对缺氧状态下海马神经元的损伤性作用,降低细胞凋亡率,发挥了细胞保护作用。5.Orexin-A通过PLC亚单位-PLCβ1引起ERK1/2磷酸化加重缺氧海马神经元损伤,而不是PLCβ4。
李星[7]（2017）在《铅致阿尔茨海默症样变神经毒性及对相关通路蛋白表达的影响》文中认为铅是一种常见的神经毒物,对神经系统具有异常亲和力,可诱发严重的神经功能障碍和学习认知功能损伤。学习记忆和认知是高级中枢神经系统功能的基本体现。海马不仅是学习记忆发生与认知功能塑形的关键场所,也是铅神经毒性作用的主要靶位点。胰岛素/Pi3k/Akt和MAPKs信号通路的活化表达是细胞增殖、分化、凋亡、迁移等过程发生和发展的分子基础,其表达紊乱或活化异常可导致一系列疾病状态及病理表现的发生。阿尔茨海默症（Alzheimer‘s disease,AD）是一种原发型进行性神经退行性疾病,其发病受环境和遗传因素的共同调节。进行性认知功能障碍,及学习记忆能力损伤是AD的典型临床症状,该过程中常伴随Tau蛋白过磷酸化、神经元大量凋亡、突触结构/功能退化及通路蛋白表达异常。虽然AD发病机制尚不清楚,但大量研究数据提示,Aβ表达异常和蓄积可能是各种原因诱导AD发病的共同通路。近期研究发现,AD可能并不属于单纯的老年型疾病,其发病亦具有一定的胚胎源性,这符合成人疾病的胚胎基础假说（Fe BAD）的论述。已知孕哺期铅暴露会诱发严重影响子代中枢神经系统的正常发育;且人群研究结果证实发育早期铅暴露与儿童智力损伤,空间学习记忆能力障碍、认知和注意力下降具有强相关性,但该机制尚不十分清楚。本研究拟运用小鼠孕哺期铅暴露模型和PC12细胞染毒模型,检测孕早期铅暴露对子代小鼠血铅和海马铅含量、海马Aβ相关蛋白（IDE）和学习记忆相关蛋白（NGF）表达的影响;结合体外实验,观察铅暴露对神经细胞生长发育的影响,探讨该过程中可能涉及的AD相关蛋白,神经发育相关因子及MAPKs信号通路蛋白表达变化,对铅的细胞和神经毒性进行阐述和分析,为AD发病机理的探讨及神经功能修复提供理论依据。目的1.通过构建铅中毒动物模型,比较孕哺期铅暴露对仔鼠学习记忆能力的影响,检测各浓度铅暴露组海马IDE和NGF的差异表达,评估孕哺期母体铅暴露对子代小鼠神经元发育和功能表达的影响,进而说明铅的致AD样病变作用。2.通过构建体外细胞染毒模型,分析对比不同剂量及不同时间铅暴露对AD相关细胞因子,神经发育相关因子和胞内信号蛋白表达的影响,探索铅暴露对Aβ及其衍生物表达的影响,说明铅致AD样病变作用并探讨其对信号传导通路表达的影响,为AD的防治和铅毒性的干预治疗提供线索。材料与方法1研究对象动物模型:将怀孕SPF级昆明小鼠随机分为4组,每组10只,1个对照组及3个铅暴露组。孕鼠自怀孕第1d起（E0）至仔鼠断乳时,分别给予醋酸铅含量为0%（对照组）、0.1%（低剂量组）、0.2%（中剂量组）和0.5%（高剂量组）的去离子饮用水。仔鼠出生后仍由母鼠喂养照料至PND21。细胞株:选用褐家鼠肾上腺嗜铬细胞瘤PC12细胞株作为实验对象,经分化处理后,分别给予终浓度为0μM、20μM、100μM和500μM的醋酸铅染毒。2.方法2.1动物实验2.1.1采用Z-5000石墨炉原子吸收光谱仪测定仔鼠血铅和海马铅浓度。2.1.2采用Morris水迷宫实验评价仔鼠的学习记忆能力。2.1.3采用Western Blot检测IDE和NGF在不同剂量铅暴露组中的表达量。分别采用免疫组化和免疫荧光技术对IDE和NGF在海马组织中的分布和表达进行了描述（对照组和高剂量组）。2.2细胞实验2.2.1采用MTT法检测不同暴露浓度及暴露时间对细胞活性的影响。2.2.2采用Western Blot技术检测AD相关蛋白（Aβ和Aβ寡聚体）,神经发育相关蛋白（IGF1/IGF1R）及胞内信号通路相关蛋白（IR、p-Akt、IDE、ERK1/2、JNK1/2/3、P38）蛋白表达的改变,采用实时定量PCR分析APP、INSR、IDE和IGF1/IGF1R基因m RNA的表达。3.统计分析实验使用SPSS 21.0软件包（SPSS Inc,USA）进行统计分析,两组数据比较采用独立样本t检验,多组数据间比较采用单因素方差分析,两两比较使用Bonferroni检验法,若不满足正态分布,则使用秩和检验,若数据满足正态分布则以均数±标准差（x±s）表示,检验水平为α=0.05。结果1.动物实验结果1.1孕哺期母体铅暴露对仔鼠血铅、海马铅含量及其学习记忆能力的影响不同剂量孕哺期铅暴露后,PND21仔鼠血铅和海马铅含量显着高于对照组（P<0.05）。Morris水迷宫结果显示,中、高暴露剂量组仔鼠的逃避潜伏期和错误次数均显着高于对照组（P<0.05）。1.2.孕哺期母体铅暴露对仔鼠海马组织IDE和NGF蛋白表达的影响1.2.1 Western Blot结果显示,各铅暴露组仔鼠海马IDE和NGFβ蛋白表达水平较对照组均明显降低（P<0.05）。1.2.2免疫组化结果显示,高剂量铅暴露组仔鼠海马CA1区NGF免疫组化阳性反应物的平均灰度值明显低于对照组（P<0.05）。1.2.3免疫荧光实验结果显示,高剂量铅暴露组仔鼠海马神经元活性剂IDE免疫荧光抗体的平均光密度均显着低于对照组（P<0.05）。2.细胞实验结果1.醋酸铅处理对PC12细胞增殖的影响根据细胞的数量变化及形态学改变最终选择0μM、20μM、100μM和500μM醋酸铅暴露浓度及12h、24h和72h来开展后续研究。2.醋酸铅处理对PC12细胞Aβ和Aβ寡聚体表达的影响不同浓度醋酸铅暴露12h后,500μM染铅组PC12细胞Aβ的表达低于对照组（P<0.05）;Aβ寡聚体蛋白在20μM染铅组细胞中的表达低于对照组（P<0.05）,100μM和500μM染铅组PC12细胞Aβ蛋白的表达水平高于对照组（P<0.05）。染毒24h后,各染铅组细胞Aβ的表达水平均低于对照组（P<0.05）;Aβ寡聚体蛋白在各染铅组细胞中的表达无明显改变（P>0.05）。染毒72h后,Aβ蛋白在100μM和500μM染铅组细胞中的表达低于对照组（P<0.05）;Aβ寡聚体蛋白在各染铅组细胞中的表达均高于对照组（P<0.05）。3.醋酸铅处理对PC12细胞IGF1/IGF1R表达的影响醋酸铅暴露12h后,20μM染铅组PC12细胞IGF1的表达高于对照组（P<0.05）,IGF1和IGF1R蛋白在100μM和500μM染铅组细胞中的表达均低于对照组（P<0.05）。染毒24h后,IGF1蛋白在各染铅组细胞中的表达均低于对照组（P<0.05）;IGF1R蛋白在20μM和500μM染铅组细胞中的表达低于对照组（P<0.05）。染毒72h后,IGF1蛋白在各染铅组细胞中的表达均低于对照组（P<0.05）;100μM和500μM染铅组细胞IGF1R的表达低于对照组（P<0.05）。4.醋酸铅处理对PC12细胞IR、p-Akt、IDE表达的影响染毒12h后,20μM染铅细胞IR的表达低于对照组（P<0.05）,100μM染铅组细胞IR和p-Akt蛋白表达水平均高于对照组（P<0.05）;500μM染铅组细胞p-Akt的表达低于对照组（P<0.05）;500μM染铅组细胞IDE的表达低于对照组（P<0.05）。染毒24h后,20μM及100μM染铅组细胞IR的表达低于对照组（P<0.05）;p-Akt蛋白在20μM和100μM染铅组细胞中的表达显着高于对照组（P<0.05）,500μM染铅组细胞p-Akt的表达量则明显低于对照组（P<0.05）;IDE蛋白在各染铅组细胞中的表达均低于对照组（P<0.05）。染毒72h后,IR蛋白在20μM和500μM染铅组细胞中的表达低于对照组（P<0.05）;p-Akt蛋白在500μM染铅组细胞中的表达低于对照组（P<0.05）;100μM及500μM染铅组细胞IDE的表达低于对照组（P<0.05）。5.醋酸铅处理对PC12细胞MAPK信号通路相关蛋白（ERK1/2、JNK1/2/3、P38）表达的影响不同浓度醋酸铅处理12h后,与对照组比较,各染铅组细胞ERK1的表达增高,而ERK2和P38蛋白表达降低（P<0.05）;500μM染铅组细胞JNK1的表达低于对照组（P<0.05）;20μM及100μM染铅组细胞JNK2的表达高于对照组（P<0.05）;100μM及500μM染铅组细胞JNK3的表达低于对照组（P<0.05）。染毒24h后,与对照组比较,20μM染铅组细胞ERK1表达显着升高,而500μM染铅组细胞ERK1蛋白表达降低（P<0.05）;ERK2蛋白在各染铅组细胞中的表达均低于对照组（P<0.05）;100μM及500μM染铅组细胞JNK1的表达低于对照组（P<0.05）;500μM染铅组细胞JNK2蛋白的表达低于对照组（P<0.05）;20μM及500μM染铅组细胞JNK3的表达低于对照组（P<0.05）;P38蛋白在100μM和500μM染铅组细胞中的表达低于对照组（P<0.05）。染毒72h后,与对照组比较,各染铅组细胞ERK2及JNK1蛋白的表达均降低（P<0.05）;500μM染铅组细胞ERK1的表达低于对照组（P<0.05）;100μM染铅组细胞JNK2的表达高于对照组（P<0.05）,500μM染铅组细胞JNK2的表达低于对照组（P<0.05）;JNK3蛋白在100μM及500μM染铅组细胞中的表达均低于对照组（P<0.05）;100μM及500μM染铅组细胞P38的表达低于对照组（P<0.05）。6.醋酸铅对PC12细胞APP、INSR、AKT、IDE和IGF1/IGF1R转录水平的影响PCR结果显示,醋酸铅处理12h后,APP m RNA在各染铅组细胞中的表达无明显改变（P>0.05）;20μM染铅组细胞INSR m RNA的表达低于对照组（P<0.05）;各染铅组细胞AKT m RNA的表达均低于对照组（P<0.05）;各实验组细胞IDE m RNA的表达无显着差异（P>0.05）;20μM和100μM染铅组细胞IGF1/IGF1R m RNA的表达均低于对照组（P<0.05）。染毒24h后,20μM及100μM染铅组细胞APP m RNA的表达高于对照组（P<0.05）;100μM染铅组细胞INSR m RNA的表达低于对照组（P<0.05）;20μM及100μM染铅组细胞AKT m RNA的表达低于对照组（P<0.05）;20μM染铅组细胞IDE m RNA的表达低于对照组（P<0.05）;100μM染铅组细胞IGF1 m RNA的表达低于对照组（P<0.05）,各实验组细胞IGF1R m RNA的表达无明显差异（P>0.05）。染毒72h后,20μM及100μM染铅组细胞APP m RNA的表达均低于对照组（P<0.05）;仅20μM染铅组细胞INSR m RNA的表达低于对照组（P<0.05）;AKT m RNA在20μM及100μM染铅组细胞中的表达低于对照组（P<0.05）;IDE m RNA在各实验组中的表达无明显改变（P>0.05）;20μM和100μM醋酸染铅组细胞IGF1/IGF1R m RNA的表达均低于对照组（P<0.05）。结论1.孕哺期母体铅暴露可导致仔鼠血铅和海马铅浓度明显升高,抑制Aβ降解酶IDE及神经生长因子NGF的表达,损伤仔鼠的空间学习能力,该损伤效应呈暴露浓度依赖性。提示子代学习记忆能力障碍、脑AD样神经退行性变与孕哺期母体铅暴露密切相关。2.细胞染毒实验结果与动物研究结果相一致。醋酸铅暴露会对PC12细胞AD相关蛋白表达产生影响,该过程可能涉及胞内信号通路蛋白的异常表达。铅暴露在抑制ERK2、JNK1/3及P38蛋白表达的同时,刺激了ERK1和JNK2 MAPKs的表达。说明铅暴露可通过诱发信号通路表达异常来诱导AD样病变的产生。
孔刚[8]（2016）在《IQGAP1在高糖诱导足细胞凋亡中的作用及其机制探讨》文中进行了进一步梳理研究背景糖尿病是临床上一种常见内分泌性疾病,它是由于多种病因引起的以慢性高血糖为特征的代谢性疾病,是由于胰岛素分泌和（或）作用缺陷所致。持续高血糖与长期代谢紊乱等可导致全身组织器官的多种并发症,尤其是眼、肾、心血管及神经系统的慢性进行性病变、功能减退或衰竭。糖尿病的全身血管并发症分为大血管并发症和微血管并发症,糖尿病肾病（diabetic nephropathy,DN）是糖尿病最常见的微血管并发症之一,其临床表现主要为高血压、水肿、严重蛋白尿、低白蛋白血症和进行性肾功能减退;肾脏病理主要表现为结节状或弥漫性系膜细胞增殖、基底膜(（GBM）增厚,系膜细胞外基质积聚、足细胞足突融合,肾小球硬化及肾小管间质纤维化。糖尿病肾病是目前世界范围内导致终末期肾病（end stage renal disease,ESRD）的首位位病因,增加各国卫生保健事业支出的同时也给予社会、家庭、个人带来沉重负担。在我国糖尿病肾病发病率以及在终末期肾衰竭透析患者中所占的比例也成逐年增加趋势,严重影响了患者的生存质量。因此,探讨糖尿病肾病的发病机制、及早发现糖尿病肾病并给予适当干预治疗措施对广大糖尿病肾病患者具有重要的社会和现实意义。DN的发病机制十分复杂,涉及到糖脂代谢紊乱、炎症介质释放、血流动力学异常、细胞因子、氧化应激以及细胞凋亡等多因素的作用。近年来的研究显示,肾小球滤过屏障结构和功能的改变,尤其是作为肾小球滤过屏障重要组成成分的足细胞损伤,在糖尿病肾病的进展中发挥了举足轻重的作用,被认为是引起DN蛋白尿和肾小球硬化的关键因素。因此,研究足细胞的损伤为DN的预防和治疗带来了新的契机。足细胞又称为脏层肾小球上皮细胞,附着于肾小球基底膜外侧,与肾小球基底膜（glomerular basement membrane,GBM）、内皮细胞共同构成肾小球滤过屏障。足细胞的主要作用是对蛋白质的滤过及GBM成分的更新起着举足轻重的作用。由于足细胞是高度分化细胞,增殖能力较差,当足细胞受到损伤时,尿蛋白漏出增加,从而加重肾衰竭的发生,而蛋白尿又进一步加重足细胞的损伤。在DN的发生发展中,足细胞的改变主要包括足细胞数目减少,细胞凋亡增加,流动性增强,直至足细胞从GBM上脱落随尿液排出,导致GBM裸露,形成局灶粘连和肾小球硬化。DN足细胞损伤机制复杂,其不是单由某个因素所诱发,而是多个因素的联合作用。主要包括肾蛋白（nephrin）、高血糖、整合素、机械应力、炎性反应、肾素-血管紧张素-醛固酮系统（RAAS）的激活、AGEs的蓄积、GH-胰岛素样生长因子（insulin-like growth factor,IGF）-I轴、血管内皮生长因子（VEGF）、类肝素硫酸蛋白聚糖（HSPG）、肿瘤抑制基因（wT1）、Podocalyxin蛋白、过氧化物酶体增殖物激活受体（perox-isome proliferatoractivated receptor,PPAR）、脂联素、微小 RNA（micro RNA,miRNA）、TGF-β1、氧化应激及细胞凋亡等。有研究显示,IQ结构域GTP酶活化蛋白1（IQdomainGTPase-activating protein 1,IQGAP1）是一种含有多个蛋白结合域的支架蛋白,近期研究发现IQGAP1在细胞黏附迁移、维持细胞形态以及调节细胞凋亡等众多生命过程中发挥了举足轻重的作用[1,2]。IQGAP1是否参与高糖诱导的足细胞凋亡尚未见报道,基于上述理论基础,我们设计并进行了本次研究。本课题分为两部分,第一步部分,采用体外培养人肾脏足细胞（HPC）,观察高糖刺激对IQGAP1表达和分布以及对足细胞凋亡的影响。第二部分,进一步观察IQGAP1与丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）信号通路以及肾素□血管紧张素□醛固酮系统（RAAS）在足细胞凋亡中的作用,探讨高糖诱导肾脏足细胞凋亡的分子机制,从而为更好的治疗糖尿病肾病提供理论支持。第一部分高糖刺激对足细胞中IQGAP1表达和分布以及凋亡的影响研究目的:1、观察人肾脏足细胞在体外高糖刺激下IQGAP1表达情况;2、观察人肾脏足细胞在体外高糖刺激下IQGAP1分布情况;3、观察人肾脏足细胞在体外高糖刺激下细胞凋亡情况。研究方法:HPC在33℃、5%CO2培养箱中,以含有10%胎牛血清及γ-干扰素（10 U/ml）的RPMI 1640培养液培养细胞使其增殖,传代后更换为不含Y-干扰素的RPMI 1640培养液,置入37° C、5%C02培养箱中培养10～14天,促进细胞分化成熟,用于后续实验。HPC被随机分为3组:A组:正常对照组（Normal Control,NC,）、B组:甘露醇对照组（Manitol+Glucose Control,MG）和C组:高糖组（High Glucose,HG）。NC组细胞给予D-glucose5.5mmol/L,为了控制高渗透压对细胞实验结果可能带来的影响,MG组给予D-glucose5.5mmol/L+24.5mol/L甘露醇作为对照,HG组给予D-glucose 30mmO1/L。各组细胞同步培养0、12、24、48、72小时后分别收集,应用免疫荧光法观察IQGAP1在各组环境足细胞中的表达及其分布情况,real-time PCR法检测IQGAPlmRNA在各组不同环境下足细胞中的表达情况。用流式细胞仪检测各组细胞凋亡情况。研究结果:1、从Fig.1-1可以看出IQGAP1在足细胞的胞浆与细胞核中都有表达,但主要存在于细胞核内;2、Fig.1-2、Fig.1-3A、3B、3C显示,在0小时,正常对照组、甘露醇对照组和高糖组IQGAP1的表达量无显着性差异;在48小时,免疫荧光显示:甘露醇组与正常糖组比较,IQGAP1的表达量变化不大,差异无统计学意义,但在高糖刺激下,IQGAP1的表达水平明显下调,IQGAP1的表达量与正常糖对照组比较明显下降,差异有统计学意义;3、Fig.1-4A、B、C、D显示,流式细胞仪检测足细胞凋亡,将位于右下象限的早期凋亡细胞和位于右上象限的晚期凋亡细胞之和记录为凋亡细胞。0小时,正常糖组凋亡率1.73%±0.13%,甘露醇组凋亡率2.1%±0.15%,高糖组凋亡率2.1%±0.12%,各组凋亡率无显着性差异（P＞0.05）;24小时,正常糖组凋亡率26.39%±4.57%,甘露醇组凋亡率30.44%±5.15%,高糖组凋亡率56.15%±6%;在48小时,正常糖组足细胞凋亡率37.76%±5.6%,甘露醇组凋亡率36.77%±4.27%,高糖组凋亡率68.9%±6.64%。与正常糖组比较,甘露醇组凋亡率无显着性变化,高糖组凋亡率明显增加,差异有统计学意义（P＜0.05）。结论:1、在正常糖组、甘露醇组和高糖组三组的足细胞培养中,IQGAP1在胞浆与细胞核中均有表达,但主要存在于细胞核内;2、高糖可以显着下调IQGAP1的表达,且随时间的延长下调表达进一步加剧;3、高糖可以显着提升足细胞的凋亡,且随时间的延长凋亡率逐渐增加。第二部分IQGAP1在高糖诱导足细胞凋亡中的作用及其机制探讨研究目的:1、通过流式细胞仪检测,观察人肾脏足细胞在体外高糖刺激下细胞凋亡情况以及探讨与IQGAP1的关系;2、通过 RT-PCR、Western blotting 观察 IQGAP1、p-ERK1/2、ERK1/2 的表达情况,进一步探讨IQGAP1与丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）信号通路中p-ERK1/2、ERK1/2的关系以及在足细胞凋亡中的作用;3、观察在高糖组足细胞培养中加入贝那普利（10 μ mol/L）后IQGAP1、p-ERK1/2、ERK1/2的蛋白表达情况以及细胞凋亡情况,进一步探讨IQGAP1与肾素-血管紧张素-醛固酮系统（RAAS）的作用关系,以及在足细胞凋亡中的作用;4、观察在高糖组足细胞培养中加入ERK1/2的特异性抑制剂u0126（10 μmol/L）后IQGAP1、p-ERK1/2、ERK1/2的蛋白表达情况以及细胞凋亡情况,进一步探讨IQGAP1在足细胞凋亡中的作用。研究方法:将上述在培养箱中培养10～14天后成熟HPC随机分为5组（A-E组）:A组:正常糖对照组（5.5mmol/Lglucose,NC）、B组:甘露醇对照组（24.5mmol/L甘露醇+5.5 mmol/L glucose,MG）、C 组:高糖组（30 mmol/L glucose,HG）、D 组:贝那普利组（30 mmol/L glucose+10 μmol/L benazepril）、E 组:u0126抑制剂组（30 mmol/L glucose +10 μmol/L u0126）。各组细胞同步培养Oh、12h、24h、48h、72h时后收集,应用免疫荧光法观察IQGAP1在各组环境足细胞中的表达及其分布情况,real-time PCR、Western blotting 检测 IQGAPlmRNA及蛋白在不同环境下足细胞中的表达情况。通过Western blot法检测ERK1/2和P-ERK1/2的含量。用流式细胞仪检测各组细胞凋亡情况。研究结果:1、HG抑制了 IQGAP1的表达,增加P-ERK1/2的表达,并且促进了 HPC的凋亡;2、贝那普利可以减轻高糖引起的IQGAP1抑制,上调IQGAP1的表达,下调P-ERK1/2水平。48小时,D组凋亡率50.54%±6.25%,比C组凋亡率68.9%±6.64%明显下降,差异有统计学意义,说明贝那普利可以减轻引起高糖引起的HPC的凋亡;3、U0126对高糖引起的IQGAP1的抑制没有影响。48小时,E组凋亡率3.19%±1.68%,比C组凋亡率68.9%±6.64%明显下降,提示U0126可显着减少HPC的凋亡率。结论:1、高糖通过下调IQGAP1的表达、增加p-ERK蛋白表达,促进HPC细胞的凋亡;2、贝那普利可上调IQGAP1的表达,减轻高糖诱导的细胞凋亡;3、U0126抑制剂可减轻高糖引起的足细胞凋亡,但对高糖引起的IQGAP1的抑制没有影响;4、IQGAP1通过与ERK1/2MAPK信号通路、肾素-血管紧张素-醛固酮系统（RAAS）相互作用,参与了足细胞的凋亡,对糖尿病肾病的进展起到一定作用。
袁若石[9]（2016）在《癌症内源性网络理论及其非线性随机动力学基础》文中指出癌症是一种典型的复杂疾病,它的发病机理不能由单个的基因、蛋白以及分子通路来解释。我们也不能通过“线性叠加”式的简单推理来组合各个相关因素而对癌症形成一个完整的理解,类似于物理学中的多体问题。快速积累的大量组学数据,为癌症及复杂疾病的研究提供了越来越多的可用信息,但同时也需要我们在背后分子机制的基础上来进行整合、分析和处理,才有可能解释癌症的复杂性并确定各种相关的基因、蛋白以及分子通路的实际作用。为此,一个统一的、定量的癌症内源性网络假说被提出:生物在漫长的演化过程中形成了一个内源性的分子-细胞网络以完成发育过程以及生理功能的调控,癌症则是这个内源性网络中的一个或者一组固有的稳定状态。这个稳定状态在演化的历史过程中可能具有特定的功能,但现在对于整个生物体来说并不是有利的。癌症内源性网络中至少部分的关键因子已经在各类研究中被分别独立的发现了,这反过来也说明生物系统中存在着层次化的组织结构。这样的结构使得一个核心网络能够从目前已知的生物学知识中被构建出来,并能随着生物学知识的积累而被不断地完善。通过分析这个核心网络在状态空间中的随机非线性动力学行为,我们发现了一系列稳定状态分别对应生物体正常的生理和不正常的病理表型,包括自然涌现出来的癌症状态。癌症内源性网络的动力学模型由于其固有的随机性、非线性和高维状态空间,对传统的理论方法提出了挑战。为此我们发展了一套源于达尔文演化理论的处理随机过程的理论框架,并解决了一系列理论、计算问题。具体来说,我们提出了一种全新的随机微分方程的积分方法,A-型随机积分,并给出了它和传统的Ito积分之间存在着的一个简洁的转换关系。这种新的积分方式具有明确的物理意义和独到的优势:由随机微分方程所确定的随机过程的稳态分布满足Boltzmann-Gibbs分布,我们证明了其中的势函数（哈密顿量）是系统确定性动力学部分的全局李雅普诺夫函数,这个结论在任意噪声强度下都是成立的。这就使得稳态分布的最可几状态与系统的确定性部分的稳定不动点重合。我们又在一系列典型的动力系统,包括不动点、极限环和混沌系统中显式给出了势函数的构造。因此,我们的方法在随机性和确定性之间建立了一种对应,原来求解偏微分方程（如Fokker-Planck方程）得到稳态分布中关键位置信息（如稳态、过渡态）的问题很大程度上可以转化为求解系统确定性部分的常微分方程的不动点问题（求解代数方程）。相比随机模拟稳态分布,这极大减少了计算量,使得分析、研究数百维的随机动力学模型成为可能。因此这套方法也在生物、物理、化学、控制、经济等领域中存在着广泛的应用前景。而传统的随机积分方法比如Ito和Stratonovich积分并不具有这种优势,具体的计算和数值模拟实验都证明了这一点。由此建立的内源性网络的非线性随机动力学模型能够综合各种因素,给出了一个比当前流行的、在网络上进行简单推理来分析因果关系更为合理的、在一般情形下适用的框架。我们构建了前列腺癌和急性早幼粒细胞白血病的内源性网络模型,并发展了一整套计算工具。这些定量的网络模型通过收集独立的分子生物学和生化实验中所揭示的分子间相互作用“组装”而成,能够重现临床观测到的现象并给出新的理论预言。内源性网络理论还可以被应用到其他类型的复杂疾病中去,比如本文中所讨论的成骨细胞异常导致骨质疏松的核心调控网络模型。我们建立的这套框架可以作为探索复杂疾病新疗法的“干实验”平台,尤其在寻找抗癌药物组合这一“湿实验”面临巨大挑战的领域:我们的方法可以整合已有的生物学知识,利用计算方法找到可能的组合药物靶点,为“湿实验”指明方向。
张弦[10]（2016）在《TLR4介导的信号通路对肝细胞凋亡的影响及氧化苦参碱的干预机制研究》文中研究指明第一部分TLR4/PI3K/AKT/GSK3β信号通路对大鼠肝BRL-3A细胞凋亡的影响目的探讨大鼠肝BRL-3A细胞中是否有Toll样受体4（Toll-like receptor 4,TLR4）介导的PI3K/AKT/GSK3β信号通路,及该通路在BRL-3A细胞凋亡中的作用与机制,为急性肝衰竭（acute liver failure,ALF）的预防和治疗提供新的靶点。方法采用大鼠肝BRL-3A细胞,运用脂多糖（lipopolsaccharide,LPS）建立肝细胞凋亡模型。分别应用TLR4抑制剂（CLI-095）、PI3K/AKT抑制剂（LY294002）和GSK3β抑制剂（LiCl）预处理BRL-3A细胞,以减弱或加强TLR4/PI3K/AKT/GSK3β信号转导通路的作用。CCK-8法检测细胞活力;流式细胞术（Flow cytometry,FCM）检测细胞凋亡率;Hoechst 33342染色法观察LPS刺激及TLR4抑制剂阻断后细胞凋亡的形态;Western-blot法检测BRL-3A细胞内AKT、P-AKTSer473、GSK3β、P-GSK3βSer9、Bax、Bcl-2及active-caspase-3蛋白的表达;实时定量PCR法（real-time quantitative PCR,RT-qPCR）检测BRL-3A细胞内Bax、Bcl-2及caspase-3 mRNA的表达;免疫荧光法观察GSK3β核易位情况。结果（1）CCK-8法结果显示,LPS（10μg/ml）刺激BRL-3A细胞不同时间（1、3、6、12、24 h）后,细胞活力均明显低于对照组（P<0.05）,LPS作用于BRL-3A细胞24 h后其活力为对照组的58%（P<0.05）。（2）Hoechst 33342染色法结果显示,LPS刺激后,随着刺激时间的延长,BRL-3A细胞凋亡增多,并出现坏死细胞,刺激24 h可见细胞核碎片和核固缩。TLR4抑制剂（CLI-095）预处理组凋亡细胞明显减少,未见凋亡小体。（3）流式细胞术结果显示,LPS（10μg/ml）刺激BRL-3A细胞不同时间（1、3、6、12、24h）后,细胞凋亡率逐渐上升（p<0.01）,24hbrl-3a细胞凋亡率达68.30%。与lps组比较,cli-095+lps组可以减少lps刺激引起的brl-3a细胞凋亡率（p<0.05）;ly294002+lps组细胞凋亡率增加（p<0.05）;licl+lps组细胞凋亡率下降（p<0.05）。（4）western-blot法结果显示,正常对照组brl-3a细胞中有akt、p-aktser473、gsk3β、p-gsk3βser9的表达;lps组p-aktser473和p-gsk3βser9的表达低于正常对照组（p<0.05）;与lps组比较,cli-095+lps组p-aktser473和p-gsk3βser9的表达有所上调;而ly294002+lps组的p-aktser473和p-gsk3βser9表达下调（p<0.05）;licl+lps组p-gsk3βser9的表达上调（p<0.05）。（5）免疫荧光法检测gsk3β核易位结果显示,正常对照组中gsk3β主要表达在brl-3a细胞质中;lps组gsk3β大多易位到胞核;与lps组比较,cli-095、licl预处理组gsk3β核易位均不同程度减弱,ly294002预处理组gsk3β核易位作用增强。（6）rt-qpcr法检测结果显示,与正常对照组比较,lps组bax/bcl-2及caspase-3mrna的表达均上调（p<0.05）;与lps组比较,cli-095+lps组及licl+lps组bax/bcl-2及caspase-3mrna表达降低（p<0.05）;ly294002+lps组bax/bcl-2及caspase-3mrna表达上调（p<0.05）。（7）western-blot法测定结果显示,与正常对照组比较,lps组bax/bcl-2及active-caspase-3表达均上调（p<0.05）。与lps组比较,cli-095+lps组及licl+lps组bax/bcl-2及active-caspase-3表达降低（p<0.05）;ly294002+lps组bax/bcl-2及active-caspase-3表达上调（p<0.05）。结论（1）brl-3a细胞中有tlr4介导的pi3k/akt/gsk3β信号通路。（2）brl-3a细胞tlr4激活后,p-aktser473和p-gsk3βser9表达下调,使bax/bcl-2及active-caspase-3的表达增加,细胞凋亡率升高。brl-3a细胞凋亡过程中有tlr4介导的pi3k/akt/gsk3β信号通路的参与。第二部分tlr4/p38/jnk信号通路对大鼠肝brl-3a细胞凋亡的影响目的探讨大鼠肝brl-3a细胞中是否有tlr4介导的p38/jnk信号通路,及该通路在brl-3a细胞凋亡中的作用与机制,为急性肝衰竭的预防和治疗提供新的靶点。方法采用大鼠肝brl-3a细胞,应用lps建立肝细胞凋亡模型。分别运用tlr4抑制剂（cli-095）、p38抑制剂（sb203580）、jnk抑制剂（sp600125）及erk抑制剂（fr180204）预处理brl-3a细胞,以影响tlr4/p38/jnk信号转导通路的作用。流式细胞术检测细胞凋亡率;western-blot法检测brl-3a细胞内jnk、p-jnk、p38、p-p38、bax、bcl-2及active-caspase-3蛋白的表达;rt-qpcr检测大鼠肝细胞bax、bcl-2及caspase-3mrna的表达。结果（1）流式细胞术结果显示,lps组细胞凋亡率高于正常对照组（p<0.05）;而cli-095+lps组、sb203580+lps组、sp600125+lps组细胞凋亡率显着低于lps组（p<0.05）;fr180204+lps与lps组比较无明显差异。（2）western-blot结果显示,lps组p-p38,p-jnk表达明显高于正常对照组（p<0.05）;cli-095+lps组、sb203580+lps组、sp600125+lps组p-p38,p-jnk表达显着低于lps组（p<0.05）;fr180204+lps组与lps组比较无明显差异。（3）rt-qpcr结果显示,lps组bax/bcl-2及caspase-3mrna明显高于正常对照组（p<0.05）;cli-095+lps组、sb203580+lps组和sp60012+lps组bax/bcl-2及caspase-3mrna表达均显着低于lps组（p<0.05）;fr180204+lps组bax/bcl-2及caspase-3mrna表达无明显变化。（4）western-blot结果显示,lps组bax/bcl-2及active-caspase-3表达比正常对照组高（p<0.05）;cli-095+lps组、sb203580+lps组和sp60012+lps组bax/bcl-2及active-caspase-3表达显着低于lps组（p<0.05）;fr180204+lps组与lps组比较无明显差异。结论（1）brl-3a细胞中有tlr4介导的p38/jnk信号通路。（2）brl-3a细胞tlr4激活后,p-p38、p-jnk表达增加,使bax/bcl-2的比例和active-caspase-3表达增加,从而促进brl-3a细胞的凋亡。brl-3a细胞凋亡过程中有tlr4介导的p38/jnk信号通路的参与。第三部分氧化苦参碱对大鼠肝brl-3a细胞凋亡的抑制作用及其机制研究目的探讨氧化苦参碱（oxymatrine,omt）对lps诱导的大鼠肝brl-3a细胞凋亡的抑制作用及其机制,为omt抑制肝细胞凋亡提供更多的实验依据。方法采用lps诱导大鼠肝brl-3a细胞建立细胞凋亡模型。应用cck-8法测定omt对brl-3a细胞活力的影响;生物化学法测定不同剂量omt对lps诱导的brl-3a细胞乳酸脱氢酶（lactatedehydrogenase,ldh）释放率的影响。根据ldh释放率选择omt浓度为0.75、1.5、3.0g/l进行后续实验。然后实验分5组:正常对照组,lps组,omt低剂量+lps组,omt中剂量+lps组,omt高剂量+lps组。hochest33342染色观察细胞凋亡形态;流式细胞仪检测细胞凋亡率;rt-qpcr法检测brl-3a细胞中bax、bcl-2、caspase-3mrna的表达;western-blot法检测brl-3a细胞中akt、p-aktser473、gsk3β、p-gsk3βser9、p38、p-p38、jnk、p-jnk、bax、bcl-2和active-caspase-3蛋白的表达;免疫荧光观察gsk3β核易位情况。结果（1）不同剂量的（0.3756.0g/l）omt和brl-3a细胞共培养24h,brl-3a细胞生长状态良好。（2）lps刺激brl-3a细胞后,ldh释放率增加（p<0.01）,而omt预处理后能明显降低ldh的释放率（p<0.05或p<0.01）。（3）cck-8法结果显示,lps组细胞活力明显降低（p<0.05）,omt预处理可以明显减弱由lps引起的细胞活力降低（p<0.05或p<0.01）。（4）流式细胞术结果显示:lps组brl-3a细胞凋亡率明显高于正常对照组（p<0.05）,omt预处理可以显着降低由lps刺激引起brl-3a细胞凋亡率的增加（p<0.05）。（5）hochest33342染色结果显示,lps组可见brl-3a细胞凋亡增多,omt预处理后凋亡细胞明显减少。（6）western-blot检测结果显示,lps组tlr4表达增加（p<0.05）,p-aktser473和p-gsk3βser9表达降低（p<0.05）,p-p38、p-jnk表达增加（p<0.05）;与lps组比较,omt中、高剂量预处理可以下调tlr4的表达,并上调p-aktser473和p-gsk3βser9的表达（p<0.05）,下调p-p38、p-jnk的表达（p<0.05或p<0.01）。（7）免疫荧光结果显示,omt预处理能明显减少lps刺激引起的gsk3β核易位。（8）rt-qpcr结果显示,lps组bax/bcl-2及caspase-3mrna表达明显增高（p<0.05）。与lps组比较,omt预处理能明显降低由lps诱导的brl-3a细胞中bax/bcl-2及caspase-3mrna表达上调（p<0.05或p<0.01）。（9）western-blot结果显示,omt预处理能明显降低由lps诱导的brl-3a细胞中bax/bcl-2及active-caspase-3表达上调（p<0.05）。结论（1）omt预处理可以显着降低由lps诱导的brl-3a细胞凋亡。（2）omt能上调经lps刺激的brl-3a细胞p-aktser473和p-gsk3βser9水平,减少lps刺激引起的gsk3β核易位,降低经lps激活的p38和jnk磷酸化水平,下调bax/bcl-2的比例和active-caspase-3的表达,从而明显抑制brl-3a细胞凋亡。（3）omt通过tlr4/pi3k/akt/gsk3β及tlr4/p38/jnk信号通路抑制brl-3a细胞凋亡。第四部分氧化苦参碱对急性肝衰竭大鼠肝细胞凋亡的抑制作用及其机制研究目的探讨氧化苦参碱（omt）对lps/d-galn诱导的急性肝衰竭大鼠肝细胞凋亡的抑制作用及其机制,为临床防治急性肝衰竭抑制肝细胞凋亡寻找有效的药物。方法采用lps/d-galn建立大鼠急性肝衰竭模型。100只大鼠随机分为5组:正常对照组,模型组,omt低、中、高剂量组。应用he染色光镜观察肝脏病理学改变;透射电镜观察细胞凋亡情况;全自动生化分析仪检测血清丙氨酸氨基转移酶（alanineaminotransferase,alt）、门冬氨酸氨基转移酶（aspartateaminotransferase,ast）水平;elisa法测定各组大鼠外周血肿瘤坏死因子-α（tumornecrosisfactor,tnf-α）和白介素-1β（interleukin-1β,il-1β）水平;流式细胞术测定各组大鼠肝细胞凋亡率;western-blot检测肝组织中akt、p-aktser473、gsk3β、p-gsk3βser9、p38、p-p38、jnk、p-jnk、bax、bcl-2和active-caspase-3的表达。免疫组化s-p法观察肝组织tlr4、bax、bcl-2和active-caspase-3的表达;结果（1）各组大鼠死亡率及肝脏大体情况,正常对照组和omt低、中、高剂量组无大鼠死亡;模型组大鼠死亡率达30%。模型组可见肝脏大体肿胀明显,表面弥漫出血,大片瘀斑,呈暗红色,omt低、中、高剂量组肝脏大体不同程度的好转。（2）he染色见模型组肝细胞明显坏死,大片状坏死和出血,仅少量肝细胞残存,散在分布,无正常肝小叶结构,纤维网状支架塌陷,汇管区大量炎症细胞浸润。透射电镜显示模型组肝细胞坏死明显,形态不规则,可见核皱缩和核碎裂,见凋亡小体,肝细胞内线粒体严重损害,无明显细胞器结构。omt各剂量预处理可不同程度改善肝组织病理损伤。（3）生化分析仪测定结果显示,模型组大鼠外周血ast、alt的水平明显高于正常对照组（p<0.05）,omt各剂量组,ast、alt的水平显着低于模型组（p<0.05）。（4）elisa法结果显示,模型组大鼠外周血tnf-α和il-1β水平明显高于正常对照组（P<0.01）,OMT各剂量组,TNF-α和IL-1β水平显着低于模型组（P<0.05或P<0.01）。（5）流式细胞术结果显示,模型组肝细胞凋亡率明显增加（P<0.05）,与模型组比较,OMT中、高剂量预处理可以降低肝细胞凋亡率（P<0.05）。（6）Western-blot法结果显示,模型组TLR4表达增加（P<0.05）,P-AKTSer473和P-GSK3βSer9表达降低（P<0.05）,P-P38、P-JNK表达增加（P<0.05）;与模型组比较,OMT中、高剂量预处理可以下调TLR4的表达（P<0.05）,并上调P-AKTSer473和P-GSK3βSer9的表达（P<0.05）,下调P-P38、P-JNK的表达（P<0.05）。（7）Western-blot法检测Bax/Bcl-2比例和active-caspase-3蛋白结果显示,模型组Bax/Bcl-2比例和active-caspase-3蛋白的表达明显高于正常对照组（P<0.05）。与模型组比较,OMT预处理可下调Bax/Bcl-2比例和active-caspase-3蛋白的表达（P<0.05）。（8）免疫组化法结果显示,模型组TLR4、Bax、active-caspase-3表达明显增高,Bcl-2的表达较正常对照组有所下降（P<0.05）。与模型组比较,OMT预处理可下调TLR4、active-caspase-3及Bax的表达,上调Bcl-2的表达（P<0.05）。结论（1）OMT预处理能改善LPS/D-GalN诱导的急性肝衰竭大鼠肝组织病理损伤,明显降低血清转氨酶,保护肝细胞。（2）OMT能降低急性肝衰竭大鼠肝组织TLR4的表达、上调P-AKTSer473和P-GSK3βSer9的表达,下调GSK3β表达;下调P-P38、P-JNK的表达,使TNF-α和IL-1β水平降低,下调Bax/Bcl-2比例和active-caspase-3蛋白的表达,从而明显抑制肝细胞凋亡。（3）OMT通过TLR4/PI3K/AKT/GSK3β及TLR4/P38/JNK信号通路抑制急性肝衰竭大鼠肝细胞凋亡。
二、Transforming growth factor-β1 suppresses serum deprivation-induced apop-tosis via activation of ERK1/ERK2 and the inhibition of p38 activity and ceramide production（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、Transforming growth factor-β1 suppresses serum deprivation-induced apop-tosis via activation of ERK1/ERK2 and the inhibition of p38 activity and ceramide production（论文提纲范文）
（2）基于氧化应激探讨槲皮素防治椎间盘退变的实验研究（论文提纲范文）
| 中英文缩略词对照表 |
| 摘要 |
| Abstract |
| 前言 |
| 第一部分 髓核细胞衰老退变模型的构建与评估 |
| 1 内容与方法 |
| 1.1 实验材料 |
| 1.2 实验方法 |
| 1.3 统计分析 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 第二部分 (一)槲皮素抑制氧化应激诱导髓核细胞衰老及衰老相关分泌表型 |
| 1 内容与方法 |
| 1.1 实验材料 |
| 1.2 实验方法 |
| 1.3 统计分析 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 第二部分 (二)槲皮素通过p38MAPK介导的自噬抑制髓核细胞衰老和衰老相关分泌表型 |
| 1 内容与方法 |
| 1.1 实验材料 |
| 1.2 实验方法 |
| 1.3 统计分析 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 第三部分 槲皮素减轻大鼠椎间盘退变的实验研究 |
| 1 内容与方法 |
| 1.1 实验材料 |
| 1.2 实验方法 |
| 1.3 统计分析 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 结论 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 综述 细胞衰老及衰老相关分泌表型在椎间盘退变中的研究进展 |
| 参考文献 |
| 攻读博士学位期间取得的学术成果 |
| 个人简历 |
| 新疆医科大学博士研究生学位论文 导师评阅表 |
（3）氢化镁调控PLIN2缓解结晶肾损伤的作用和机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 缩略词表 |
| 第一部分 氢化镁在结晶肾损伤中的作用研究 |
| 一、前言 |
| 二、材料与方法 |
| 三、实验结果 |
| 四、分析与讨论 |
| 五、小结 |
| 参考文献 |
| 第二部分 氢化镁缓解结晶肾损伤的潜在靶点筛选 |
| 一、前言 |
| 二、材料和方法 |
| 三、实验结果 |
| 四、分析与讨论 |
| 五、小结 |
| 参考文献 |
| 第三部分 氢化镁调控PLIN2缓解结晶肾损伤的机制研究 |
| 一、前言 |
| 二、材料和方法 |
| 三、实验结果 |
| 四、分析与讨论 |
| 五、小结 |
| 参考文献 |
| 本课题的创新性 |
| 全文总结 |
| 综述 氢气医学在肾脏疾病治疗中的研究进展 |
| 参考文献 |
| 在读期间发表论文和参加科研工作情况说明 |
| 致谢 |
（4）TGF-β1的岩藻糖基化修饰对卵巢癌细胞线粒体自噬的影响及机制（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 英文缩略语 |
| 第一部分 TGF-β1对卵巢癌细胞线粒体自噬的影响 |
| 1 前言 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 主要试剂和仪器 |
| 2.1.1 细胞系 |
| 2.1.2 主要材料 |
| 2.1.3 主要仪器 |
| 2.2 方法 |
| 2.2.1 细胞培养 |
| 2.2.2 Western blotting检测TGF-β1 处理前后细胞自噬及线粒体自噬相关蛋白表达水平 |
| 2.2.3 免疫细胞化学 |
| 2.2.4 线粒体膜电位 |
| 2.2.5 统计学分析 |
| 3 结果 |
| 3.1 TGF-β1对卵巢癌细胞自噬的影响 |
| 3.2 TGF-β1对卵巢癌细胞自噬流的影响 |
| 3.3 TGF-β1对卵巢癌细胞线粒体膜电位的影响 |
| 3.4 TGF-β1对卵巢癌细胞线粒体自噬的影响 |
| 3.5 TGF-β1对卵巢癌细胞凋亡的影响 |
| 3.6 添加自噬抑制剂后TGF-β1对卵巢癌细胞凋亡的影响 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 第二部分 TGF-β1的岩藻糖基化修饰对卵巢癌细胞线粒体自噬的影响 |
| 6 前言 |
| 7 材料与方法 |
| 7.1 材料 |
| 7.1.1 细胞系 |
| 7.1.2 主要材料 |
| 7.1.3 主要仪器 |
| 7.2 方法 |
| 7.2.1 细胞培养 |
| 7.2.2 细胞转染及稳转细胞系的构建 |
| 7.2.3 慢病毒感染构建稳定低表达细胞系 |
| 7.2.4 Westernblotting检测TGF-β1的Lewisy抗原修饰对细胞自噬相关蛋白的影响 |
| 7.2.5 Westernblotting检测TGF-β1的Lewisy抗原修饰对线粒体膜电位的影响 |
| 7.2.6 Westernblotting检测TGF-β1的Lewisy抗原修饰对细胞线粒体自噬相关蛋白的影响 |
| 7.2.7 流式检测TGF-β1的Lewisy抗原修饰对细胞凋亡的影响 |
| 7.2.8 统计学分析 |
| 8 结果 |
| 8.1 转染FUT1 基因前后Lewisy和 TGF-β1 变化情况 |
| 8.2 TGF-β1的Lewis y抗原修饰对卵巢癌细胞自噬的影响 |
| 8.3 TGF-β1的Lewis y抗原修饰对细胞线粒体膜电位的影响 |
| 8.4 TGF-β1的Lewis y抗原修饰对细胞线粒体自噬的影响 |
| 8.5 TGF-β1的Lewis y抗原修饰对卵巢癌细胞凋亡的影响 |
| 9 讨论 |
| 10 结论 |
| 第三部分 TGF-β1岩藻糖基化修饰对卵巢癌细胞线粒体自噬影响的机制 |
| 11 前言 |
| 12 材料与方法 |
| 12.1 材料 |
| 12.1.1 细胞系 |
| 12.1.2 主要材料 |
| 12.1.3 主要仪器 |
| 12.2 方法 |
| 12.2.1 细胞培养 |
| 12.2.2 Western blotting检测TGF-β1对TAK1 的作用 |
| 12.2.3 干扰TAK1卵巢癌细胞系 |
| 12.2.4 干扰TAK1对卵巢癌细胞自噬和线粒体自噬的影响 |
| 12.2.5 Lewisy抗原对干扰TAK1 对卵巢癌细胞自噬和线粒体自噬的影响 |
| 12.2.6 干扰TAK1对MAPK通路及PI3K/Akt通路的影响 |
| 12.2.7 添加MEK及 PI3K通路抑制剂对卵巢癌细胞自噬和线粒体自噬的影响 |
| 12.2.8 TGF-β1的Lewis y抗原修饰对mTOR通路的影响 |
| 12.2.9 统计学分析 |
| 13 结果 |
| 13.1 TGF-β1对TAK1 表达的影响 |
| 13.2 干扰TAK1对卵巢癌细胞自噬及线粒体自噬的影响 |
| 13.3 Lewisy抗原修饰下干扰TAK1 对卵巢癌细胞自噬及线粒体自噬的影响 |
| 13.4 干扰TAK1 后对MAPK通路及PI3K/Akt通路的影响 |
| 13.5 添加MEK和 PI3K通路抑制剂对自噬和线粒体自噬的影响 |
| 13.6 TGF-β1的Lewis y抗原修饰对mTOR通路的影响 |
| 14 讨论 |
| 15 结论 |
| 本研究创新性的自我评价 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间取得的研究成果 |
| 致谢 |
| 个人简介 |
（5）Regulatory role of sphingosine kinase and sphingosine-1-phosphate receptor signaling in progenitor/stem cells（论文提纲范文）
| INTRODUCTION |
| SPHK/S1P/S1P RECEPTORS SIGNALLING IN HEMATOPOIETIC AND ENDOTHELIAL STEM/PROGENITOR CELLS |
| SPHK/S1P/S1P RECEPTORS SIGNALLING IN MUSCLE STEM/PROGENITOR CELLS |
| SPHK/S1P/S1P RECEPTORS SIGNALLING IN NEURAL STEM/PROGENITOR CELLS |
| SPHK/S1P/S1P RECEPTOR SIGNALLING IN BREAST CSCS |
| CONCLUSION |
（6）orexin-A对缺氧海马神经元的作用及机制研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 符号说明 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 附图表 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 博士期间发表论文 |
| 英文论文1 |
| 英文论文2 |
（7）铅致阿尔茨海默症样变神经毒性及对相关通路蛋白表达的影响（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 英文缩略词索引 |
| 1. 引言 |
| 2. 孕哺乳期母体铅暴露对仔鼠神经生长发育及AD相关蛋白的影响 |
| 2.1 前言 |
| 2.2 体内实验技术路线 |
| 2.3 材料 |
| 2.3.1 研究对象 |
| 2.3.2 主要药品与试剂 |
| 2.3.3 主要仪器和耗材 |
| 2.3.4 主要溶液的配制 |
| 2.4 方法 |
| 2.4.1 动物模型的建立与分组 |
| 2.4.2 取材方法 |
| 2.4.3 Morris水迷宫测试 |
| 2.4.4 血铅和海马铅的提取与检测 |
| 2.4.5 石蜡切片制作 |
| 2.4.6 免疫组化实验 |
| 2.4.7 免疫荧光显微术和DAPI（细胞核染色） |
| 2.4.8 Western blot分析 |
| 2.4.9 统计分析 |
| 2.5 体内实验结果 |
| 2.5.1 仔鼠出生体重和PND21体重在各实验组的差异表达 |
| 2.5.2 血铅和海马铅在各实验组的差异表达 |
| 2.5.3 孕哺期母体铅暴露对仔鼠学习和记忆能力的影响 |
| 2.5.4 海马NGF蛋白在各实验组的差异表达 |
| 2.5.5 海马IDE蛋白在各实验组的差异表达 |
| 2.6 讨论 |
| 2.6.1 铅暴露对仔鼠学习记忆能力的影响及与AD相关分子的关联 |
| 2.6.2 孕哺期母体铅暴露对仔鼠海马NGFβ蛋白表达的影响 |
| 2.6.3 孕哺期母体铅暴露对仔鼠海马IDE蛋白表达的影响 |
| 2.7 小结 |
| 3. 铅致PC12细胞AD样损伤效应及对胰岛素/Pi3k/Akt和MAPKs信号通路蛋白表达的影响 |
| 3.1 前言 |
| 3.2 体外技术路线图 |
| 3.3 材料 |
| 3.3.1 研究对象 |
| 3.3.2 主要药品与试剂 |
| 3.3.3 主要仪器设备 |
| 3.3.4 溶液的配制 |
| 3.4 方法 |
| 3.4.1 PC12细胞株培养 |
| 3.4.2 MTT实验 |
| 3.4.3 醋酸铅染毒 |
| 3.4.4 Western blot分析 |
| 3.4.5 Real-time PCR |
| 3.4.6 数据统计 |
| 3.5 细胞实验结果 |
| 3.5.1 MTT实验及醋酸铅对PC12细胞形态的影响 |
| 3.5.2 醋酸铅对PC12细胞Aβ和Aβ寡聚体蛋白表达的影响 |
| 3.5.3 醋酸铅对PC12细胞IR、p-Akt和IDE蛋白表达的影响 |
| 3.5.4 醋酸铅对PC12细胞IGF1和IGF1R蛋白表达的影响 |
| 3.5.5 醋酸铅对PC12细胞MAPK信号通路相关蛋白(ERK1/2、JNK1/2/3、P38）表达的影响 |
| 3.5.6 醋酸铅对PC12细胞APP、INSR、AKT、IDE和IGF1/IGF1R转录水平的影响 |
| 3.6 讨论 |
| 3.6.1 AD发病机制的假说 |
| 3.6.2 铅暴露对PC12细胞APP mRNA表达的影响 |
| 3.6.3 铅暴露对PC12细胞总Aβ和Aβ寡聚体蛋白表达的影响 |
| 3.6.4 铅暴露对PC12细胞IR蛋白和INSR基因表达的影响 |
| 3.6.5 铅暴露对PC12细胞IGF1/IGF1R分子表达的影响 |
| 3.6.6 铅暴露对PC12细胞p-Akt、IDE蛋白和AKT、IDE基因表达的影响 |
| 3.6.7 铅暴露对PC12细胞MAPKs级联信号通路蛋白ERK1/2、JNK1/2/3、P38蛋白表达的影响 |
| 3.7 小结 |
| 结论 |
| 创新点 |
| 不足之处 |
| 参考文献 |
| 综述 阿尔茨海默症发病机理研究进展 |
| 参考文献 |
| 个人简历 |
| 致谢 |
（8）IQGAP1在高糖诱导足细胞凋亡中的作用及其机制探讨（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 符号说明 |
| 第一部分 高糖刺激对足细胞中IQGAP1表达和分布以及凋亡的影响 |
| 前言 |
| 材料和方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 第二部分 IQGAP1在高糖诱导足细胞凋亡中的作用及其机制探讨 |
| 前言 |
| 材料和方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 附图 |
| 课题的创新点及局限性 |
| 致谢 |
| 攻读博士期间发表论文 |
| 学位论文评阅及答辩情况表 |
| 英文文章1 |
| 英文文章2 |
（9）癌症内源性网络理论及其非线性随机动力学基础（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 缩略词 |
| 第一章 绪论 |
| 1.1 内源性网络的存在性和构建 |
| 1.1.1 演化所形成的内源性分子-细胞网络 |
| 1.1.2 在 λ 噬菌体基因开关等研究中揭示的关键调控分子 |
| 1.1.3 生物体层次化的组织结构:从分子到模块再到网络 |
| 1.2 内源性网络的非线性随机动力学模型 |
| 1.2.1 从达尔文演化理论到随机微分方程 |
| 1.2.2 内源性分子-细胞网络随时间演化的数学描述 |
| 1.2.3 传统随机积分方法的局限性 |
| 1.2.4 随机微分方程 (SDE) 分解和A-型随机积分 |
| 1.2.5 内源性网络动力学的扰动 |
| 1.2.6 癌症作为内源性网络动力学的稳态 |
| 1.2.7 与其他网络模型的比较 |
| 1.3 SDE分解理论框架 |
| 1.3.1 SDE分解的物理意义:耗散矩阵、横向力矩阵和势函数 |
| 1.3.2 势函数的在不动点、极限环以及混动系统中的显式构造 |
| 1.3.3 A-型随机积分与传统随机积分之间的转换 |
| 1.4 论文结构 |
| 参考文献 |
| 第二章 超越“Ito或Stratonovich”:A-型随机积分 |
| 2.1 摘要 |
| 2.2 绪论 |
| 2.3 随机微分方程的变换 |
| 2.4 数学上的一致性 |
| 2.4.1 广义Klein-Kramers方程 |
| 2.4.2 零质量极限 |
| 2.5 讨论 |
| 2.5.1 A-型积分与传统随机积分之间的关系和差异 |
| 2.5.2 一维系统的例子 |
| 2.5.3 文献概述 |
| 2.6 本章小结 |
| 参考文献 |
| 第三章 Lyapunov函数作为势函数:动力学等价性 |
| 3.1 摘要 |
| 3.2 绪论 |
| 3.3 Lyapunov函数和势函数的等价性 |
| 3.3.1 从物理的角度出发来看动力系统 |
| 3.3.2 一个构造性证明 |
| 3.4 例子 |
| 3.4.1 平方和 |
| 3.4.2 极限环 |
| 3.5 讨论 |
| 3.5.1 奇异性 |
| 3.5.2 Lyapunov方程和广义爱因斯坦关系 |
| 3.5.3 构造Lyapunov函数 |
| 3.6 本章小结 |
| 参考文献 |
| 第四章A-型随机积分下的极限环系统 |
| 4.1 摘要 |
| 4.2 绪论 |
| 4.3 A-型随机积分 |
| 4.4 极限环系统的解析结果 |
| 4.4.1 旋转对称的平面极限环系统 |
| 4.4.2 一般的平面极限环系统 |
| 4.5 本章小结 |
| 参考文献 |
| 第五章 前列腺癌的核心内源性网络模型 |
| 5.1 摘要 |
| 5.2 核心网络的构建 |
| 5.2.1 细胞周期模块 |
| 5.2.2 细胞凋亡模块 |
| 5.2.3 细胞代谢模块 |
| 5.2.4 免疫应答模块 |
| 5.2.5 生长因子模块 |
| 5.2.6 细胞间基质模块 |
| 5.2.7 前列腺特异性因子模块 |
| 5.3 建模结果 |
| 5.4 前列腺癌状态的稳定性 |
| 5.5 从系统生物学的角度来理解癌症 |
| 5.6 内源性网络理论在肝细胞肝癌和胃癌中的应用 |
| 5.6.1 肝细胞肝癌 |
| 5.6.2 胃癌 |
| 5.7 在临床和药学上的应用:寻找新的药物靶点和生物标志物 |
| 5.8 本章小结 |
| 参考文献 |
| 第六章 内源性网络建模急性早幼粒细胞白血病 |
| 6.1 摘要 |
| 6.2 绪论 |
| 6.3 结果 |
| 6.3.1 急性早幼粒细胞白血病的内源性网络 |
| 6.3.2 网络中的吸引子:急性早幼粒细胞白血病作为一个由内源性网络所决定的稳态 |
| 6.3.3 吸引子之间的转换:理解白血病发病原因和药物治疗机理 |
| 6.3.4 与基因表达谱数据的比较 |
| 6.4 本章小结和讨论 |
| 6.5 方法 |
| 6.5.1 网络构建 |
| 6.5.2 网络动力学建模 |
| 6.6 附录 |
| 6.6.1 关于动力学模型的细节 |
| 6.6.2 补充的图和表 |
| 参考文献 |
| 第七章 内源性网络理论研究骨质疏松和锶疗法的机制 |
| 7.1 摘要 |
| 7.2 绪论 |
| 7.3 结果 |
| 7.3.1 网络中的节点 |
| 7.3.2 节点间的相互作用 |
| 7.3.3 网络的动力学分析 |
| 7.4 本章小结和讨论 |
| 7.5 附录 |
| 7.5.1 布尔动力学方程 |
| 7.5.2 网络的参考文献 |
| 参考文献 |
| 第八章 总结与展望 |
| 8.1 总结 |
| 8.2 论文创新点 |
| 8.3 展望和有待解决的问题 |
| 参考文献 |
| 附录A 急性早幼粒细胞白血病内源性网络中相互作用的参考文献 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 |
（10）TLR4介导的信号通路对肝细胞凋亡的影响及氧化苦参碱的干预机制研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 引言 |
| 第一部分 TLR4/PI3K/AKT/GSK3Β 信号通路对大鼠肝BRL-3A细胞凋亡的影响 |
| 1.1 前言 |
| 1.2 材料 |
| 1.3 方法 |
| 1.4 结果 |
| 1.5 讨论 |
| 1.6 小结 |
| 第二部分 TLR4/P38/JNK信号通路对大鼠肝BRL-3A细胞凋亡的影响 |
| 2.1 前言 |
| 2.2 材料 |
| 2.3 方法 |
| 2.4 结果 |
| 2.5 讨论 |
| 2.6 小结 |
| 第三部分 氧化苦参碱对BRL-3A细胞凋亡的抑制作用及其机制研究 |
| 3.1 前言 |
| 3.2 材料 |
| 3.3 方法 |
| 3.4 结果 |
| 3.5 讨论 |
| 3.6 小结 |
| 第四部分 氧化苦参碱对急性肝衰竭大鼠肝细胞凋亡抑制作用及其机制研究 |
| 4.1 前言 |
| 4.2 材料 |
| 4.3 方法 |
| 4.4 结果 |
| 4.5 讨论 |
| 4.6 小结 |
| 参考文献 |
| 综述 肝细胞凋亡信号途径研究进展 |
| 参考文献 |
| 英文缩略词表 |
| 攻读学位期间取得的科研成果 |
| 致谢 |
四、Transforming growth factor-β1 suppresses serum deprivation-induced apop-tosis via activation of ERK1/ERK2 and the inhibition of p38 activity and ceramide production（论文参考文献）
- [1]Modulation of cell physiology under hypoxia in pancreatic cancer[J]. Matias Estaras,Antonio Gonzalez. World Journal of Gastroenterology, 2021(28)
- [2]基于氧化应激探讨槲皮素防治椎间盘退变的实验研究[D]. 张树文. 新疆医科大学, 2021(01)
- [3]氢化镁调控PLIN2缓解结晶肾损伤的作用和机制研究[D]. 程劲. 中国人民解放军海军军医大学, 2020(05)
- [4]TGF-β1的岩藻糖基化修饰对卵巢癌细胞线粒体自噬的影响及机制[D]. 金山. 中国医科大学, 2020(01)
- [5]Regulatory role of sphingosine kinase and sphingosine-1-phosphate receptor signaling in progenitor/stem cells[J]. Mei Li Ng,Nagendra S Yarla,Mario Menschikowski,Olga A Sukocheva. World Journal of Stem Cells, 2018(09)
- [6]orexin-A对缺氧海马神经元的作用及机制研究[D]. 李国华. 山东大学, 2018(12)
- [7]铅致阿尔茨海默症样变神经毒性及对相关通路蛋白表达的影响[D]. 李星. 郑州大学, 2017(11)
- [8]IQGAP1在高糖诱导足细胞凋亡中的作用及其机制探讨[D]. 孔刚. 山东大学, 2016(08)
- [9]癌症内源性网络理论及其非线性随机动力学基础[D]. 袁若石. 上海交通大学, 2016(03)
- [10]TLR4介导的信号通路对肝细胞凋亡的影响及氧化苦参碱的干预机制研究[D]. 张弦. 苏州大学, 2016(11)