一、常用的中枢神经系统药物体内分析方法（论文文献综述）
弓烨弘[1]（2021）在《色氨酸及代谢物抑制β-淀粉样蛋白聚集的分子动力学研究 ——对运动延缓阿尔茨海默病的机理初探》文中提出研究目的:阿尔茨海默病（Alzheimer’s disease,AD）,是众多神经退行性疾病中影响人数最多的一种,脑内β-淀粉样蛋白（β-Amyloid,Aβ）聚集引发的神经毒性被证实是导致AD的关键因素。虽然研究者们长期致力于Aβ聚集及其抑制的研究,但至今仍未开发出有效的治疗药物,目前迫切需要寻找无毒副作用且不受限于血脑屏障的治疗手段和方法。运动能够促进脂肪动员,诱导人体必需氨基酸色氨酸（Tryptophan,Trp）高效跨过血脑屏障,在增强脑内色氨酸水平的同时也增强了其代谢物——人体的重要神经递质血清素（Serotonin,Ser）及激素褪黑素（Melatonin,Mel）的合成。实验研究发现,色氨酸能够对Aβ的聚集过程产生抑制,破坏成熟的Aβ纤维,降低Aβ纤维的神经毒性,并且血清素和褪黑素同样也被证明能够抑制Aβ的纤维化过程,但目前这些分子发挥抑制作用的具体机理仍不清晰。本研究采用分子动力学模拟、副本交换分子动力学模拟等方法探究色氨酸及其代谢物（血清素和褪黑素）抑制/破坏Aβ低聚体和Aβ原纤维的分子机理,能够对运动影响Aβ纤维化过程提供解释的视角,为阐明运动影响AD病理进程提供一定的理论支持,并为运动干预等药物替代疗法和药物设计提供结构基础和理论借鉴。研究方法:为研究色氨酸及代谢物（血清素和褪黑素）影响Aβ聚集过程的微观机理,本研究采用全原子副本交换分子动力学模拟,研究了色氨酸、血清素和褪黑素对Aβ低聚体聚集的抑制机理,并采用全原子常规分子动力学模拟研究了这些小分子解离Aβ原纤维的机理。本研究中的所有全原子分子动力学模拟均使用GROMACS软件进行,使用GAFF力场处理色氨酸、血清素和褪黑素的相关参数,正式的分子动力学模拟采用AMBER99SB-ILDN力场。此外,本研究所涉及的数据处理与分析同样使用GROMACS进行,与此同时,使用自编脚本与程序和一些第三方程序作为数据分析的补充工具。研究结果:阐明色氨酸及代谢物影响Aβ聚集过程的分子机理,有助于为运动延缓AD病理进程提供解释。本研究综合使用分子动力学和副本交换分子动力学模拟方法,对现有实验难以表征的色氨酸及代谢物抑制Aβ聚集的细节机理进行探究。研究的主要结果如下:（1）色氨酸（Trp）有效抑制了二级结构中β-sheet结构的生成,尤其是在N-端区域2AEF4、中心疏水区域17LVF19和C-端区域34LMVGGVV40,同时Trp也促进了对应区域coil和helix结构的生成。Trp削弱了Aβ42二聚体中氨基酸对之间的相互作用,对链间相互作用的削弱更显着,从溶液可及性表面积、链间接触面积、链间接触数量和链间结合自由能的计算也得到了证实。本研究识别出Aβ42二聚体中Trp的主要结合位点,包括F4、Y10、F19、F20、I31、I32和34LMVGGV39。针对Trp与Aβ42原纤维相互作用的研究结果显示,Trp的加入显着降低了Aβ42原纤维N-端的结构稳定性,并破坏了Aβ42原纤维N-端的β-sheet结构,RMSF计算结果则显示Trp增强了N-端区域的蛋白柔性。Trp能够破坏肽链间的稳定性,减少主链氢键,破坏局部疏水核心HC1的疏水相互作用,并削弱K28和A42形成链内和链间盐桥的稳定性。Trp与Aβ42原纤维的主要结合位点包括F4、H6、Y10、H13、H14和L34。（2）血清素（Ser）能够影响Aβ42二聚体的二级结构,在26SNKGAII32区域抑制beta结构的生成。通过分析氨基酸-氨基酸相互作用、溶液可及性表面积、链间接触面积、接触数量和结合自由能的结果可知,Ser的加入明显影响了Aβ42二聚体整体和局部的链间相互作用。本研究识别出Ser与Aβ42二聚体结合于4FRH6、Y10、13HHQKLVFF20、K28、I31、I32和34LMV36。在Ser与Aβ42原纤维相互作用的分析中发现Ser能够削弱Aβ42原纤维的结构稳定性,并且对N-端和C-端区域产生的影响更为明显。此外,Ser的加入还在很大程度上破坏了K28-A42之间的链内和链间盐桥。从综合接触数量、氢键数量和π-π堆积形式的计算结果可知,Ser能够减弱HC1中的疏水相互作用,破坏N-端的β-sheet结构,削弱了原纤维的结构稳定性。（3）Aβ42原纤维的Cα-RMSD结果显示,血清素（Ser）对Cα-RMSD的提高强于质子化血清素（Protonated serotonin,Serpro）。而回旋半径的计算结果则显示质子化后的Serpro能在一定程度上增大原纤维的回旋半径。针对Ser/Serpro影响链间接触数量和结合能的研究结果显示,Ser和Serpro均能减少接触数量并削弱链间结合能,且Serpro的效果相对较强。有关氨基酸相互作用的分析结果显示,尽管Ser/Serpro均能通过破坏HC1中氨基酸间的疏水相互作用和K28-A42盐桥相互作用,但Ser的破坏效果强于Serpro。本研究识别出芳香相互作用主要驱动了Ser与结合位点F4、H6、Y10、H13、Q15和L34之间的结合,而芳香相互作用、疏水相互作用和静电相互作用共同驱动了Serpro与结合位点D1、F4、R5、H6、D7、Y10、H13、Q15、F20、E22、D23和L34的结合。但尽管Serpro的结合位点更加广泛并与更多芳香氨基酸形成了π-π堆积,但Ser与结合位点之间的结合强度更强且与原纤维N-端形成的π-π堆积形式更加丰富,这使Ser能够在更大程度上破坏Aβ42原纤维的稳定结构,解聚已形成的Aβ42纤维。（4）褪黑素（Mel）在Aβ42二聚体上的结合位点几乎遍布整个序列。Mel削弱了N-端区域和中心疏水区域形成beta结构的几率,抑制Aβ42低聚体进一步纤维化。Mel能够减少Aβ42二聚体中链间氨基酸对和链内氨基酸对的相互接触,尤其对链间相互作用的影响更加显着。针对二聚体溶液可及性表面积、两条肽链间的接触面积和数量以及结合自由能的计算结果也显示,Mel能够削弱相邻肽链的链间相互作用。针对Mel和Aβ42原纤维相互作用的研究结果显示,Mel能够提高Aβ42原纤维的Cα-RMSD,降低原纤维的β-sheet结构含量,削弱Aβ42原纤维的链间稳定性。并同时减少疏水核心中的氨基酸相互接触,破坏K28和A42之间的链间和链内盐桥。此外,本研究还识别出Mel能够广泛结合于Aβ42原纤维的外表面和内表面。（5）色氨酸（Trp）与色氨酸混合血清素（Trp＿Ser）均提高了Aβ42原纤维的Cα-RMSD,但尽管Trp＿Ser在N-端和C-端共同提高了Aβ42原纤维结构的Cα-RMSD,但Trp仍能通过仅对N-端结构Cα-RMSD的影响,在更大程度上破坏Aβ42原纤维的整体稳定性。RMSF、主链氢键和Rg的结果同样显示,Trp在更大程度上使整体蛋白构型由紧凑转为松散。同时,Trp＿Ser对链间相互作用的削弱则强于Trp。对二级结构的分析显示Trp和Trp＿Ser都能够明显降低原纤维N-端形成β-sheet的几率。疏水核心稳定性的分析结果表明,Trp和Trp＿Ser分别更加明显地破坏了原纤维N-端和C-端的稳定结构并且Trp＿Ser在更大程度上破坏了K28-A42盐桥。本研究还识别出Aβ42＿protofibril+Trp和Aβ42＿protofibril+Trp＿Ser体系中,Trp和Trp＿Ser的结合位点十分相似,几乎都位于原纤维的N-端。研究结论:（1）Trp能够抑制Aβ42二聚体β-sheet等有序结构的生成,从而使蛋白构象在Trp的抑制效果下,保持更加无序的二级结构。Trp通过削弱二聚体链间相互作用,破坏Aβ42纤维化的结构基础,以此抑制Aβ42异常纤维化的过程。Trp与Aβ42二聚体N-端的结合主要通过π-π堆积作用和氢键作用,而与C-端的结合则主要通过疏水相互作用。同时,Trp的加入显着降低了Aβ42原纤维的结构稳定性,且最显着的影响发生在Aβ42的N-端区域,Trp与N-端形成了较多的氢键和丰富的π-π堆积,说明Trp可在Aβ42的N-端对Aβ42原纤维产生破坏,进而解聚已形成的纤维并抑制纤维进一步聚集。（2）Ser在26SNKGAII32区域有效抑制了Aβ42二聚体的二级结构中beta结构的生成。并且,Ser在很大程度上削弱了由链间相互作用形成的稳定结构,进而阻止形成稳定的聚集体。静电相互作用、疏水相互作用及苯环相互作用共同驱动,且与N-端带电氨基酸形成的氢键是使Ser更多与N-端结合的主要动力。此外,Ser能够削弱Aβ42原纤维N-端和C-端区域的结构稳定性,破坏N-端的β-sheet结构。研究发现Ser可以依靠氢键和π-π堆积与Aβ42原纤维的N-端结合,使N-端成为解聚已形成的Aβ42纤维的关键区域。（3）Ser能够削弱Aβ42原纤维的稳定性,促进解聚已形成的稳定纤维,而质子化后的Serpro尽管能在一定程度上使蛋白结构变得松散,但对蛋白整体结构的影响不及Ser。Serpro对原纤维的链间稳定性的削弱效果相对强于Ser,表明Serpro主要通过削弱链间稳定性对已形成的Aβ42纤维进行解聚。而Ser在削弱链间作用的基础上,还能通过降低N-端的β-sheet形成几率,破坏Aβ42原纤维N-端的β-sheet结构,进而解聚Aβ42原纤维。此外,Ser与结合位点的结合主要依靠芳香相互作用,而Serpro与结合位点的结合主要依靠芳香相互作用、疏水相互作用和静电相互作用共同驱动,这促使相比于Serpro,Ser能够在更大程度解聚已形成的Aβ42纤维。（4）Mel通过削弱N-端区域和中心疏水区域的beta结构形成几率,并削弱肽链间的相互作用,达到对Aβ42低聚体进一步纤维化的抑制。Mel能够通过π-π堆积与疏水相互作用和Aβ42二聚体的几乎整个序列产生结合,其中疏水相互作用是驱动Mel与C-端结合的重要动力。同时,Mel能够大幅降低Aβ42原纤维N-端区域和C-端区域的结构稳定性,关于结合模式的分析显示,驱动Mel与N-端和C-端结合的主要动力分别是π-π堆积作用和疏水相互作用,并且在这些作用的共同影响下,Mel能够在很大程度上破坏原纤维N-端和C-端的β-sheet结构。（5）Trp和Trp＿Ser分别通过削弱Aβ42原纤维的整体稳定性和链间相互作用破坏原纤维稳定结构。Trp和Trp＿Ser都能够明显破坏原纤维N-端稳定的β-sheet结构,以此解聚Aβ42纤维,且Trp＿Ser的解聚效果更强。由于对疏水相互作用和盐桥相互作用的影响,Trp和Trp＿Ser分别对原纤维N-端和C-端的稳定结构产生更加明显的破坏。Trp和Trp＿Ser的结合位点几乎同样都位于原纤维的N-端。其中,与N-端带电氨基酸和N-端芳香氨基酸形成的氢键相互作用和丰富的π-π堆积,共同驱动了两个体系中小分子与原纤维之间的结合。
汪戎锦[2]（2021）在《基于代谢组学的刺五加叶治疗缺血性脑卒中作用机制研究》文中进行了进一步梳理缺血性脑卒中作为全球性的公共健康问题,危害着全世界人类的健康,并以其高发病率和高死亡率,引起了科学家们的广泛关注。缺血性脑卒中发生的主要原因为凝结的血栓或栓子阻塞在脑动脉中使大脑供血受限从而引起氧气和营养的供应不足。刺五加叶作为一种可再生资源,因其化学成分以及药效作用与刺五加根相似,被广泛用于脑血管疾病、缺血性心脏病等疾病的治疗。本实验室在前期的研究工作中筛选并制备了刺五加叶的主要活性组分,并采用药效学研究证明了刺五加叶具有抗氧化、抑制细胞损伤以及缺血性脑卒中的保护作用。然而,刺五加叶的化学成分复杂,在体内作用于多个靶点,致使其治疗缺血性脑卒中的整体作用机制研究尚不够深入,目前缺乏系统研究,在一定程度上限制了刺五加叶的开发及应用。代谢组学作为一种系统生物学研究方法,能够对内源性小分子的整体变化进行系统分析,逐渐成为揭示病机复杂疾病的发病机理,和多成分、多靶点药物作用机制的一种强有力工具。因此,本研究围绕脂质异常、神经损伤以及菌群失调等缺血性脑卒中的关键病理环节,采用基于质谱技术的多样本（血清、粪便、尿液、脑组织）代谢组学的研究方法,对刺五加叶治疗缺血性脑卒中的作用机制进行了深入研究,并阐明其科学内涵。主要研究内容包括以下几个方面:1.刺五加叶治疗缺血性脑卒中的血清脂质组学及其神经保护作用研究首先对刺五加叶的主要活性组分进行基于UPLC方法的成分分析。结果表明,刺五加叶的主要活性组分含有有机酸类化合物、黄酮类化合物和糖苷。其次,建立大鼠缺血性脑卒中疾病模型,并给予刺五加叶治疗四周。由于脂质异常、神经损伤、氧化应激和炎症反应是缺血性脑卒中发作的四个主要方面,本文围绕以上四个方面展开了研究。首先,采用基于UPLC-Q-TOF/MS的脂质组学方法,研究缺血性脑卒中发生后大鼠血清脂质的代谢紊乱,以及刺五加叶的调节作用。利用UPLC-Q-TOF/MS采集刺五加叶给药四周后缺血性脑卒中大鼠血清样本的脂质代谢轮廓,结合Progenesis QI软件进行包括多元统计学分析、潜在脂质标记物鉴定以及通路分析在内的数据处理。共鉴定出27种脂质组学生物标记物,包括PC,PE,SM和TG类脂质,分布在各种脂质代谢途径中,包括甘油磷脂、亚油酸、α-亚麻酸、甘油脂、鞘脂和花生四烯酸代谢途径。结果表明,刺五加叶能够调节缺血性脑卒中发生发展过程中出现的脂质代谢紊乱。其次,针对缺血性脑卒中发生时的神经损伤过程,采用UPLC-TQ/MS对大鼠脑组织及血清中10种神经递质进行了定量研究。结果表明,缺血性脑卒中能够导致谷氨酸（Glu）,天冬氨酸（Asp）等兴奋性氨基酸的过度释放,产生神经毒性,还能够增加γ-氨基丁酸（GABA）、五羟色胺（5-HT）、去甲肾上腺素（NE）、肾上腺素（E）、多巴胺（DA）以及牛磺酸（Tau）的含量,并降低抑制性神经递质甘氨酸（Gly）以及神经炎症调节剂乙酰胆碱（Ach）的含量。而给予刺五加叶治疗后,能够使以上神经递质在脑组织和血清中的水平均向正常水平调节,说明其能够通过调节缺血性脑卒中大鼠的神经递质含量发挥保护中枢神经系统的作用。最后,通过MDA和SOD的定量分析,检测缺血性脑卒中后氧化应激程度,通过TNF-α,IL-6和IL-10的定量分析,检测炎症反应程度。结果表明,刺五加叶可以在一定程度上减轻机体的氧化应激和炎症损伤,从而减轻缺血性脑卒中对机体的损伤。从调节脂质代谢紊乱、神经损伤、氧化应激反应以及炎症反应等方面揭示了刺五加叶治疗缺血性脑卒中的作用机制。2.刺五加叶治疗缺血性脑卒中粪便代谢组学研究及其对微生物-肠-脑轴的影响微生物-肠-脑轴双向通讯系统与缺血性脑卒中的发生及预后相互关联,这种关联作用近年来逐渐引起科学家的广泛关注。本文采用基于UPLC-Q-TOF/MS的粪便非靶向代谢组学方法,结合基于UPLC-TQ/MS的粪便胆汁酸靶向代谢组学方法,以及16S r RNA粪便菌群测序,研究了刺五加叶对缺血性脑卒中模型大鼠微生物-肠-脑轴的平衡作用。首先,利用UPLC-Q-TOF/MS采集刺五加叶治疗四周后缺血性脑卒中大鼠粪便样本的代谢轮廓,结合多元统计学分析筛选具有显着差异的潜在生物标记物,并进行通路分析,共鉴定出40个潜在的差异性生物标记物,主要涉及花生四烯酸代谢通路、不饱和脂肪酸的生物合成途径、胆汁酸的生物合成途径、鞘脂代谢通路等。以上生物标记物的含量在缺血性脑卒中发生后具有显着的变化,而刺五加叶可以调节其含量以恢复正常状态。其次,基于UPLC-TQ/MS的靶向代谢组学方法对13种胆汁酸进行了定量分析。结果显示,缺血性脑卒中发生时,大鼠粪便胆汁酸发生代谢紊乱,刺五加叶能够调节多种胆汁酸的含量,使其更加趋近于正常水平。最后,16S r RNA菌群测序结果表明,缺血性脑卒中可导致大鼠肠道内病原体富集,益生菌水平大幅降低,而刺五加叶能够使缺血性脑卒中大鼠体内病原体含量降低,同时增加益生菌水平。上述结果揭示了刺五加叶具有对缺血性脑卒中大鼠微生物-肠-脑轴的调节作用,为阐明刺五加叶治疗缺血性脑卒中的作用机制研究奠定基础。3.刺五加叶通过对益生菌的调节作用治疗缺血性脑卒中的机制验证选择能够被刺五加叶调节的益生菌给药缺血性脑卒中大鼠,验证给药刺五加叶后,益生菌水平的升高是发挥其治疗效果的重要因素之一。首先,培养罗伊氏乳酸杆菌以及丁酸梭菌并制备菌液,分别给予缺血性脑卒中大鼠以上两种菌液。经四周给药后,检测大鼠粪便的菌群组成。结果表明,与模型组比较,益生菌给药后的缺血性脑卒中大鼠粪便中菌群组成与含量产生较大变化,并与对照组大鼠粪便菌群组成更为相似。其次,采用基于UPLC-TQ/MS的定量方法检测缺血性脑卒中大鼠经益生菌给药后,脑组织中神经递质的含量变化。结果表明,给予两种益生菌后,具有神经毒性的神经递质含量降低,而具有神经调节作用的神经递质含量显着升高,更加趋近于健康大鼠。最后,通过ELISA法检测大鼠血清和脑组织中多种炎症因子IL-1β、IL-6、IL-10、TNF-α的含量和脑组织中MDA、SOD、COX-2、MAO的含量。结果表明,当缺血性脑卒中发生时,大鼠体内IL-1β、IL-6、TNF-α、MDA、COX-2和MAO含量显着升高,而IL-10和SOD含量显着降低。给予两种益生菌后,缺血性脑卒中大鼠体内以上指标的含量均能够被调节至正常水平,推测两种益生菌均能够通过减轻炎症及氧化应激损伤,对机体产生一定的保护作用。本研究验证了刺五加叶能够通过影响微生物-肠-脑轴的代谢,增加体内益生菌丰度,调节卒中引起的神经损伤、炎症反应以及氧化应激损伤,从而起到对机体的保护作用。4.刺五加叶治疗缺血性脑卒中的尿液代谢组学研究尿液样本能够准确、灵敏地反映机体的代谢变化,为代谢组学研究中最重要的生物样本。采用基于UPLC-Q-TOF/MS的非靶向尿液代谢组学方法对刺五加叶治疗缺血性脑卒中的作用机制进行研究并验证。采用UPLC-Q-TOF/MS采集大鼠尿液样本的代谢轮廓,结合Progenesis QI软件进行数据处理,筛选并鉴定潜在生物标记物,构建基因-酶-生物标记物代谢网络。本研究共筛选出42种在缺血性脑卒中疾病进程中具有显着变化的潜在生物标记物,经刺五加叶治疗后,38种生物标记物的含量变化能够被显着调节,涉及体内牛磺酸和次牛磺酸代谢通路、花生四烯酸代谢通路、半胱氨酸和蛋氨酸代谢通路、类固醇激素生物合成途径、色氨酸代谢通路、酪氨酸代谢通路和嘧啶代谢途径等多种代谢途径的调节作用。最后,选择3种与以上通路相关的关键酶COX-2,NOS和MAO作为刺五加叶治疗的靶点酶,进行定量验证。结果表明,模型大鼠经刺五加叶治疗后血清和脑组织中三种酶的含量与假手术组大鼠相似,证明了刺五加叶可以通过调节以上三种酶的含量发挥刺五加叶治疗缺血性脑卒中的作用。本实验结果有助于进一步了解缺血性脑卒中的发病机制,并为刺五加叶的潜在治疗机制研究提供科学依据。5.基于高效同位素标记衍生化的刺五加叶治疗缺血性脑卒中尿液代谢组学研究高效化学同位素标记（CIL）衍生化结合液质联用（LC-MS）的代谢组学方法是使用靶向特定官能团的试剂标记生物样本,使所有具有相同官能团的代谢物生成相应的衍生代谢物,在提高总体代谢组学覆盖率的同时,将同位素引入标记代谢物中,使重同位素试剂衍生的代谢产物作为轻同位素试剂衍生代谢物产物的内标,从而提高代谢产物的定性及定量精度。本研究采用基于CIL LC-MS的刺五加叶治疗大鼠缺血性脑卒中的尿液代谢组学方法,分别对胺/酚类亚代谢组和羧酸类亚代谢组进行分析研究。结果表明,刺五加叶能够通过体内多种通路调节缺血性脑卒中发生后的代谢紊乱,与传统尿液代谢组学研究结果相比,CIL LC-MS法筛选出了更多潜在生物标记物,并覆盖更多体内代谢通路,得到了覆盖率更广、定量更精准的代谢组学结果。同时,在每条通路中匹配到更多的具有显着差异的代谢产物,明确通路中上游化合物及下游产物的显着变化及机制,使针对各通路的研究更加全面。最终,从神经保护、调节能量代谢、抑制炎症损伤、拮抗氧化应激的角度对刺五加叶治疗缺血性脑卒中的作用机制进行系统阐述。进而为刺五加叶治疗缺血性脑卒中的作用机制提供更加全面的科学依据。综上所述,本论文采用基于大鼠血清、粪便、尿液以及脑组织多种生物样本的代谢组学方法,进行刺五加叶治疗大鼠缺血性脑卒中作用机制的系统研究。将尿液和粪便的非靶向代谢组学研究,与血清脂质、脑组织神经递质以及粪便胆汁酸的靶向代谢组学研究相结合,明确刺五加叶对缺血性脑卒中大鼠体内多种代谢通路的调节作用,对脂质紊乱的调节作用,以及对神经系统的保护作用。其次,通过对大鼠粪便的菌群分析和验证实验,阐述刺五加叶可能通过调节微生物-肠-脑轴双向通讯系统发挥缺血性脑卒中的治疗作用,推测刺五加叶增加肠道益生菌含量是其发挥缺血性脑卒中治疗作用的关键因素之一。并采用基于高效同位素标记结合LC-MS的代谢组学方法,对体内胺/酚类亚代谢组及羧酸类亚代谢组进行全面分析,从神经保护、调节能量代谢、抑制炎症损伤、拮抗氧化应激的角度系统阐述刺五加叶治疗缺血性脑卒中的作用机制。本研究结合先进的分析技术手段,探讨中药的作用机制,为阐明刺五加叶治疗缺血性脑卒中的作用机制提供理论依据,同时也为中药作用机制的系统研究提供了新的方法路线。
尤荻[3]（2021）在《电刺激联合Cs-Au/GelMA水凝胶对臂丛神经损伤后神经病理性疼痛的疗效及机制研究》文中研究说明研究背景:臂丛神经损伤（brachial plexus injuries,BPI）后可能会遗留不同程度的运动和感觉功能障碍,其中神经节前颈根撕脱伤后会产生严重的神经病理性疼痛。由于同时累及中枢神经系统和周围神经系统,涉及多种复杂的病理生理变化,如神经炎症、胶质细胞活化等,常规的镇痛药物治疗很难获得令人满意的临床疗效。目前临床用于治疗神经病理性疼痛的药物包括非甾体类抗炎药、抗癫痫药、抗抑郁药和类阿片药物,尽管有多种药物可以选择,甚至是联合应用,但临床满意率仍不足一半,而且还要受到不同程度副作用的影响。近年,很多研究人员致力于组织工程学的研究,希望获得更为满意的疗效。水凝胶是由一种可通过非侵入性的方式注入受损部位的组织工程材料,具有良好的生物相容性、生物降解性、可塑性,并通过搭载药物、细胞、纳米粒子等进行局部释放,强化治疗作用,在神经损伤后的功能恢复和神经再生领域具有良好的应用前景。可见光交联的可注射性甲基丙稀酸明胶（methylacrylic acid gelatin,Gel MA）水凝胶,含有精氨酸-甘氨酸-天门冬氨酸序列,对细胞粘附、分化、增殖均具有积极的促进作用,已广泛用于心脏、皮肤、骨骼等多领域的研究中,也被证明可以在脊髓损伤的研究中发挥重要的生理功能。为此,我们拟构建一种基于Gel MA水凝胶的生物支架体系,通过加入壳聚糖（chitosan,Cs）改性的金纳米粒子（Cs-Au NPs）,利用金纳米独特生物学性能,抑制胶质细胞的增殖与分化,抑制促炎症细胞因子的产生,通过抑制神经炎症的水平减轻臂丛神经损伤后的神经病理性疼痛,而且金纳米粒子具有良好的导电性。神经损伤后主要是神经电传导的破坏,而电刺激（electrical stimulation,ES）治疗被报告可以有效改善神经损伤后的神经功能恢复,可以干预神经传导的“闸门变化”,抑制胶质细胞的增殖和活化。综合考虑神经炎症在神经病理性疼痛的发生和发展中的重要作用,我们拟构建一种含有Cs-Au NPs的Gel MA水凝胶,并联合电刺激共同治疗臂丛神经损伤后的神经病理性疼痛。本研究将在4章构建Cs-Au/Gel MA水凝胶,并对其表征进行检测,在第5章通过动物模型检测Cs-Au/Gel MA水凝胶和电刺激对神经病理性疼痛的治疗作用。研究目的:研究BPI后,神经病理性疼痛的发生、发展规律,以及这一过程中胶质细胞、神经炎症水平的变化规律。应用组织工程学手段结合物理治疗——电刺激,治疗BPI后的神经病理性疼痛,构建一种具有潜在导电性能、生物学安全性良好、具有可降解性、亲水性的Cs-Au/Gel MA,选取合适的电刺激频率。分析神经电刺激、Cs-Au/Gel MA水凝胶及其联合应用,对大鼠BPI引起的神经病理性疼痛模型行为学变化、生化改变、细胞学变化的影响,评价其在神经病理性疼痛治疗中的作用及机制,推断其减轻神经病理性疼痛的机制,可能与抑制小胶质细胞和星形胶质细胞的增殖、活化,降低促炎症细胞因子的产生,抑制神经炎症有关。研究方法:1.选定初始机械性刺激缩足阈值（mechanical withdrawal threshold,MWT）为4g的成年雌性SD大鼠,建立神经节前颈根撕脱伤（preganglionic cervical root avulsion,PCRA）模型（钝性撕脱C6-C8颈神经后根）,研究大鼠臂丛神经损伤后的行为学、细胞学、生化指标变化。2.通过与假手术组进行对比,在损伤后的第1、2、3、5和7天分别测量两组大鼠的MWT和热缩足反射潜伏期（thermal withdrawal latency,TWL）,每次进行行为学检测后,将大鼠处死切取大鼠脊髓组织进行免疫印迹检查,检查指标包括离子钙结合受体分子-1（Ionized calcium binding adaptor molecule 1,Iba-1）、胶质纤维酸性蛋白（Glial fibrillary acidic protein,GFAP）、白介素-1β（Interleukin-1β,IL-1β）、白介素-6（Interleukin-6,IL-6）和肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α,TNFα）。3.制备Cs-Au/Gel MA水凝胶并进行表征检测,先合成Cs包裹的Cs-Au NPs,再通过细胞实验筛选最适的浓度用于合成Cs-Au/Gel MA水凝胶。4.使用明胶为原材料合成Gel MA水凝胶,并检测其固液转化性能,合成Cs-Au/Gel MA水凝胶检测其亲水性、降解性。5.通过细胞实验筛选最适合的电刺激频率后,应用于动物实验中。6.实验动物随机分为PCRA组（不给予治疗）、ES组（200 Hz电刺激治疗）、Cs-Au/Gel MA水凝胶组（损伤局部注射Cs-Au/Gel MA水凝胶）、联合治疗组（电刺激治疗+水凝胶局部注射）;治疗3日后,处死大鼠后取脊髓组织进行免疫荧光染色,检测星形胶质细胞和小胶质细胞含量,免疫印迹法检测Iba-1、GFAP、IL-1β、IL-6和TNFα含量;免疫荧光染色检测受累节段脊髓组织内脑源性神经营养因子（brain-derived neurotrophic factor,BDNF）含量和超氧化物歧化酶-1（Superoxide dismutase-1,SOD1）、超氧化物歧化酶-2（Superoxide dismutase-2,SOD2）、氮氧化物-2（nitrous oxides-2,NOX2）、氮氧化物-4（nitrous oxides-4,NOX4）等氧化损伤指标;7.连续监测PCRA组、ES组、Cs-Au/Gel MA水凝胶组、联合治疗组大鼠造模后3周的行为学变化——MWT和TWL。研究结果:1.与假手术组比,PCRA模型大鼠术后的MWT和TWL明显降低,过程中可见假手术组虽然术后早期也会出现疼痛敏感,但很快可以自行恢复;而PCRA组术后早期疼痛敏感水平略有改善,但之后一直维持在一个疼痛敏感状态。2.与假手术组相比,PCRA模型鼠的脊髓组织中Iba-1和GFAP的表达均增加,即胶质细胞含量增加;IL-1β、IL-6和TNF-α的分泌水平也均有升高,即促炎症细胞因子含量增加,并会在损伤后的第2、3日达到高峰,所以后续研究中我们选取术后前3日作为干预治疗的时间窗。3.Cs-Au NPs形态均匀,呈分散分布,浓度为0.05 mg/ml时神经干细胞的增殖情况最佳,并按此浓度制备Cs-Au/Gel MA水凝胶。4.0.05 mg/ml的Cs-Au/Gel MA水凝胶接触角约为81.2°,具有良好的亲水性;在大鼠皮下植入Cs-Au/Gel MA水凝胶后,术后1-5周进行取样发现均无明显的炎症反应、且水凝胶体积逐渐减小,表明其具有良好的生物安全性和可降解性。5.电刺激和Cs-Au/Gel MA水凝胶均可以一定程度上抑制胶质细胞的增生和促炎症细胞因子的产生,但电刺激的作用更为明显,疗效更为显着。损伤后3日,相较于PCRA组,Cs-Au/Gel MA组、ES组、联合治疗组Iba-1表达量均明显减少（P<0.01）;相较于PCRA组,ES组、联合治疗组GFAP表达量均明显减少（P<0.01）;6.相较于PCRA组,三个治疗组中的IL-1β、IL-6和TNF-α均明显下降,并具有统计学差异（P<0.01）。7.电刺激还可以有效抑制BDNF的产生,而Cs-Au/Gel MA水凝胶对氧化损伤抑制作用更为明显。二者的联合治疗,较单独任何一种都更为有效。研究结论:1.PCRA后会出现明显的神经病理性疼痛,且在早期不会自行好转。2.PCRA后大鼠脊髓内星形胶质细胞和小胶质细胞会发生增殖与活化,其中小胶质细胞在疼痛维持的过程中可能更为重要。3.PCRA后大鼠脊髓内IL-1β、IL-6、TNF-α等促炎细胞因子会增加,其峰值出现在损伤后的48-72 h。4.Cs-Au纳米粒子具有良好的生物相容性,但过高浓度反而可能抑制细胞的增殖。5.Cs-Au/Gel MA水凝胶是一种良好的组织工程支架,具有良好的塑性性、生物相容性、可降解性。6.ES和Cs-Au/Gel MA水凝胶均可抑制PCRA后的胶质细胞增殖与活化、减少促炎症细胞因子的产生、抑制神经病理性疼痛的发生和发展,且二者联合应用疗效可获得进一步的提高。
罗文琪[4]（2021）在《基于含硒纳米材料的构建及其治疗脊髓损伤的实验研究》文中指出研究背景:脊髓损伤（Spinal cord injury,SCI）是暴力因素（坠落,车祸等）直接或间接损伤脊髓组织,导致患者感觉、运动、大小便、性功能障碍等一种严重疾病。SCI不仅严重影响患者的生活质量,也给家庭、社会和医疗保健系统带来沉重的负担。目前临床上常用的治疗方法是手术减压解除脊髓压迫,稳定脊柱生物力学力线。但是,手术减压的治疗效果与损伤程度、患者就诊时间、身体耐受程度等多种因素密切相关。另外,在脊髓损伤的急性期,脊柱外科医师常给予大剂量甲基强的松龙的冲击治疗,但是,众多研究表明大剂量甲基强的松龙冲击疗法的治疗效果并不确切,并且常伴随感染、消化道大出血、肺栓塞等并发症。因此,大剂量甲基强的松龙冲击疗法治疗SCI仍有很大局限性。所以,临床上迫切需要新的治疗SCI方法。SCI治疗效果不理想可能与其复杂的级联动态病理过程有关。这种复杂的病理过程主要包括以下四个方面,第一,外伤导致的脊髓内出血、缺血、缺氧、血栓形成;第二,血-脊髓屏障破坏后,循环系统中的中性粒细胞、淋巴细胞、巨噬细胞等炎症细胞浸润至脊髓,并分泌大量促炎因子如IL-1β,TNF-α等;第三,炎症细胞（中性粒细胞、小胶质细胞、巨噬细胞等）产生大量活性氧（Reactive Oxygen Species,ROS）,过量ROS打破了脊髓自身的氧化还原平衡,损伤核酸、蛋白质、脂质等诱导神经元、少突胶质细胞凋亡;第四,凋亡细胞产生的大量细胞碎片募集炎症细胞浸润并分泌促炎因子,加重炎症反应使微环境进一步恶化。目前,脊髓损伤的治疗包含神经再生和神经保护两个方向。神经再生包括移植骨髓间充质干细胞、胚胎干细胞、诱导多能干细胞等或刺激自体有潜能的干细胞再生,但SCI后恶劣的微环境不利于移植的干细胞存活或难以向神经元分化限制了以上疗法的治疗效果及临床应用。神经保护则通过抑制或中止SCI后复杂的级联动态病理过程,改善损伤微环境提高神经元、胶质细胞对损伤因素的耐受程度,促进细胞在恶劣的微环境存活、重塑,进而恢复神经功能。研究目的:随着纳米材料与临床医学的深度融合及相关领域的快速发展,纳米材料在神经保护方面的应用也得到了重视。纳米材料既有良好的生物相容性又能够有效清除ROS、抑制炎症反应,因此,利用纳米材料治疗SCI是当前的研究热点。为此,本文拟合成制备了具有清除ROS功能的硒杂化碳量子点（Selenium-Doped Carbon Quantum Dots,Se-CQDs）,旨在探讨Se-CQDs的生物相容性、抗氧化性、抑制炎症性和神经保护性。并在此基础上进一步优化,设计并制备了既能清除ROS同时具有靶向性的透明质酸-硒（Hyaluronic acid-Selenium,HA-Se）纳米粒子。旨在探讨HA-Se纳米粒子在体内外的靶向性及其对SCI的治疗效果。研究方法:（1）通过水浴加热L-硒代胱氨酸的方法制备了Se-CQDs。采用动态光散射（DLS）,透射电镜（TEM）,马尔文粒度仪对Se-CQDs大小、形态、电位进行表征。采用核磁共振氢谱（1H NMR）和碳谱(13C NMR),傅里叶变换红外线（FTIR）,x射线表面光电子能（XPS）,紫外吸收光谱,荧光光谱对Se-CQDs结构进行表征,明确合成物质结构及组成成分。同时,通过DPPH检测Se-CQDs清除自由基的效率。体外实验,首先通过MTT法验证了不同浓度Se-CQDs（6.25,12.5,25,50,100,200μg/m L）对细胞（N2a细胞、PC12细胞、星形胶质细胞）生物相容性的影响。同时,用MTT法检验了上述浓度Se-CQDs在250μM H2O2模拟的氧化应激环境对N2a细胞、星形胶质细胞的保护作用。另外,通过Elisa法探究了Se-CQDs对LPS刺激后BV2细胞炎症因子（IL-1β,IL-6,TNF-α）表达的影响。体内实验,采用标准的脊髓打击器制造大鼠脊髓挫伤模型。造模成功后脊髓损伤局部通过微量注射器原位给予盐水或不同浓度的Se-CQDs（250μg/m L,1000μg/m L）各10μL,分组情况如下:saline组,Se-CQDs（250μg/m L）组及Se-CQDs（1000μg/m L）组。于术后24h取材提取脊髓损伤处的全蛋白,进行Western Blot实验,评估Se-CQDs在体内水平对Caspase-9,Cleaved caspase-3,Bcl-2,Bax凋亡相关蛋白表达量的影响。术后5d,心脏灌注取材通过免疫荧光染色（CD68,活化的小胶质细胞）评估Se-CQDs在体内水平抑制炎症的作用。剩余SD大鼠于造模后1d,1w,2w,3w,4w,5w,6w,7w和8w通过BBB评分连续评估下肢运动功能,同时记录大鼠恢复自主排尿的时间。于造模后8周心脏灌注取材,通过膀胱H&E和Masson染色,脊髓外像、脊髓H&E和LFB染色及脊髓免疫荧光染色（CS56&GFAP,Neu N&NF200）等系统评价Se-CQDs对急性SCI及相关膀胱改变的治疗效果。（2）透明质酸（Hyaluronic Acid,HA）在水溶液中作为稳定剂通过氧化还原体系制备HA-Se纳米粒子。采用动态光散射（DLS）,马尔文粒度仪,透射电镜（TEM）,扫描电镜（SEM）对HA-Se纳米粒子的大小、电位、形貌进行表征,采用傅里叶变换红外线（FTIR）,x射线表面光电子能（XPS）对HA-Se纳米粒子的结构进行表征。同时,通过DPPH检测HA-Se纳米粒子清除自由基的效率。体外实验,首先通过MTT法验证了不同浓度HA-Se纳米粒子（3.125,6.25,12.5,25,50,100μg/m L）对PC12细胞和星形胶质细胞生物相容性的影响。同时,用MTT法检验了50和100μg/m L HA-Se纳米粒子在100μM H2O2模拟的氧化应激环境下对星形胶质细胞保护作用。另外,通过Elisa法检测了HA-Se纳米粒子对LPS刺激BV2细胞后炎症因子（IL-1β,IL-6,TNF-α）表达量的影响。体内实验,采用标准的脊髓打击器制造大鼠脊髓挫伤模型。为了探究SCI后CD44表达情况,通过Western Blot法检测脊髓损伤各组间CD44表达量,同时,术后5d取材通过免疫荧光染色共定位法探究了CD44具体为何种细胞表达。进一步,为了评估HA-Se纳米粒子在脊髓的靶向性,采用尾静脉注射NH2-CY5荧光标记的HA-Se纳米粒子进行示踪,并于动物成像系统拍照记录组织分布。为了探究HA-Se纳米粒子对凋亡的影响,术后24h取材,检测假手术组,saline组和HA-Se纳米粒子组促凋亡蛋白Cleaved caspase-3的表达差异。另外,为了评估HA-Se纳米粒子抑制炎症的作用,术后5天心脏灌注后取材通过免疫荧光染色（CD68&Iba-1）评估不同浓度HA-Se纳米粒子（1mg/kg,5mg/kg,10mg/kg）在体内抑制炎症的作用。为了评估HA-Se纳米粒子治疗效果,于损伤后1d,1w,2w,3w,4w,5w,6w,7w,8w,9w,10w,11w和12w通过BBB评分连续评估下肢运动功能,通过脊髓外像、脊髓H&E和LFB染色及脊髓免疫荧光染色（Neu N&NF200）等评价HA-Se纳米粒子对急性SCI的治疗效果。研究结果:（1）制备了溶解性良好,大小均匀,半径为34.5±3.3 nm的Se-CQDs。体外实验结果表明Se-CQDs在200μg/m L浓度下对N2a细胞、PC12细胞、星形胶质细胞无明显毒性作用,并且62.5μg/m L、125μg/m L、250μg/m L、500μg/m L Se-CQDs清除DPPH效率分别为56.4%、72.1%、91%、98%。在250μM H2O2模拟氧化应激环境下,Se-CQDs有效提高了N2a细胞、星形胶质细胞、PC12细胞的存活率,并且能够抑制LPS刺激BV2产生炎症因子IL-1β和IL-6。此外,体内实验表明,相比saline组,Se-CQDs治疗组脊髓挫伤模型中脊髓空洞明显减小、神经脱髓鞘受到抑制、神经元得到保护、膀胱内膜增厚及膀胱纤维化均明显减轻。同时,促凋亡蛋白（Bax、Cleaved Caspase-3、Caspase-9）表达减少,抗凋亡蛋白Bcl-2表达增加且均具有统计学意义,BBB评分及自主排尿恢复时间表明,相比saline组,Se-CQDs治疗组下肢运动功能及膀胱排尿功能得到明显改善。（2）制备了溶解性好,核壳结构,大小均匀,直径为95±2.3 nm的HA-Se纳米粒子。体外实验结果表明HA-Se纳米粒子在100μg/m L浓度下对PC12细胞、星形胶质细胞无明显毒性作用,并且250μg/m L HA-Se纳米粒子在30min、60min、90min、150 min清除DPPH效率分别为0.8%、5.9%、9.7%、14.5%,1000μg/m L HA-Se纳米粒子在30 min、60 min、90 min、150 min清除DPPH效率分别为14.6%、19.5%、25.7%、31.8%。HA-Se纳米粒子有效促进了星形胶质细胞在H2O2模拟氧化应激环境下的存活,并且能够抑制LPS刺激BV2产生炎症因子IL-1β、IL-6、TNF-α。此外,本研究发现SCI后大鼠脊髓损伤局部星形胶质细胞及部分小胶质细胞CD44表达增加,且体外实验证实LPS刺激星形胶质细胞24 h后能够诱导其表达CD44。体内实验证实,HA-Se纳米粒子能够特异性的与CD44结合,相比saline组,HA-Se治疗组的脊髓空洞减小、神经脱髓鞘减轻、炎症细胞浸润受到抑制,促凋亡蛋白Cleaved Caspase-3表达减少,HA-Se治疗组下肢运动功能明显改善。研究结论:（1）Se-CQDs具有良好的生物相容性及高效的ROS清除能力,显着减轻了SCI氧化应激反应和炎症细胞募集浸润,明显改善了SCI后的神经功能,为治疗SCI提供了新的选择。（2）SCI后星形胶质细胞表达CD44增加,HA-Se纳米粒子通过结合星形胶质细胞表面高表达的CD44而具有良好的靶向性作用。同时,HA-Se纳米粒子本身还具备抑制炎症细胞浸润、减小脊髓空洞、保护神经元促进其存活的作用,明显改善了神经功能。这为制备靶向性纳米药物治疗SCI提供了新思路。
卢治国[5]（2021）在《纳米芳香药物治疗神经精神类疾病的研究》文中研究表明精神神经类疾病一般是由外在的重大应激事件和内在遗传因素共同导致的。神经精神类疾病最初只是情绪障碍。若不加以干预,情绪障碍会逐渐造成脑生理活动改变,并最终发展成神经精神类疾病疾病,从而给个人和社会带来沉重负担。精神障碍在情绪障碍阶段,需要舒适且温和的干预手段缓解患者的情绪,尤其是缓解患者外在的应激。芳香疗法作为一种辅助疗法,具有显着的缓解应激效果。然而,传统芳香疗法不够便利。并且,芳香药物分子挥发过快,会产生过浓的药气,影响治疗效果。基于此,本论文制备了一系列适用于日用品加香的纳米芳香药物。首先,针对壁纸白天使用而夜晚不使用的特点,本论文分别制备了基于无机介孔二氧化硅纳米颗粒（MSNs）和基于有机高分子胶束的光敏纳米芳香药物。另外,针对丝绸贴身使用且表面带负电荷的特点,本论文分别制备了基于阳离子胶束的pH响应纳米芳香药物和基于阳离子脂质体的温敏纳米芳香药物。为了更好地探究纳米芳香药物的神经调节作用,本论文分别从行为学水平,组织水平,细胞水平和分子水平探究了纳米芳香药物的作用。在行为学水平,本论文通过旷场测试和高架十字迷宫测试评价了纳米芳香药物减压和抗焦虑效果。在组织水平,本论文通过检测特定脑区的生理电位,探究了纳米芳香药物在神经活性方面的作用。在细胞水平,本论文通过免疫荧光切片探究了纳米芳香药物在神经再生方面的作用。在分子水平,本论文通过液相-质谱联用检测了纳米芳香药物在神经递质分泌方面的作用。最终,本论文发现了纳米芳香药物具有更好的神经调节作用,并且这种神经调节作用具有长效性。应激在抑郁症的发病过程中产生重要作用。纳米芳香药物具有较好的缓解应激效果,因此具有预防抑郁症的潜力。在纳米芳香药物的设计和制备方面,本课题受壁纸易发霉启发,提出了仿生纳米芳香药物的思路。首先,根据微生物多为棒状,本论文制备了基于棒状MSNs的形貌仿生纳米芳香药物。随后,鉴于多糖类菌外分泌物在粘附方面的作用,本论文在形貌仿生纳米芳香药物表面修饰壳聚糖分子,制备了功能仿生纳米芳香药物。通过分子动力学模拟本论文发现,功能仿生纳米芳香药物可以与壁纸上的纤维素产生大量氢键,并改变纤维素的空间结构,从而显着提高纳米芳香药物的粘附力。最后,本论文为功能仿生纳米芳香药物赋予化学反应能力,使纳米芳香药物可以与壁纸形成共价键。本论文命名为仿生plus纳米芳香药物。通过纳米芳香药物粘附和脱附实验本论文发现,仿生plus纳米芳香药物具有最好的粘附效果。本论文通过给小鼠注射皮质酮诱导构建抑郁症模型小鼠。在抑郁症模型小鼠构建的应激环境中,本论文将芳香药物处理的壁纸粘附在鼠笼壁上。并展现了显着的预防抑郁症效果。当精神障碍发展到脑生理活动改变的程度,则需要从内在的遗传因素和外在的应激因素协同治疗疾病。在本课题中,本论文以抑郁症为例,设计并制备了适用于鼻腔给药的基因-芳香药物递送体系。本论文引入Cysteine-odorranalectin促进递送体系经鼻入脑。另外,本论文引入舍曲林,促进递送体系靶向至病灶细胞。在以内涵体途径进入细胞后,递送体系优异的质子缓冲效应涨破内涵体,实现内涵体逃逸,并释放药物。基因药物siRNA可以下调血清素转运体表达,从而抑制血清素再摄取,提高血清素在病灶的含量,进一步从内在遗传因素治疗抑郁症。芳香药物柠檬醛则可下调应激水平,从外在的应激因素治疗抑郁症。结果表明,基因-芳香药物递送体系具有优异的抑郁症协同治疗效果。特殊应激环境,如航天员所处的微重力和孤独环境,会造成严重的焦虑情绪和认知记忆衰退。通过纳米芳香药物缓解应激预期具有较好的效果。然而,航天环境对清洁度要求较高。也就是说,纳米芳香药物应不易脱附。在本课题中,本论文对纳米芳香药物进行活性修饰,制备了反应性纳米芳香药物。反应性纳米芳香药物能够与壁纸形成共价键,从而牢固地粘附在壁纸上。通过后肢去负荷和将鼠笼壁换成毛玻璃,本论文模拟了航天微重力和孤独环境。结果表明,纳米芳香药物在模拟的航天特因环境下具有显着的抗焦虑和提高认知记忆效果。综上,本课题提供了芳香药物纳米化和缓控释平台,并初步探究了纳米芳香药物神经调节作用和机制,为纳米芳香药物应用于神经系统疾病治疗奠定了基础。另外,本课题提出了仿生纳米芳香药物思路,显着提高了纳米芳香药物在壁纸上的粘附,并应用于抑郁症的预防。对于抑郁症的治疗,本课题提出了基因-芳香药物联合治疗策略,并设计和制备了相应的基因-芳香药物鼻腔药物递送体系。最后,本课题还验证了纳米芳香药物在航天特因环境下抗焦虑和提高认知记忆效果。
张雷[6]（2021）在《血脑屏障体外微球模型的构建及其在中药神经毒性筛选中的应用》文中研究指明目的:血脑屏障（Blood-Brain Barrier,BBB）是大脑和血液循环之间的一种高度选择性和动态的亲脂屏障,它能有效地避免外源性和内源性毒性进入大脑,维持中枢神经系统（Central Nervous System,CNS）稳态。血脑屏障主要由脑微血管内皮细胞（BMVECs）、周细胞、星形胶质细胞和神经元组成。BMVECs是高度极化的细胞,其主要功能包括表达细胞转运蛋白、产生炎症介质、向脑组织运输营养物质以及阻止药物和毒素进入中枢神经系统。有毒物质想要到达中枢神经系统,其中一条途径则是造成BBB功能障碍。近年来,因服用中药而中毒的事件屡发,引起了人们对其肝、肾等毒性研究的重视,神经毒性却鲜有报道。本课题欲建立体外血脑屏障模型,并从具有明确其他器官毒性的中药单体库中初步筛选具有神经毒性的中药单体;利用已建立的BBB模型对中药神经毒性单体进行BBB障碍机制研究,以期为中药神经毒性评价提供新方法。方法:1、利用细胞在低吸附培养下会自发形成微球的特性,将HBMEC、HBVP、HA三种原代人源细胞进行三细胞共培养,以期形成与人体内结构类似的血脑屏障微球类器官:首先通过对培养3、7、14天的BBB微球进行活/死细胞染色,验证BBB微球是否可以长时间培养。其次,运用免疫荧光技术检测组成BBB微球的三种细胞成分的标志性蛋白及其分布的相对空间分布,并对BBB完整性的特征蛋白进行表征。另外,使用BBB微球进行右旋糖苷渗透性实验、Rh123外排实验,对BBB微球的生理功能进行验证。最后,我们使用BBB微球进行氧糖剥夺/复氧复糖（OGD/R）造模,通过评估ZO-1的表达和低氧诱导因子HIF-1α转录水平,验证BBB微球是否可以模拟疾病模型。2、通过探究具其他器官毒性的中药单体对神经细胞和BBB微球的影响,结合Discovery Studio软件研究中药单体是否有神经毒性。首先,通过Discovery Studio软件的ADMET模块获取44种单体的BBB透过性性质。然后通过作用于PC12细胞、HT-22细胞,运用Hoechst染色法分析神经细胞的活力,对44种有毒中药单体进行神经毒性初筛,得到目标药物斑蝥素（CTD）;然后将筛选出的药物作用于BBB微球,运用高内涵成像及RT-PCR技术检查其对BBB微球的细胞活力、BBB特征蛋白及基因水平的影响;运用高内涵成像及RT-PCR技术检测CTD对BBB微球的氧化应激、炎症相关基因转录水平、凋亡相关蛋白表达的影响。使用H&E染色、尼式染色检测CTD致ICR小鼠神经损伤的影响。结果:1、通过将HBMEC、HBVP、HA三种原代人源细胞在低吸附条件下进行共培养,成功诱导形成微球,且可以实现长期培养（最长14天）,并保持较高细胞活力。通过对BBB微球的组成细胞成分的标志性蛋白表征,证明了BBB微球内三种细胞可以共存,并且从荧光分布可以得知三种细胞（HBMEC、HBVP、HA）按由外而内的顺序依次排列,具备了模拟体内血脑屏障的结构分布（这种球体的结构与人体内血脑屏障极为相似--内皮层包裹在球体最外层,球体的外部环境即为脑部微血管的管腔内部,球体的内部环境即为脑部微血管的管腔外部,由内皮细胞形成血液系统与中枢神经系统阻隔的界面）。随后在对BBB完整性的特征性蛋白进行表征的实验中,BBB微球高表达了紧密连接相关蛋白ZO-1、claudin-5、Occludin,以及细胞外基质蛋白Laminin、外排转运蛋白P-gp、LRP-1,证明了BBB微球具有屏障功能的关键蛋白结构。对BBB微球生理功能进行验证,发现在组胺破坏血脑屏障后,右旋糖苷内流显着内流;在使用P-gp活性抑制剂维拉帕米后,P-gp转运底物Rh123显着内流,证明BBB微球具有体内相似的生理功能。最后,通过对BBB微球进行OGD/R造模,运用免疫荧光及RT-PCR技术验证OGD/R造模后可以降低紧密连接相关蛋白ZO-1的表达,激活HIF-1α的转录,证明BBB微球具有模拟疾病模型的能力。2、通过Discovery Studio软件对44种化合物进行计算机模拟,预测出各化合物的BBB透过性质。随后使用Neuron Outgrowth Assay方法评价44种有毒中药单体的神经毒性,筛查出五个候选药物。随后结合文献及HT-22海马区神经元细胞对CTD进行神经毒性验证,结果证明CTD可以显着降低HT-22细胞的细胞活力,并且可以在显微镜下观察到对BBB微球的损伤作用。将CTD作用于BBB微球上,通过对细胞活力、紧密连接相关蛋白ZO-1的定量分析,证明CTD可以破坏血脑屏障结构,且不会影响BBB特征蛋白ZO-1、Caudin-5、Occludin、P-gp、BCRP1、GLUT1的基因转录水平。随后使用高内涵成像及RT-PCR检测CTD对BBB微球中活性氧蓄积、炎症因子转录水平、凋亡相关蛋白表达的影响,结果证明CTD可以显着增加BBB微球的细胞内ROS蓄积,显着升高了IL-6、IL-8、VEGF的基因转录水平,且显着增加促凋亡蛋白caspase-3、bax表达,同时降低抗凋亡蛋白bcl-2的表达。H&E染色、尼式染色显示CTD可以造成ICR小鼠大脑海马区神经元丢失、尼式小体溶解、颗粒层细胞基底部水肿。结论:我们将HBMEC、HBVP、HA三种原代人源细胞进行低吸附条件下共培养以自发形成微球,并通过对BBB特征性蛋白的表征、生理功能验证、疾病模型模拟,证明了微球自组装成为具有类似体内血脑屏障结构功能的模块化类器官。随后我们使用神经元细胞毒性测试结合BBB微球毒性测试的综合策略,从44种有毒中药单体中筛查出具有神经毒性的CTD,并认为CTD可能通过增加细胞内活性氧蓄积及激活炎症因子表达、调节凋亡相关蛋白破坏血脑屏障。最后,我们使用ICR小鼠染毒后,发现CTD可以造成小鼠神经损伤,从动物水平上验证了CTD的神经毒性作用。
吴佳静[7]（2021）在《针对狂犬病病毒及痘苗病毒的抗病毒药物筛选及验证》文中研究说明狂犬病是由狂犬病病毒感染引起的致死性疾病,全世界每年约有6万人死于狂犬病,其中40%为15岁以下的儿童,主要流行地区为亚洲和非洲[1,2]。狂犬病是死亡率最高的疾病之一,致死率近100%,鲜有治疗成功的病例报道[3]。寻找到一种有效的抗狂犬病病毒药物和治疗手段,降低狂犬病的发病率和病死率,从而消除人们的“恐狂犬病症”,成为全世界药物研究人员所面临的重要挑战之一。早在1979年,人们已经战胜了古老的病毒—天花病毒[4]。目前,天花病毒的毒种仅被保存在WHO指定的两个实验室中:一个是美国亚特兰大的疾病控制和预防中心（美国CDC）,另一个是俄罗斯科尔佐沃的国家病毒学和生物技术媒介研究中心（VECTOR）[5]。然而,2014年美国曾发现了天花病毒零星感染病例[6]。作为基因组最大的双链DNA病毒,天花病毒在环境中极其稳定,一旦被用作生物武器,后果不堪设想。此外,疫苗接种的间断也为病毒的传播提供了有力条件。因此,筛选和评价抗天花病毒的药物是必要的。开发新药通常需要很多年的时间,而且有多种生产要求,而将现有药物重新利用是一种有吸引力的替代方法[7]。这些已获批准的药物具有优势,因为它们的药理和毒性特征是已知的,在人体中的安全性数据已经建立,生产和配方的可行性已经得到论证[8,9]。在本研究中,我们建立了基于狂犬病病毒假病毒和复制型痘苗病毒天坛株的高通量筛选方法,筛选已批准上市的药物,在体外和体内确定有效的抗病毒候选药物。本研究第一部分首先对767份来自中国食品药品检定研究院标准物质与标准化研究所的化合物标准品进行了高通量筛选,寻找抗狂犬病病毒的化合物。经过三轮体外筛选,最终得到11个阳性化合物。在这11个化合物中,氯法齐明排名第一。同时应用狂犬病病毒活病毒CVS株进行RFFIT实验,确认了氯法齐明的抑制活性。其在体外对CVS株的半数有效浓度EC50=2.28μM,半数细胞毒性浓度CC50>2200μM,治疗指数SI>967（专利号:CN112279815A）。同时,通过Time-of-addition分析、Biacore分子互作即分析对接等实验确定了氯法齐明主要作为膜融合抑制剂来发挥抗病毒作用。此外,仿照人类被狗咬伤的方式,采取肌肉注射的方式攻毒,建立了BALB/c小鼠狂犬病病毒CVS株感染模型。体内暴露后预防结果显示,氯法齐明可以延长小鼠的发病时间和死亡时间,并且提高了10%的生存率。氯法齐明作为临床治疗瘤型麻风病的一线用药,其药代和安全性等成药性特征已得到了普遍证实,但存在着皮肤色素沉着的副作用。为了提高氯法齐明的溶解度,减少其在脂肪组织中的蓄积,本研究基于氯法齐明的母核,合成了一系列氯法齐明盐类化合物。通过体外、内活性评价,发现氯法齐明水杨酸盐是更理想的抗狂犬病病毒候选物。为了进一步阐明氯法齐明抗狂犬病病毒的构效关系,通过化学修饰的手段引入极性基团,合成一系列全新的氯法齐明类似物,其体内活性还需进一步验证。本研究的第二部分利用痘苗病毒天坛株对767份药物进行抗病毒活性筛选,找到了具有潜在治疗天花病毒效力的药物吗替麦考酚酯与曲尼司特,并在动物体内进行了抗病毒效力验证。结果表明,通过5次给药治疗,吗替麦考酚酯对痘苗病毒在小鼠体内复制的抑制率为99%（10 mg/kg,P<0.01）,曲尼司特为59%（45 mg/kg,P=0.01）。Time-of-addition分析显示,两个药物都是在病毒复制的过程中发挥主要作用。综上所述,本研究基于“药物再定位”进行的抗狂犬病病毒和痘苗病毒的药物筛选与验证,发现了一个狂犬病病毒抑制剂—氯法齐明,以及两个痘苗病毒抑制剂吗替麦考酚酯与曲尼司特,这些药物的活性也在动物水平上得到了验证。完成了基于氯法齐明母核苯吩嗪类的衍生物的抗狂犬病病毒活性的活性、作用机制以及化学基础的整体框架研究,以指导氯法齐明抗狂犬病病毒药用新功能再定位并为狂犬病病毒新药研发提供重要的物质基础与科学依据。
许梦白[8]（2021）在《产后抑郁症中医证候特点分析及逍遥散的干预作用机制研究》文中进行了进一步梳理目的:1.临床流行病学研究通过临床横断面流行病学调查,探索引起产后抑郁症（Postpartum depression,PPD）患者抑郁程度加重的影响因素,利用因子及聚类分析等方法探索PPD的中医证候特点,进一步归纳PPD的中医病机和治则,以期为PPD临床个体化精准辨证提供理论支持。2.中医文献方药研究检索中药内服方剂治疗PPD临床研究的相关文献,探讨治疗PPD内服方药的药物组成规律及遣方用药思路,为临床治疗PPD的选方用药提供参考,并为进一步探索中药治疗PPD的机制研究提供理论依据。3.动物实验机制研究结合PPD临床流行病学研究及中医文献方药研究,开展动物实验,建立PPD大鼠模型并进行评价,造模成功后给予逍遥散干预。通过观察大鼠下丘脑病理组织形态、检测下丘脑-垂体-性腺（Hypothalamic-pituitary-gonadal,HPG）轴激素水平、下丘脑雌激素受体（ERα、ERβ、GPER）介导的PKA/CREB/BDNF信号通路表达水平等,探讨逍遥散治疗PPD的疗效及分子作用机制,为逍遥散治疗PPD提供具有科学内涵的客观依据,同时“以方测证”,揭示PPD的中医证候特点及病机本质。方法:1.临床流行病学研究建立《产后抑郁症调查问卷》,收集PPD患者的一般情况、抑郁量表积分、中医症状及体征信息。采用Pearson卡方检验或Fisher确切概率法对患者一般情况进行单因素分析,采用有序多分类Logistic回归对单因素分析结果中具有统计学意义的相关因素进行多因素分析,探索导致PPD患者抑郁程度加重的影响因素。采用频数分析、因子分析及聚类分析方法,对患者的中医临床症状及体征进行研究,归纳PPD患者的中医证候特点,进一步探寻PPD的中医病机和治则。2.中医文献方药研究检索中国知网、万方数据库等国内中文数据库2000年-2019年发表的关于中药治疗PPD临床研究的相关文献,按照筛选标准收集研究所需中药方剂。建立数据库,采用SPSS 24.0、Weka 3.8等软件对中药进行频数分析、聚类分析及关联规则分析,探索中药治疗PPD的遣方用药规律,探析临床治疗PPD的用药思路。3.动物实验机制研究以妊娠后期慢性极轻度应激（Chronic ultramild stress,CUMS）方法建立PPD大鼠模型,综合大鼠的一般情况、体重、产仔及活仔量、行为学变化对模型进行评价,造模成功后采用HE染色观察大鼠下丘脑病理组织形态,ELISA法检测血清E2、P、PRL含量;采用RT-qPCR及Western blot分别检测下丘脑组织匀浆中ERα、ERβ、GPER及PKA、CREB、BDNF的基因与蛋白表达水平,并采用免疫组化法对其分子蛋白表达进行定位分析,在基于HPG轴探索PPD的发病及逍遥散干预作用机制的同时,“以方测证”,以逍遥散为反证,揭示PPD肝郁脾虚证的证候生物学基础。结果:1.临床流行病学研究（1）206例PPD患者平均年龄为30.28±5.07岁;轻度抑郁患者94例,占比45.63%;中度抑郁患者72例,占比34.95%;重度抑郁患者40例,占比19.42%。在影响PPD患者抑郁程度加重的心理社会因素中,产前教育是影响PPD患者抑郁程度的保护因素,新生儿疾病、经前烦躁情况、孕期焦虑抑郁、孕产期负面事件、睡眠时间不足、患者受关心和支持度低是导致PPD患者抑郁程度加重的危险因素。（2）206例PPD患者的高频症状及体征有情绪抑郁、失眠多梦、神疲乏力、食少纳呆、烦躁易怒、善太息、乳房胀痛、悲伤欲哭、精神萎靡、健忘、腹胀,舌淡红、舌边有齿痕、舌黯及舌有瘀斑瘀点,苔白、苔薄、苔腻,脉细、脉弦、脉沉。将中医症状因子分析得出的9个公因子进行聚类分析,共出现5个聚类结果:①肝郁脾虚证,其症状包括善太息、腹胀、胁肋胀满甚则疼痛、乳房胀痛、食少纳呆;②阴血亏虚证,其症状包括面色淡白、爪甲色淡、肢体麻木、潮热盗汗、五心烦热、头晕、耳鸣;③肝火炽盛证,其症状包括口苦、目赤、口干咽燥、便秘、烦躁易怒、头痛;④脾肾阳虚兼痰湿证,其症状包括脘痞、恶心、胸闷、惊恐易醒、畏寒肢冷、腰膝酸软、浮肿、小便清长或（和）夜尿增多;⑤心脾两虚兼血瘀证,其症状包括心悸、神疲乏力、气短懒言、精神萎靡、面色萎黄、健忘、失眠多梦、悲伤欲哭、面色晦暗、自汗、下腹刺痛、恶露色紫暗有块。2.中医文献方药研究（1）本研究共筛选处方112例,涉及中药116味,使用频次为1216次。治疗PPD的高频药物有柴胡、甘草、当归、白芍、茯苓、白术等17味。所有药物中,归经以脾经、肝经为主,温性和甘味药出现频率最高,药物功效以补益、理气、安神、活血化瘀等为主。（2）17味高频药物共聚为4类:①聚类1包括柴胡、白芍、当归、甘草;②聚类2包括白术、茯苓;③聚类3包括香附、陈皮、川芎、郁金;④聚类4包括茯神、黄芪、大枣、地黄、合欢皮、酸枣仁、远志。（3）17味高频药物关联分析共得出50条关联药物组合,符合二阶关联规则的有6组,符合三阶关联规则的有18组,符合四阶关联规则的有17组。3.动物实验机制研究（1）实验一:4组大鼠产仔及活仔量无明显差异,大鼠造模后出现倦怠嗜卧、活动量减少、粪便质软、体重降低等宏观表现,行为学结果中糖水消耗率及强迫游泳不动时间明显减少,旷场实验中穿格、站立及修饰次数出现降低趋势性变化;氟西汀组及逍遥散组大鼠宏观表现及行为学结果均有明显改善,表明模型组大鼠产后出现抑郁样改变,PPD大鼠模型成功建立,“以方测证”,以逍遥散反证本研究建立的PPD大鼠模型是PPD肝郁脾虚证的病证结合模型。（2）实验二:在HPG轴中,HE染色发现模型组大鼠下丘脑神经元数目减少、排列疏松紊乱,大量神经元出现核固缩、深染及胞体萎缩、空泡样变性、周围脱髓鞘改变等严重病理学变化,而逍遥散组大鼠下丘脑组织病理学变化出现不同程度改善;ELISA检测显示模型组大鼠血清E2、P、PRL水平均明显降低;逍遥散组大鼠血清E2、P、PRL水平与模型组比较均明显升高。（3）实验三:RT-qPCR结果显示,与正常组比较,模型组大鼠下丘脑ERα、GPER、PKA基因表达水平明显降低,ERβ、CREB、BDNF基因表达水平有降低趋势;与模型组比较,逍遥散组大鼠下丘脑中ERα、CREB、BDNF基因表达水平明显升高,ERβ、GPER、PKA基因表达水平有升高趋势。Western blot结果显示,与正常组比较,模型组大鼠下丘脑中ERα、CREB、BDNF蛋白表达水平明显降低,ERβ、GPER、PKA蛋白表达水平有降低趋势;与模型组比较,逍遥散组大鼠下丘脑中PKA、BDNF蛋白表达水平明显升高,ERα、ERβ、GPER、CREB蛋白表达水平有升高趋势。免疫组化对上述指标进行定位分析,结果显示其免疫阳性神经元在下丘脑ARC及VMH中广泛分布,其中,模型组大鼠下丘脑ARC中ERα、PKA、CREB、BDNF的MOD值明显降低,VMH中的ERα、ERβ、GPER、CREB、BDNF的MOD值明显降低,逍遥散则可逆转这一改变,明显升高PPD模型大鼠下丘脑ARC及VMH中已降低的相关指标。结论:1.心理社会等多种因素相互影响,可作为应激源导致PPD的发生、发展。肝郁脾虚证、阴血亏虚证、肝火炽盛证、脾肾阳虚兼痰湿证、心脾两虚兼血瘀证及其症状表现是PPD患者具有临床意义的中医证候特点。2.女子产后多虚多瘀,气血失调,神魂失养,存在于PPD发病的始终。基于肝脾与情志、气血的密切相关性,临床治疗PPD患者可从肝脾论治,调理气血,临床可灵活运用疏肝解郁、理气健脾、益气养血、养心安神等治法。逍遥散用药组合气血兼顾,肝脾同调,是治疗PPD的常用方剂。3.以妊娠后期CUMS方法可建立病证结合的PPD肝郁脾虚证大鼠模型。采用逍遥散对PPD模型大鼠进行干预,可通过HPG轴上调性改变下丘脑内雌激素受体ERα、ERβ、GPER介导的PKA/CREB/BDNF信号通路,调节抑郁样行为。4.基于“以方测证”及“微观辨证”等中医理论基础,肝郁脾虚证是PPD的重要证候特点,以逍遥散为反证的PPD肝郁脾虚证的证候生物学基础涉及到神经内分泌系统,可能与下丘脑组织病理学改变、HPG轴功能异常、性激素分泌减少、下丘脑雌激素受体介导的PKA/CREB/BDNF信号通路的下调性改变抑制神经发生有关。
高强[9]（2021）在《星蒌承气汤治疗急性缺血性卒中痰热腑实证机制研究》文中研究说明急性缺血性脑卒中（Acute Ischemic Stroke,AIS）,即急性脑梗死,中医称缺血性中风,是脑组织因局部的血流循环障碍缺血、缺氧而发生的软化、坏死。目前溶栓是治疗缺血性卒中急性期最快、最有效的方法,但由于适应证严格、时间窗短、出血和再灌注损伤风险高,其临床效果受到限制。基础与临床研究证实,中医药治疗中风独具优势。中医认为痰热腑实证是缺血性中风急性期最为常见的证型,而化痰通腑法代表方星蒌承气汤是治疗中风急性期痰热腑实证的代表性方剂。星蒌承气汤“脑病治肠”、“上病治下”的中医理论与现代医学提出的“菌-肠-脑轴”具有异曲同工之妙。诸多临床试验及系统性综述已证实星蒌承气汤治疗缺血性卒中的确切临床疗效与神经保护作用,但是其效应机制研究尚且不足。因此本文基于网络药理学及肠道微生态理论,深入探讨缺血性中风的肠道微生态机制及化痰通腑法代表方星蒌承气汤治疗中风痰热腑实证的效应机理。目的:基于中医“上病治下”理论与现代医学“菌-肠-脑轴”理论,（1）通过中药网络药理学与分子对接技术全面探讨星蒌承气汤治疗缺血性卒中的多组分、多靶点、多通路机制;（2）明确具有“化痰通腑”作用的星蒌承气汤对急性缺血性中风痰热腑实证小鼠模型的神经保护作用,并验证网络药理学研究的关键靶点与通路;（3）探讨星蒌承气汤对急性缺血性中风痰热腑实证小鼠模型肠道菌群的影响,探讨其治疗中风痰热腑实证“通腑”与“通便”差异的肠道微生态机制;（4）观察星蒌承气汤对伪无菌小鼠急性缺血性中风模型菌-肠-脑轴的影响,验证星蒌承气汤通过直接影响肠道菌群而改善脑卒中预后的假说。方法:（1）借助TCMSP、BATMAN-TCM、ETCM及TCMID等数据库收集星蒌承气汤活性成分及作用靶点,并应用STITCH等对未找到靶点的化合物进行靶点预测。通过6个数据库挖掘缺血性卒中的靶点。通过GO和KEGG富集对交集靶点进行高级功能分析,并用cytoscape3.6.0构建PPI、化合物-靶点及药物-靶点-通路网络。最后进行分子对接验证。（2）雄性C57BL/6小鼠随机分为:假手术（Sham）组、模型（MCAO）组、星蒌承气汤（XCD）组、尼莫地平（Nim）组及舒泰清（PGE）组,通过制备高脂低纤维饮食复合线栓法的小鼠急性缺血性中风痰热腑实证模型,采用神经功能评分、除胶实验、TTC和TUNNEL染色,综合评价星蒌承气汤的神经保护作用,并运用ELISA、W estern blot等技术验证网药关键靶点与通路;（3）雄性C57BL/6小鼠随机分为:Sham组、MCAO组、XCD组、Nim组与PG E组,通过制备高脂低纤维饮食复合线栓法的小鼠急性缺血性中风痰热腑实证模型,采用高通量16srDNA基因测序、代谢组学技术、免疫组化、免疫荧光、ELISA及流式多因子技术分别对肠道菌群、短链脂肪酸（SCFAs）及其受体GPR43、神经-内分泌-免疫途径相关指标（NE及TH、血清MTL、脑IBA-1及GFAP、血清炎症因子）进行分析;（4）雄性C57BL/6小鼠在术前14天服用多种抗生素剔除肠道菌群后,随机分为:伪无菌假手术（ABX-Sham）组、伪无菌模型（ABX-MCAO）组以及伪无菌中药（ABX-XCD）组,通过神经功能评分、除胶实验、TTC染色以及高通量16srDNA基因测序、代谢组学技术、免疫组化、免疫荧光、ELISA及流式多因子技术,观察中药对伪无菌小鼠菌-肠-脑轴相关指标的影响。结果:（1）网络药理学及分子对接结果表明,星蒌承气汤包含51个活性成分及44个治疗缺血性卒中的交集靶点。高级功能分析显示星蒌承气汤抗缺血性卒中的机制与脂多糖介导的信号通路、凋亡过程的调控、炎症反应、内皮屏障的建立以及对脂肪酸的反应有关。星蒌承气汤发挥作用的有10条关键KEGG信号通路。PPI网络分析得到AKT 1,PTGS2,TNF,TP53,CASP3,IL1B等关键靶点。分子对接验证了星蒌承气汤活性成分与关键靶点具有良好的对接能力。（2）星蒌承气汤神经保护作用及对网络药理学关键靶点及通路的影响:①神经功能评分:与MCAO组相比,XCD组及Nim组术后48h及72h Longa评分降低（P<0.05）,PGE组未见变化（P>0.05）。②除胶实验:XCD组和Nim组术后48和72h的接触和去除胶带时间缩短（P<0.05）,PGE组未见变化（P>0.05）。③TTC染色:XCD组梗死面积下降（P<0.05）,Nim组及PGE组未见变化。④TUNNEL:MCAO组梗死区细胞凋亡明显增加,XCD组和Nim组TUNEL阳性染色减少（P<0.05）。⑤网络药理学验证:XCD组及Nim组TNF-α含量具有下降趋势（P>0.05）;XCD组p-AKT、PI3K及NF-κB蛋白表达具有升高趋势。AKT蛋白表达组间未见明显变化（P>0.05）。（3）星蒌承气汤对中风急性期痰热腑实证小鼠菌-肠-脑轴影响:①肠道菌群:与MCAO组相比,XCD组α多样性有升高趋势,Nim组及PGE组无显着变化。β多样性显示MCAO组与Sham组PCoA曲线有显着差异（P<0.05）。MCAO组拟杆与变形杆菌门显着增加,厚壁菌门显着减少;XCD组拟杆菌比例显着降低,疣微菌门显着增加,Nim组变形菌门显着增加,厚壁菌门进一步降低,PGE组菌群组成与MCAO相似,变形杆菌略降低。此外,XCD组Akkermansia比率增加,Nim组Klebsiella增加最为显着,而 PGE 组 Parabacteroides 和Escherichia/Shigella增加较为显着。②SCFAs 及GPR43:MCAO组的SCFAs含量显着降低（P<0.05）,XCD组丁酸含量增加（P<0.05）。XCD组及Nim组GPR43表达显着降低（P<0.05）。③自主神经途径:XCD组NE有下降趋势,PGE组NE有上升趋势（P>0.05）。MCAO组及PGE组TH蛋白表达上升（P<0.05）,XCD组及Nim组TH表达未见显着变化趋势（P>0.05）。④神经内分泌途径:MCAO组MTL显着升高（P<0.05）,PGE组有升高趋势（P>0.05）,XCD组及Nim组MTL显着下降（P<0.05）。⑤免疫途径:MCAO组星形胶质细胞增生、肥大,显着活化,小胶质细胞迅速从“静息态”转变为“激活态”,从梗死周边区域向病变部位募集,而XCD组星形胶质细胞及小胶质细胞活化较MCAO组降低。MCAO 组 TNF-α、IL-17A、IL-22 升高（P<0.05）,而 XCD 和 Nim 组的 IL-10显着升高（P<0.05）,TNF-α、IL-17A 和 IL-22 降低。（4）星蒌承气汤对中风急性期痰热腑实证伪无菌小鼠菌-肠-脑轴影响:①神经保护作用:与ABX-MCAO组相比,ABX-XCD组在Longa评分、除胶实验及TTC染色等方面未见显着变化（P>0.05）。②肠道菌群:ABX-MCAO和ABX-XCD组的α多样性低于ABX-Sham,PCoA分析显示ABX-XCD组肠道菌群的β多样性和组成与AB X-MCAO组相似。相对丰度结果显示,在ABX组中,小鼠的微生物区系均以变形杆菌为特征,这与正常小鼠有显着差异。LEfSe分析显示MCAO组富集了更多的病原体或机会性病原体,包括Bacteroidetes,EscherichiaShigella与Helicobacter,而 XCD富集了Verrucomicrobia和Akkermansia等有益菌群。条件致病菌如Streptococcus,Lact ococcus,Morganella,Klebsiella,Proteobacteria,Enterobacteriaceae 等在 ABX-XCD组富集显着增多。PGE组富集菌群主要有oSelenomonadales、cNegativicutes、gRomboutsia及fPeptostreptococcaceae。③SCFAs 及 GPR43:ABX-XCD 的丙酸显着下降（P<0.05）。ABX-MCAO 组 GPR43 表达显着上调（P<0.05）,ABX-XCD 组 G PR43表达显着降低（P<0.05）。④自主神经途径:ABX-XCD组NE含量未见显着变化（P>0.05）,TH蛋白表达未见显着变化（P>0.05）。⑤神经内分泌途径:ABX-MCAO组MTL升高趋势（P>0.05）,ABX-XCD组MTL未见显着变化（P>0.05）。⑥免疫途径:ABX-XCD组IL-22显着升高（P<0.05）,IL-17A有降低趋势（P>0.05）,余未见显着变化趋势（P>0.05）。ABX-MCAO组星形胶质细胞表达显着升高,小胶质细胞显着活化,ABX-XCD组星形胶质细胞及小胶质细胞活化较ABX-MCAO组有降低趋势。结论:星蒌承气汤对急性缺血性中风痰热腑实证小鼠具有一定神经保护作用,其效应机制具有多成分、多靶点、多通路特点。其对伪无菌小鼠中风模型则未发现确切的脑保护效应,说明其脑保护的部分机制是通过改善肠道微生态实现的。其具体机制包括提高肠道短链脂肪酸,尤其是丁酸含量,增强肠道短链脂肪酸受体GPR43表达,增加血液IL10、减少TNF-α等炎性因子及MTL水平,最终减少梗死区域胶质细胞活化和神经细胞凋亡,从而达到中风脑保护的作用。本研究成果对中风病的临床治疗具有重要的指导意义——对于中风后便秘患者,仅仅“通便”治疗是不够的,需要结合患者的证候特点进行中医药“化痰通腑”治疗,才能取得好的临床效果。
沈海亮[10]（2021）在《多穗柯三叶苷对高脂饮食诱导的肥胖大鼠的减肥作用及机理研究》文中认为多穗柯以甜味着称,是中国长江以南地区特别是江西、广西、湖南、四川、云南等省以及东南亚的印度、泰国、老挝等地的一种甜茶。自2017年起,多穗柯因其食用和药用功能,被批准为新型食品原料。同时,多穗柯提取物的具有抗氧化、抗炎、抗菌、抗糖尿病、抗癌、保护肝脏和心脏、抗肥胖、保护神经和抗过敏等生理功能。根皮苷和三叶苷是多穗柯主要的生物活性成分,且三叶苷含量大于根皮苷。研究表明,多穗柯提取物和根皮苷都能显着降低高脂饮食诱导的肥胖大鼠体重、空腹血糖和胰岛素抵抗。但在动物模型中,关于多穗柯中主要黄酮类化合物—三叶苷,目前尚没有发现其减肥作用的研究。多穗柯甜茶作为一种饮用历史悠久,不仅具有高甜度、低热量、安全无毒,而且兼具药、糖、茶等综合作用的药食同源且资源丰富的常用饮品,加大其营养健康价值的基础理论研究,对其产品开发的多元化及产业价值的提升具有重大的社会和经济意义。基于此,本研究中以多穗柯三叶苷为研究对象,以SD肥胖大鼠为实验动物模型,通过设置高、中、低剂量的三叶苷灌胃干预,探讨三叶苷对高脂饮食诱导肥胖大鼠的减肥作用,并从脂肪代谢基因、激活棕色脂肪组织活性及肠道微生物等3个方面探讨三叶苷可能的减肥机理机制,最后研究了三叶苷减肥过程中对机体氧化应激的影响探讨三叶苷对预防和治疗肥胖积极作用,以期为多穗柯及三叶苷保健产品和临床药物的开发提供其营养健康价值的理论依据。主要研究结论如下:（1）多穗柯三叶苷对高脂饮食诱导肥胖大鼠的减肥作用及机理研究。以SD大鼠为实验研究对象,通过高脂饲料诱导建立肥胖大鼠模型,再通过阳性药物和三叶苷高、中、低剂量灌胃干预,考察三叶苷的减肥作用。同时检测血脂水平（TG、TC、HDL-C、LDL-C）、肝脏功能（AST和ALT）、肝脏和白色脂肪组织形态的变化。在激素和基因水平探讨了三叶苷减肥作用的机理。结果表明,在不影响摄食量的前提下,三叶苷显着降低高脂饮食诱导的肥胖SD大鼠体重增加（p<0.05）,具有明显的减肥作用。其中,中、高剂量三叶苷明显降低肥胖大鼠的脂肪率（p<0.05）。血脂指标和肝功指标检测结果表明,三叶苷显着降低血清TG、TC、LDL-C含量（p<0.05）和且效果好于阳性对照药;同时,ALT和AST的活性也显着降低（p<0.05）,而且高剂量三叶苷效果好于奥利司他。组织形态学检查结果表明,三叶苷能明显减少肝脏组织中空泡面积和炎症细胞数量,减少脂质沉积,逆转脂肪沉积导致的肝脏组织病变;同时,白色脂肪组织中肥大细胞明显恢复正常。机理研究结果表明,（a）中、高剂量三叶苷和奥利司他均能显着降低血清胰岛素、廋素和神经肽Y的含量（p<0.05）,明显改善廋素抵抗和胰岛素抵抗,减少NPY的分泌,抑制食欲减少食物摄入,有助于控制肥胖的发展。（b）三叶苷显着下调PPARγ、ACC、FAS基因的表达,从而抑制前脂肪细胞的分化和增殖和脂肪酸的生成,减少体质脂质的沉积。而高剂量三叶苷和奥利司他显着上调了肝脏和白色脂肪中PPARα基因的表达（p<0.05）,从而加速脂肪氧化,增加肝脏和白色脂肪组织中脂肪分解,减少脂肪细胞脂滴的积累,进而改善肝脏细胞脂肪变性。此外,三叶苷显着上调HSL和CPT1基因的表达（p<0.05）,促进脂肪分解和脂肪酸β-氧化,减少机体脂肪含量。因此,三叶苷可能具有PPARα、HSL和CPT1激动剂的作用,刺激了三种基因的表达,从而加快机体脂肪分解,减少脂肪含量和脂肪在内脏组织中的积累。另外,高剂量三叶苷显着上调了白色脂肪组织中UCP1基因的表达（p<0.05）,表明三叶苷诱导了白色脂肪组织褐色化,这预示着更多的能量将以热能释放而不是用于脂肪的合成。以上结果说明,三叶苷能明显降低高脂饮食诱导的肥胖大鼠体重增加、改善血脂异常、修复肝脏组织病变,而这些可能是通过改善廋素、胰岛素敏感性和控制饮食以及上调脂肪分解基因的表达和下调脂肪合成基因的表达作用的结果。（2）多穗柯三叶苷对Tyk2/STAT3信号通路介导的棕色脂肪组织功能活性的影响。采用蛋白免疫印迹法考察了棕色脂肪组织中Tyk2/STAT3信号通路中Tyk2和STAT3蛋白表达量,以及下游脂代谢相关的PPARγ、PRDM16、C/EBPβ、PPARα和UCP1蛋白的表达变化,从激活棕色脂肪功能活性的角度探讨了三叶苷对肥胖大鼠减肥的机制。结果表明,三叶苷显着增加肥胖大鼠棕色脂肪组织中Tyk2蛋白和STAT3蛋白表达,抵消高脂饮食对Tyk2/STAT3信号通路活性造成的抑制,恢复棕色脂肪组织的正常发育和下游蛋白的正常表达。三叶苷还显着上调PPARγ,PRDM16和C/EBPβ蛋白的表达,使棕色脂肪细胞正常分化,改善了棕色脂肪组织形态。三叶苷还显着增加PPARα和UCP1蛋白表达,提高棕色脂肪组织代谢活性的增加和产热能力。以上结果表明,三叶苷可以通过激活Tyk2/STAT3信号传导途径活性,维持棕色脂肪细胞的增殖和分化,增加棕色脂肪质量,最终上调产热因子UCP1蛋白的表达消耗更多的能量转换为热量释放,这可能是三叶苷减肥的另一个实现途径。（3）多穗柯三叶苷对肥胖大鼠肠道菌群的影响。采用气相色谱法对盲肠中6种短链脂肪酸（SCFAs）含量进行检测,同时采用Mi Seq高通量测序技术对大鼠肠道菌群16Sr DNA的V3区域进行测序,基于Illumina平台测定肠道菌群组成及丰度。采用Chao指数、Simpson指数、Shannon指数和Goods coverage对肠道微生物菌群的alpha多样性进行分析,Beta多样性采用主坐标分析（PCo A）在进行分析。SCFAs检测结果表明,三叶苷可以显着增加肠道中短链脂肪酸的含量,尤其丁酸的含量。高通量测序结果表明,相比高脂对照组,三叶苷的干预显着增加了乳酸杆菌（Lactobacillus）和颤螺旋菌属（Oscillospira）的相对丰度（p<0.05）,降低了Blautia,Allobaculum,考拉杆菌属（Phascolarctobacterium）和粪球菌属（Coprococcus）的相对丰度（p<0.05）,从而引起厚壁菌门（Firmicutes）和拟杆菌门（Bacteroidetes）的比值增加。这说明在门和属的水平上,三叶苷调节了肥胖大鼠肠道菌群的结构和多样性,而肠道菌群的这种改变能促进肥胖大鼠的血脂代谢。PICRUSt分析预测KEGG代谢途径的结果表明,三叶苷处理组肥胖大鼠和高脂模型对照组大鼠之间,PICRUSt预测的KEGG通路存在显着不同,主要参与脂质代谢（类固醇生物合成,类固醇激素生物合成）,氨基酸代谢（D-精氨酸和D-鸟氨酸代谢）,其他次生代谢产物（类黄酮生物合成）,萜类和聚酮化合物（类胡萝卜素生物合成）以及辅因子和维生素（视黄醇代谢）,说明三叶苷可能通过肠道菌群的影响参与机体脂质合成和能量代谢,进而对机体肥胖发挥积极作用。以上结果,揭示了肠道菌群对LPR中三叶苷减肥作用的贡献,并预测高脂膳食诱导的肥胖的潜在调控机制。（4）多穗柯三叶苷对高脂饮食诱导的肥胖大鼠体内氧化应激的影响。实验通过检测肥胖大鼠血清和组织（肝脏、白色脂肪组织和棕色脂肪组织）中丙二醛（PC）、羰基化蛋白（PC）、超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）和谷胱甘肽（GSH）的变化,考察了三叶苷对肥胖大鼠体内氧化应激水平的影响,并在基因水平上对三叶苷抗氧化的机制进行了研究。研究结果表明,肥胖大鼠血清和组织中,MDA和PC含量均有显着增加（p<0.05）,其体内发生了严重的氧化应激。三叶苷和阳性药物奥利司他明显降低血清和组织中MDA和PC的含量,其中TR-H组中MDA和PC含量下降显着（p<0.05）;同时,三叶苷组SOD活性、CAT活性和GSH含量均有所增加,其中高剂量三叶苷的作用效果最为显着（p<0.05）。核因子E2相关因子2（Nrf2）被认为是机体抵抗氧化应激的关键调控因子。三叶苷明显上调肥胖大鼠肝脏、白色脂肪和棕色脂肪中Nrf2的表达,并呈现剂量依赖性,特别是三叶苷高剂量组分别上调2.48倍、1.20倍和1.23倍。结合前文中SOD、CAT和GSH在大鼠中组织和血清中的各组的变化,我们推测,三叶苷可能是通过增加Nrf2的表达,促进SOD、CAT和GSH等抗氧化酶的表达,进而减轻机体氧化应激。以上结果表明,三叶苷明显降低肥胖大鼠体内氧化应激水平,其作用机理可能是通过上调Nrf2基因的表达实现的。肥胖大鼠体内氧化应激水平的降低,对肥胖的控制和治疗有积极作用。结论:本研究系统研究了多穗柯三叶苷对高脂饮食诱导肥胖大鼠的减肥作用,证实了多穗柯三叶苷具有较强的减肥作用,同时还有降血糖、降血脂及保肝护肝作用。揭示了三叶苷通过上调肥胖大鼠肝脏和白色脂肪组织中脂肪分解基因的表达和下调脂肪合成基因的表达,加速脂肪分解和脂肪酸氧化,同时减少机体脂肪合成和沉积发挥减肥作用;证实了三叶苷通过促进白色脂肪组织褐色化,增加非战栗产热的机体能量消耗;进一步研究证实了,三叶苷激活并增强了Tyk2/STAT3信号通路介导的棕色脂肪功能活性,使机体更多的能量通过非战栗产热以热能释放,增加脂肪分解和脂肪酸氧化速率而发挥减肥作用;揭示了肠道菌群对LPR中三叶苷减肥作用的贡献,并预测高脂膳食诱导的肥胖的潜在调控机制;证实了三叶苷通过上调Nrf2基因的表达,增加机体抗氧化酶的活性或含量,缓解机体氧化应激水平,减少肥胖大鼠炎症反应,有助于肥胖的治疗。
二、常用的中枢神经系统药物体内分析方法（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、常用的中枢神经系统药物体内分析方法（论文提纲范文）
（1）色氨酸及代谢物抑制β-淀粉样蛋白聚集的分子动力学研究 ——对运动延缓阿尔茨海默病的机理初探（论文提纲范文）
| 主要英文缩略词表 (Abbreviations) |
| 摘要 |
| abstract |
| 1 绪论 |
| 1.1 研究背景 |
| 1.2 研究目的 |
| 1.3 研究意义 |
| 2 文献综述 |
| 2.1 阿尔茨海默病与β-淀粉样蛋白聚集的相关研究 |
| 2.1.1 阿尔茨海默病概述 |
| 2.1.2 β-淀粉样蛋白聚集概述 |
| 2.2 运动对阿尔茨海默病的延缓及其机制研究 |
| 2.2.1 运动延缓阿尔茨海默病的动物实验 |
| 2.2.2 运动延缓阿尔茨海默病的人体实验 |
| 2.2.3 运动影响β-淀粉样蛋白致病的机制探讨 |
| 2.3 运动影响色氨酸及代谢物的研究 |
| 2.3.1 运动影响色氨酸和血清素的人体实验 |
| 2.3.2 运动影响色氨酸和血清素的动物实验 |
| 2.3.3 运动时段对褪黑素的影响 |
| 2.4 抑制剂与β-淀粉样蛋白相互作用的相关研究 |
| 2.4.1 天然小分子抑制β-淀粉样蛋白聚集的相关研究 |
| 2.4.2 内源性小分子抑制β-淀粉样蛋白聚集的相关研究 |
| 2.4.3 色氨酸及代谢物抑制β-淀粉样蛋白聚集的相关研究 |
| 3 研究方案 |
| 4 研究方法 |
| 4.1 文献分析法 |
| 4.2 分子动力学方法 |
| 4.2.1 常规分子动力学模拟 |
| 4.2.2 副本交换分子动力学模拟 |
| 4.2.3 常用软件 |
| 4.2.4 分子力场 |
| 4.2.5 分子力场的相互作用项 |
| 4.2.6 小分子力场构建与结构处理 |
| 4.2.7 模拟细节 |
| 4.2.8 分析方法 |
| 5 研究内容 |
| 5.1 色氨酸抑制阿尔茨海默病β-淀粉样蛋白聚集、破坏β-淀粉样蛋白原纤维的分子机理研究 |
| 5.1.1 前言 |
| 5.1.2 材料与方法 |
| 5.1.3 结果与讨论 |
| 5.1.4 结论 |
| 5.2 血清素抑制阿尔茨海默病β-淀粉样蛋白聚集、破坏β-淀粉样蛋白原纤维的分子机理研究 |
| 5.2.1 前言 |
| 5.2.2 材料与方法 |
| 5.2.3 结果与讨论 |
| 5.2.4 结论 |
| 5.3 血清素/质子化血清素破坏β-淀粉样蛋白原纤维的分子机理研究 |
| 5.3.1 前言 |
| 5.3.2 材料与方法 |
| 5.3.3 结果与讨论 |
| 5.3.4 结论 |
| 5.4 褪黑素抑制阿尔茨海默病β-淀粉样蛋白聚集、破坏β-淀粉样蛋白原纤维的分子机理研究 |
| 5.4.1 前言 |
| 5.4.2 材料与方法 |
| 5.4.3 结果与讨论 |
| 5.4.4 结论 |
| 5.5 色氨酸/色氨酸+血清素破坏β-淀粉样蛋白原纤维的分子机理研究 |
| 5.5.1 前言 |
| 5.5.2 材料与方法 |
| 5.5.3 结果与讨论 |
| 5.5.4 结论 |
| 参考文献 |
| 6 总结与展望 |
| 6.1 总结 |
| 6.2 展望 |
| 致谢 |
| 个人简介 |
| 攻读学位期间的科研工作 |
（2）基于代谢组学的刺五加叶治疗缺血性脑卒中作用机制研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| abstract |
| 第1章 引言 |
| 1.1 缺血性脑卒中 |
| 1.1.1 缺血性脑卒中概述 |
| 1.1.2 缺血性脑卒中发病机制及主要病理环节 |
| 1.1.3 缺血性脑卒中与肠道菌群的关系 |
| 1.1.4 缺血性脑卒中常用药物 |
| 1.2 刺五加叶主要化学成分及药理作用 |
| 1.2.1 刺五加叶概述 |
| 1.2.2 刺五加叶主要化学成分 |
| 1.2.3 刺五加叶主要药理作用 |
| 1.3 代谢组学 |
| 1.3.1 代谢组学概述 |
| 1.3.2 代谢组学研究方法 |
| 1.3.3 脂质组学研究方法 |
| 1.3.4 代谢组学在缺血性脑卒中研究中的应用 |
| 1.3.5 基于高效同位素标记衍生化的代谢组学研究 |
| 1.4 本论文的研究思路、研究目的及意义 |
| 1.4.1 研究思路 |
| 1.4.2 研究目的及意义 |
| 第2章 刺五加叶治疗缺血性脑卒中的血清脂质组学及其神经保护作用研究 |
| 2.1 实验部分 |
| 2.1.1 药品、试剂及仪器 |
| 2.1.2 刺五加叶主要活性组分的制备及成分分析 |
| 2.1.3 缺血性脑卒中大鼠模型建立 |
| 2.1.4 样品采集及处理 |
| 2.1.5 组织病理学检查 |
| 2.1.6 血清脂质代谢轮廓采集 |
| 2.1.7 数据分析 |
| 2.1.8 基于UPLC-TQ/MS的神经递质定量分析 |
| 2.1.9 基于UPLC-TQ/MS的神经递质定量分析方法学考察 |
| 2.2 结果与讨论 |
| 2.2.1 刺五加叶主要活性组分成分分析 |
| 2.2.2 组织病理学检查 |
| 2.2.3 血清脂质组学代谢轮廓分析 |
| 2.2.4 血清脂质组学潜在的生物标记物鉴定 |
| 2.2.5 血清脂质组学通路分析 |
| 2.2.6 神经递质定量研究 |
| 2.2.7 炎症因子和氧化应激水平研究 |
| 2.3 小结 |
| 第3 章 刺五加叶治疗缺血性脑卒中粪便代谢组学研究及其对微生物-肠-脑轴的影响 |
| 3.1 实验部分 |
| 3.1.1 药品、试剂及仪器 |
| 3.1.2 缺血性脑卒中大鼠模型建立 |
| 3.1.3 样品采集及处理 |
| 3.1.4 粪便代谢轮廓采集 |
| 3.1.5 数据分析 |
| 3.1.6 基于UPLC-TQ/MS的大鼠粪便胆汁酸定量分析 |
| 3.1.7 粪便菌群的16S r RNA测序 |
| 3.2 结果与讨论 |
| 3.2.1 粪便非靶向代谢组学代谢轮廓分析 |
| 3.2.2 粪便非靶向代谢组学潜在的生物标记物鉴定 |
| 3.2.3 粪便非靶向代谢组学通路分析 |
| 3.2.4 基于靶向代谢组学的大鼠粪便胆汁酸的定量研究 |
| 3.2.5 刺五加叶对大鼠粪便菌群组成的影响 |
| 3.3 小结 |
| 第4章 刺五加叶通过对益生菌的调节作用治疗缺血性脑卒中的机制验证 |
| 4.1 实验部分 |
| 4.1.1 药品、试剂及仪器 |
| 4.1.2 菌群培养及菌液制备 |
| 4.1.3 缺血性脑卒中大鼠模型建立 |
| 4.1.4 样品采集及处理 |
| 4.1.5 粪便菌群的16S r RNA测序 |
| 4.1.6 大鼠脑组织中神经递质的含量测定 |
| 4.1.7 炎症因子及氧化应激等生化指标检测 |
| 4.2 结果与讨论 |
| 4.2.1 益生菌对缺血性脑卒中大鼠粪便菌群组成的影响 |
| 4.2.2 益生菌对缺血性脑卒中大鼠脑组织中神经递质水平的影响 |
| 4.2.3 益生菌对缺血性脑卒中大鼠脑组织及血清炎症因子和氧化应激水平的影响 |
| 4.3 小结 |
| 第5章 刺五加叶治疗缺血性脑卒中的尿液代谢组学研究 |
| 5.1 实验部分 |
| 5.1.1 药品、试剂及仪器 |
| 5.1.2 缺血性脑卒中大鼠模型建立 |
| 5.1.3 样品采集及处理 |
| 5.1.4 尿液代谢轮廓采集 |
| 5.1.5 数据分析 |
| 5.1.6 ELISA法对通路分析进行验证 |
| 5.2 结果与讨论 |
| 5.2.1 尿液非靶向代谢组学代谢轮廓分析 |
| 5.2.2 尿液非靶向代谢组学潜在的生物标记物鉴定 |
| 5.2.3 尿液非靶向代谢组学通路分析 |
| 5.2.4 刺五加叶治疗缺血性脑卒中对体内代谢通路的影响验证 |
| 5.3 小结 |
| 第6章 基于高效同位素标记衍生化的刺五加叶治疗缺血性脑卒中尿液代谢组学研究 |
| 6.1 实验部分 |
| 6.1.1 药品、试剂及仪器 |
| 6.1.2 缺血性脑卒中大鼠模型建立 |
| 6.1.3 样品采集及处理 |
| 6.1.4 尿液样本同位素标记衍生化 |
| 6.1.5 尿液代谢轮廓采集 |
| 6.1.6 数据分析 |
| 6.2 结果与讨论 |
| 6.2.1 尿液高效同位素标记衍生化代谢组学代谢轮廓分析 |
| 6.2.2 尿液高效同位素标记衍生化代谢组学潜在的生物标记物鉴定 |
| 6.2.3 尿液高效同位素标记衍生化代谢组学结果的科学解释 |
| 6.3 小结 |
| 第7章 结论 |
| 本论文创新点 |
| 参考文献 |
| 作者简介及在学期间所取得的科研成果 |
| 致谢 |
（3）电刺激联合Cs-Au/GelMA水凝胶对臂丛神经损伤后神经病理性疼痛的疗效及机制研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| abstract |
| 中英文缩略词对照表 |
| 第1章 绪论 |
| 第2章 综述 |
| 2.1 神经病理性疼痛的概述 |
| 2.2 神经病理性疼痛的调节机制 |
| 2.2.1 神经胶质细胞在神经病理性疼痛中的调节机制 |
| 2.2.2 脑源性神经营养因子在神经病理性疼痛中的调节机制 |
| 2.2.3 促炎症细胞因子在神经病理性疼痛中的调节机制 |
| 2.2.4 趋化因子在神经病理性疼痛中的调节机制 |
| 2.3 神经病理性疼痛的治疗 |
| 2.4 神经病理性疼痛的动物模型 |
| 2.4.1 脊神经选择性结扎模型 |
| 2.4.2 脊神经根切断模型 |
| 2.4.3 坐骨神经轴索切断模型 |
| 2.4.4 坐骨神经慢性压缩性损伤 |
| 2.4.5 坐骨神经半结扎模型 |
| 2.4.6 坐骨神经分支损伤模型 |
| 2.4.7 臂丛神经损伤模型 |
| 2.5 总结 |
| 第3章 臂丛神经损伤后病理性神经痛产生的病理生理基础 |
| 3.1 研究背景 |
| 3.2 实验材料 |
| 3.2.1 仪器耗材 |
| 3.2.2 药品试剂 |
| 3.3 实验方法 |
| 3.3.1 实验动物 |
| 3.3.2 手术造模 |
| 3.3.3 机械性刺激缩足阈值(MWT)检测 |
| 3.3.4 热缩足反射潜伏期(TWL)检测 |
| 3.3.5 免疫印迹实验 |
| 3.3.6 统计分析 |
| 3.4 研究结果 |
| 3.4.1 机械性刺激缩足阈值(MWT)行为学改变 |
| 3.4.2 热缩足反射潜伏期(TWL)行为学改变 |
| 3.4.3 PCRA术后大鼠脊髓组织中小胶质细胞的变化 |
| 3.4.4 PCRA术后大鼠脊髓组织中星形胶质细胞的变化 |
| 3.4.5 PCRA术后大鼠小脊髓组织中促炎症细胞因子的变化 |
| 3.5 讨论 |
| 3.6 小结 |
| 第4章 CS-Au/GelMA水凝胶的制备与表征 |
| 4.1 研究背景 |
| 4.2 实验材料 |
| 4.2.1 实验动物 |
| 4.2.2 仪器耗材 |
| 4.2.3 药品试剂 |
| 4.3 实验方法 |
| 4.3.1 神经干细胞的提取和培养 |
| 4.3.2 神经干细胞滴片培养 |
| 4.3.3 免疫荧光染色法鉴定神经干细胞 |
| 4.3.4 Gel MA水凝胶的合成 |
| 4.3.5 Cs-Au纳米粒子的制备 |
| 4.3.6 Cs-Au纳米粒子的表征 |
| 4.3.7 Cs-Au纳米粒子生物安全性的检测 |
| 4.3.8 Cs-Au/Gel MA水凝胶的制备与表征 |
| 4.3.9 Cs-Au/Gel MA水凝胶的体内降解 |
| 4.4 研究结果 |
| 4.4.1 神经干细胞的提取与鉴定 |
| 4.4.2 Gel MA水凝胶的制备 |
| 4.4.3 Cs-Au纳米粒子的表征 |
| 4.4.4 Cs-Au纳米粒子生物安全性的检测 |
| 4.4.5 Cs-Au/Gel MA水凝胶的亲水性和机械性能 |
| 4.4.6 Cs-Au/Gel MA水凝胶的体内降解 |
| 4.5 讨论 |
| 4.6 小结 |
| 第5章 CS-Au/GelMA水凝胶联合电刺激治疗在PCRA后神经病理性疼痛中的作用及机制 |
| 5.1 研究背景 |
| 5.2 实验材料 |
| 5.2.1 实验动物 |
| 5.2.2 仪器耗材 |
| 5.2.3 药品试剂 |
| 5.3 实验方法 |
| 5.3.1 神经干细胞的提取和培养 |
| 5.3.2 细胞实验筛选电刺激频率 |
| 5.3.3 手术造模及分组治疗 |
| 5.3.4 免疫印迹实验 |
| 5.3.5 免疫荧光实验 |
| 5.3.6 机械性刺激缩足阈值(MWT)检测 |
| 5.3.7 热缩足反射潜伏期(TWL)检测 |
| 5.3.8 统计分析 |
| 5.4 研究结果 |
| 5.4.1 电刺激对神经干细胞 |
| 5.4.2 PCRA术后大鼠脊髓组织中小胶质细胞的变化 |
| 5.4.3 PCRA术后大鼠脊髓组织中星形胶质细胞的变化 |
| 5.4.4 PCRA术后大鼠小脊髓组织中促炎症细胞因子的变化 |
| 5.4.5 机械性刺激缩足阈值(MWT)行为学改变 |
| 5.4.6 热缩足反射潜伏期(TWL)行为学改变 |
| 5.4.7 脑源性神经营养因子变化 |
| 5.4.8 氧化损伤标志物变化 |
| 5.5 讨论 |
| 5.6 小结 |
| 第6章 结论 |
| 参考文献 |
| 作者简介及在学期间所取得的科研成果 |
| 致谢 |
（4）基于含硒纳米材料的构建及其治疗脊髓损伤的实验研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| abstract |
| 中英文缩略词对照表 |
| 第一章 前言 |
| 第二章 SCI治疗的研究进展 |
| 2.1 前言 |
| 2.2 SCI的病理生理特征 |
| 2.3 SCI的治疗策略 |
| 2.3.1 药物治疗 |
| 2.3.2 手术治疗 |
| 2.3.3 生物材料治疗 |
| 2.3.4 电刺激治疗 |
| 2.3.5 细胞移植治疗 |
| 2.4 小结 |
| 第三章 硒-碳量子点(Se-CQDs)构建及其治疗SCI的实验研究 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 材料与方法 |
| 3.2.1 实验材料 |
| 3.2.2 主要仪器设备 |
| 3.3 实验细胞和动物 |
| 3.3.1 实验细胞及细胞培养 |
| 3.3.2 实验动物 |
| 3.4 实验方法 |
| 3.4.1 Se-CQDs的制备 |
| 3.4.2 Se-CQDs表征 |
| 3.4.3 Se-CQDs清除氧自由基 |
| 3.4.4 Se-CQDs的生物相容性 |
| 3.4.5 体外H_2O_2诱导的细胞毒性及其对氧化应激的保护作用.. |
| 3.4.6 Se-CQDs抑制炎症的体外实验 |
| 3.4.7 SCI挫伤动物模型制备 |
| 3.4.8 行为学分析 |
| 3.4.9 SCI H&E、LFB和免疫荧光染色的脊髓组织获取 |
| 3.4.10 H&E染色实验方法 |
| 3.4.11 Luxol fast blue(LFB)染色实验方法 |
| 3.4.12 脊髓髓鞘微观结构 |
| 3.4.13 脊髓组织免疫荧光染色 |
| 3.4.14 Se-CQDs对体内继发性损伤的抗凋亡作用 |
| 3.4.15 统计分析 |
| 3.5 结果 |
| 3.5.1 Se-CQDs制备与表征 |
| 3.5.2 Se-CQDs的生物相容性 |
| 3.5.3 Se-CQDs在H_2O_2模拟的氧化应激环境下对细胞的保护作用 |
| 3.5.4 Se-CQDs对LPS诱导BV2细胞表达促炎因子的影响 |
| 3.5.5 Se-CQDs对SCI大鼠模型的治疗作用 |
| 3.5.6 不同治疗组对脊髓组织形态学的影响 |
| 3.5.7 不同治疗组脊髓组织神经元及轴突的保护性作用 |
| 3.5.8 Se-CQDs在体内的抗炎作用及减少胶质瘢痕能力。 |
| 3.5.9 Se-CQDs在体内的抗细胞凋亡能力。 |
| 3.6 讨论 |
| 3.6.1 生物材料通过清除ROS治疗SCI |
| 3.6.2 清除ROS有助于促进SCI功能恢复 |
| 3.7 本章小结 |
| 第四章 透明质酸-硒(Hyaluronic Acid-Selenium,HA-Se)纳米粒子构建及其治疗SCI的实验研究 |
| 4.1 引言 |
| 4.2 材料与方法 |
| 4.2.1 实验材料 |
| 4.2.2 主要仪器设备 |
| 4.3 实验细胞和动物 |
| 4.3.1 实验细胞及细胞培养 |
| 4.3.2 实验动物 |
| 4.4 实验方法 |
| 4.4.1 HA-Se纳米粒子的制备 |
| 4.4.2 HA-Se纳米粒子表征 |
| 4.4.3 HA-Se纳米粒子清除氧自由基 |
| 4.4.4 HA-Se纳米粒子的生物相容性 |
| 4.4.5 体外H_2O_2诱导的细胞毒性及其对氧化应激的保护作用.. |
| 4.4.6 HA-Se纳米粒子抑制炎症的体外实验 |
| 4.4.7 创伤性SCI挫伤动物模型制备 |
| 4.4.8 行为学分析 |
| 4.4.9 SCI后H&E、LFB和免疫荧光染色的脊髓组织获取 |
| 4.4.10 H&E染色实验方法 |
| 4.4.11 Luxol fast blue(LFB)染色实验方法 |
| 4.4.12 脊髓髓鞘微观结构 |
| 4.4.13 脊髓组织免疫荧光染色 |
| 4.4.14 HA-Se纳米粒子对体内继发性损伤的抗凋亡作用 |
| 4.4.15 统计分析 |
| 4.5 结果 |
| 4.5.1 HA-Se纳米粒子制备与表征 |
| 4.5.2 HA-Se纳米粒子的生物相容性 |
| 4.5.3 HA-Se纳米粒子在H_2O_2模拟的氧化应激环境下对细胞的保护 |
| 4.5.4 HA-Se纳米粒子抑制炎症的作用 |
| 4.5.6 SCI后CD44 表达 |
| 4.5.7 星形胶质细胞对HA-Se纳米粒子的内吞 |
| 4.5.8 HA-Se纳米粒子体内分布 |
| 4.5.9 HA-Se纳米粒子疗效分析 |
| 4.5.10 HA-Se纳米粒子体内抑制炎症的作用 |
| 4.5.11 HA-Se纳米粒子体内抗凋亡的作用 |
| 4.5.12 HA-Se纳米粒子体内安全性评价 |
| 4.6 讨论 |
| 4.6.1 靶向性纳米粒子治疗脊髓损伤 |
| 4.6.2 纳米粒子减轻继发性SCI促进神经功能恢复 |
| 4.7 小结 |
| 第五章 结论和展望 |
| 参考文献 |
| 作者简介及在读期间所取得的科研成果 |
| 致谢 |
（5）纳米芳香药物治疗神经精神类疾病的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 第1章 引言 |
| 1.1 芳香疗法 |
| 1.1.1 芳香疗法应用于睡眠障碍 |
| 1.1.2 芳香疗法应用于阿尔兹海默症 |
| 1.1.3 芳香疗法应用于高血压 |
| 1.1.4 芳香疗法应用于精神心理疾病 |
| 1.2 基因治疗 |
| 1.2.1 RNA干扰药物 |
| 1.2.2 mRNA治疗 |
| 1.2.3 DNA治疗 |
| 1.2.4 基因编辑 |
| 1.3 应用于药物缓控释的纳米材料 |
| 1.3.1 纳米材料负载药物 |
| 1.3.2 纳米材料靶向输递药物 |
| 1.3.3 纳米材料缓控释药物 |
| 1.4 精神神经病征 |
| 1.4.1 抑郁症 |
| 1.4.2 躁狂症 |
| 1.4.3 焦虑症 |
| 1.4.4 其他精神神经疾病 |
| 1.5 立题依据和研究目标 |
| 1.5.1 论文立题依据 |
| 1.5.2 论文研究目标及策略 |
| 第2章 缓控释纳米芳香药物的制备 |
| 2.1 实验方法 |
| 2.1.1 实验材料与样品 |
| 2.1.2 实验仪器 |
| 2.1.3 介孔二氧化硅纳米棒的制备 |
| 2.1.4 MSNRs的表征 |
| 2.1.5 空心介孔二氧化硅纳米棒的制备 |
| 2.1.6 HMSNRs的表征 |
| 2.1.7 纳米颗粒的芳香药物包封 |
| 2.1.8 芳香药物丁香酚的释放检测 |
| 2.1.9 反应性介孔二氧化硅纳米颗粒的制备 |
| 2.1.10 rMSNs的表征 |
| 2.1.11 rMSNs包封芳香药物 |
| 2.1.12 混合精油的释放检测 |
| 2.1.13 BLEO@rMSNs在壁纸上的粘附 |
| 2.1.14 BLEO@rMSNs从壁纸上的脱附 |
| 2.1.15 含偶氮苯结构的硅烷偶联剂的合成与表征 |
| 2.1.16 介孔二氧化硅纳米颗粒的制备 |
| 2.1.17 光敏MSNs的制备方法 |
| 2.1.18 光敏MSNs的表征 |
| 2.1.19 S803@MSNs的制备及表征 |
| 2.1.20 S803@MSNs在壁纸上的粘附 |
| 2.1.21 S803@MSNs中芳香药物的释放 |
| 2.1.22 PEG大分子引发剂(CTA-PEG2000)的合成与表征 |
| 2.1.23 含1-芘甲基的丙烯酸酯单体的合成与表征 |
| 2.1.24 光敏两亲嵌段共聚物的合成与表征 |
| 2.1.25 聚合物的临界胶束浓度检测 |
| 2.1.26 S803@PPMM-PEG的制备 |
| 2.1.27 S803@PPMM-PEG的热性能分析 |
| 2.1.28 S803@PPMM-PEG在壁纸上的粘附 |
| 2.1.29 S803@PPMM-PEG中芳香药物的释放 |
| 2.1.30 pH敏感阳离子两亲嵌段共聚物的合成与表征 |
| 2.1.31 pH敏感阳离子纳米芳香药物的制备 |
| 2.1.32 pH敏感阳离子纳米芳香药物的表征 |
| 2.1.33 pH敏感阳离子纳米芳香药物在丝绸的粘附 |
| 2.1.34 芳香药物从linalool@PHMA-PCB-Arg的释放检测 |
| 2.1.35 阳离子温敏聚合物的合成和表征 |
| 2.1.36 温敏纳米芳香药物的制备和表征 |
| 2.1.37 芳香药物从EG@LC-PNDB的释放 |
| 2.1.38 EG@LC-PNDB在丝绸上的粘附 |
| 2.1.39 数据分析 |
| 2.2 结果与讨论 |
| 2.2.1 基于空心介孔二氧化硅纳米棒的纳米芳香药物研究 |
| 2.2.2 基于反应性介孔二氧化硅纳米棒的纳米芳香药物研究 |
| 2.2.3 基于MSNs的光敏纳米芳香药物研究 |
| 2.2.4 基于胶束的光敏纳米芳香药物研究 |
| 2.2.5 pH敏感纳米芳香药物的研究 |
| 2.2.6 温敏纳米芳香药物的研究 |
| 2.3 小结 |
| 第3章 纳米芳香药物的神经调节作用 |
| 3.1 实验方法 |
| 3.1.1 实验材料与样品 |
| 3.1.2 实验仪器 |
| 3.1.3 含偶氮苯结构的硅烷偶联剂的合成与表征 |
| 3.1.4 MS-R的制备方法 |
| 3.1.5 光敏MS-R的制备方法 |
| 3.1.6 光敏MS-R的表征 |
| 3.1.7 S803@MS-R的制备及表征 |
| 3.1.8 纳米芳香药物应用于壁纸 |
| 3.1.9 壁纸形貌分析 |
| 3.1.10 芳香药物释放分析 |
| 3.1.11 动物实验 |
| 3.1.12 行为学评价 |
| 3.1.13 电生理学测试 |
| 3.1.14 免疫荧光切片 |
| 3.1.15 神经递质的表达 |
| 3.1.16 数据分析 |
| 3.2 结果与讨论 |
| 3.2.1 S803@MS-R的表征 |
| 3.2.2 S803@MS-R-W对小鼠行为学的影响 |
| 3.2.3 S803@MS-R-W对小鼠脑生理电位的影响 |
| 3.2.4 S803@MS-R-W对神经再生的影响 |
| 3.2.5 S803@MS-R-W对神经递质表达的影响 |
| 3.3 小结 |
| 第4章 仿生纳米芳香药物用于抑郁症的预防 |
| 4.1 实验方法 |
| 4.1.1 实验材料与样品 |
| 4.1.2 实验仪器 |
| 4.1.3 棒状MSNs的制备 |
| 4.1.4 形貌仿生纳米芳香药物的制备 |
| 4.1.5 反应性壳聚糖的制备 |
| 4.1.6 功能仿生纳米芳香药物的制备 |
| 4.1.7 仿生plus纳米芳香药物的制备 |
| 4.1.8 纳米芳香药物在壁纸上的粘附 |
| 4.1.9 纳米芳香药物在壁纸上的脱附 |
| 4.1.10 分子动力学模拟 |
| 4.1.11 实验动物 |
| 4.1.12 悬尾测试 |
| 4.1.13 强迫游泳测试 |
| 4.1.14 新环境进食抑制测试 |
| 4.1.15 旷场测试 |
| 4.1.16 免疫组化切片 |
| 4.1.17 尼氏染色切片 |
| 4.1.18 数据分析 |
| 4.2 结果与讨论 |
| 4.2.1 仿生纳米芳香药物的制备 |
| 4.2.2 仿生纳米芳香药物与壁纸之间的动力学模拟 |
| 4.2.3 纳米芳香药物在抑郁症预防中的作用 |
| 4.3 小结 |
| 第5章 基因-芳香药物递送体系用于抑郁症协同治疗 |
| 5.1 实验方法 |
| 5.1.1 实验材料与样品 |
| 5.1.2 实验仪器 |
| 5.1.3 H-Lys(Z)-OH羧基-环内酸酐盐酸盐的合成方法 |
| 5.1.4 C18-p(H-Lys(Z)-OH)的合成 |
| 5.1.5 C18-PLys的合成 |
| 5.1.6 C18-PLys-Mal的合成 |
| 5.1.7 C18-PLys-sertraline的合成 |
| 5.1.8 SPIONs的合成 |
| 5.1.9 基因-芳香药物NDDSs的制备 |
| 5.1.10 细胞培养 |
| 5.1.11 内涵体逃逸 |
| 5.1.12 实验动物 |
| 5.1.13 抑郁症模型小鼠的治疗 |
| 5.1.14 强迫游泳测试 |
| 5.1.15 新环境进食抑制测试 |
| 5.1.16 糖水偏好测试 |
| 5.1.17 三箱社交测试 |
| 5.1.18 免疫组化切片 |
| 5.1.19 尼氏染色切片 |
| 5.1.20 抗BrdU染色 |
| 5.1.21 抗BDNF染色 |
| 5.1.22 IF/FISH双染 |
| 5.1.23 Western blot检测 |
| 5.1.24 数据分析 |
| 5.2 结果与讨论 |
| 5.2.1 基因-芳香药物递送体系的制备与表征 |
| 5.2.2 基因-芳香药物递送体系细胞水平表征 |
| 5.2.3 基因-芳香药物递送体系的病灶富集和安全性评价 |
| 5.2.4 基因-芳香药物递送体系的抗抑郁效果评价 |
| 5.2.5 基因-芳香药物递送体系的抗抑郁机制探究 |
| 5.3 小结 |
| 第6章 反应性纳米芳香药物用于改善航天特因环境下身心健康 |
| 6.1 实验方法 |
| 6.1.1 实验材料与样品 |
| 6.1.2 实验仪器 |
| 6.1.3 MSNs-CYC的制备 |
| 6.1.4 LE@MSNs-CYC的制备 |
| 6.1.5 LE@MSNs-CYC应用于壁纸附药 |
| 6.1.6 柠檬烯释放的检测 |
| 6.1.7 动物实验 |
| 6.1.8 航天特因环境模拟 |
| 6.1.9 高架十字迷宫测试 |
| 6.1.10 明暗箱测试 |
| 6.1.11 新物体识别测试 |
| 6.1.12 水迷宫测试 |
| 6.1.13 神经递质及皮质酮和皮质醇的检测 |
| 6.1.14 促肾上腺皮质激素,IL-6和IL-β的检测 |
| 6.1.15 神经相关蛋白含量检测 |
| 6.1.16 数据分析 |
| 6.2 结果与讨论 |
| 6.2.1 LE@MSNs-CYC处理壁纸的制备与表征 |
| 6.2.2 LE@MSNs-CYC在航天特因环境下的抗焦虑作用 |
| 6.2.3 LE@MSNs-CYC在航天特因环境下的缓解身体损伤作用 |
| 6.2.4 LE@MSNs-CYC在航天特因环境下的提高认知记忆的作用 |
| 6.3 小结 |
| 第7章 结论与展望 |
| 7.1 结论 |
| 7.1.1 建立了芳香药物纳米化与缓控释平台 |
| 7.1.2 建立了释药-嗅药-神经响应评价平台 |
| 7.1.3 仿生纳米芳香药物具有优异的抑郁症预防效果 |
| 7.1.4 芳香-基因药物递送体系具有优异的抑郁症治疗效果 |
| 7.1.5 反应性纳米芳香药物航天特因条件下提高身心健康 |
| 7.2 今后工作建议 |
| 7.2.1 芳香药物纳米化和缓控释平台的拓展 |
| 7.2.2 基因药物负载方式的改进 |
| 7.2.3 基因-芳香治疗所应用疾病的拓展 |
| 7.2.4 基因治疗方法的改进 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 作者简历及攻读学位期间发表的学术论文与研究成果 |
（6）血脑屏障体外微球模型的构建及其在中药神经毒性筛选中的应用（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 英文缩略词表 |
| 前言 |
| 研究内容一 体外血脑屏障微球模型的构建及功能验证 |
| 实验一 体外血脑屏障微球模型建立 |
| 1 材料与方法 |
| 2 实验结果 |
| 3 结论 |
| 实验二 体外血脑屏障微球模型的细胞组成鉴定 |
| 1 材料与方法 |
| 2 实验结果 |
| 3 结论 |
| 实验三 体外血脑屏障微球模型的屏障完整性的结构验证 |
| 1 材料与方法 |
| 2 实验结果 |
| 3 结论 |
| 实验四 体外血脑屏障微球模型的生理功能验证 |
| 1 材料与方法 |
| 2 实验结果 |
| 3 结论 |
| 实验五 体外血脑屏障微球疾病模型的建立 |
| 1 材料与方法 |
| 2 实验结果 |
| 3 结论 |
| 小结 |
| 研究内容二 有毒中药单体的神经毒性筛选及机制研究 |
| 实验一 计算机模拟评估45 种有毒中药单体的BBB渗透性 |
| 1 材料与方法 |
| 2 实验结果 |
| 3 结论 |
| 实验二 使用神经元细胞对中药有毒单体进行神经毒性筛选 |
| 1 材料与方法 |
| 2 实验结果 |
| 3 结论 |
| 实验三 候选毒性药物的神经毒性验证 |
| 1 材料与方法 |
| 2 实验结果 |
| 3 结论 |
| 实验四 CTD对 BBB微球细胞活力的影响 |
| 1 材料与方法 |
| 2 实验结果 |
| 3 结论 |
| 实验五 CTD对BBB完整性蛋白及基因表达的影响 |
| 1 材料与方法 |
| 2 实验结果 |
| 3 结论 |
| 实验六 CTD对BBB微球活性氧蓄积的影响 |
| 1 材料与方法 |
| 2 实验结果 |
| 3 结论 |
| 实验七 CTD对BBB微球炎症相关基因及凋亡相关蛋白表达的影响 |
| 1 材料与方法 |
| 2 实验结果 |
| 3 结论 |
| 实验八 CTD神经毒性的动物水平验证 |
| 1 材料与方法 |
| 2 实验结果 |
| 3 结论 |
| 小结 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 创新点 |
| 参考文献 |
| 综述 3D生物打印组织模型的研究进展及在中药研究中的可期应用 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（7）针对狂犬病病毒及痘苗病毒的抗病毒药物筛选及验证（论文提纲范文）
| 英文缩略词表 |
| 摘要 |
| abstract |
| 第一章 前言 |
| 1.1 狂犬病的流行概况 |
| 1.2 狂犬病病毒的病原学和分子生物学 |
| 1.3 狂犬病病毒感染与复制 |
| 1.4 狂犬病病毒G蛋白的免疫原性与糖基化 |
| 1.5 狂犬病病毒中和抗体检测 |
| 1.6 狂犬病病毒疫苗的发展 |
| 1.7 痘苗病毒的病原学与分子生物学 |
| 1.8 痘苗病毒的感染与复制 |
| 1.9 痘苗病毒的应用 |
| 1.10 本文的研究目的、内容和意义 |
| 1.11 技术路线 |
| 第二章 氯法齐明对狂犬病病毒的抑制作用 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.3 实验结果 |
| 2.4 本章小结 |
| 第三章 MMF及 TRA对痘苗病毒的抑制作用 |
| 3.1 实验材料 |
| 3.2 实验方法 |
| 3.3 实验结果 |
| 3.4 本章小结 |
| 第四章 讨论 |
| 4.1 新发、突发病毒性传染病的流行情况 |
| 4.2 药物再定位 |
| 4.3 狂犬病的暴露后预防 |
| 4.4 CFZ的抗病毒机制及开发前景 |
| 4.5 天花病毒替代—痘苗病毒 |
| 4.6 吗替麦考酚酯与曲尼司特 |
| 第五章 总结与展望 |
| 5.1 总结 |
| 5.2 展望 |
| 5.3 创新点 |
| 参考文献 |
| 综述:应对新、突发病毒传染病的新对策——广谱抗病毒抑制剂和新型药物筛选手段的储备 |
| 参考文献 |
| 博士期间论文发表及主要研究成果专利申报情况 |
| 致谢 |
（8）产后抑郁症中医证候特点分析及逍遥散的干预作用机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 符号说明 |
| 文献综述 |
| 综述一 产后抑郁症中西医研究进展 |
| 1 产后抑郁症的西医研究进展 |
| 2 产后抑郁症的中医研究进展 |
| 3 逍遥散治疗产后抑郁症的病机及治则分析探讨 |
| 4 小结 |
| 参考文献 |
| 综述二 雌激素受体与产后抑郁症相关性研究进展 |
| 1 雌激素受体 |
| 2 雌激素受体介导的PKA/CREB/BDNF信号通路 |
| 3 小结 |
| 参考文献 |
| 前言 |
| 第一章 产后抑郁症影响因素及中医证候特点的临床研究 |
| 1 研究对象 |
| 2 研究方法 |
| 3 研究结果 |
| 4 讨论 |
| 5 小结 |
| 第二章 中医治疗产后抑郁症用药规律的现代文献研究 |
| 1 研究对象 |
| 2 研究方法 |
| 3 研究结果 |
| 4 讨论 |
| 5 小结 |
| 第三章 逍遥散治疗产后抑郁症作用机制的动物实验研究 |
| 实验一 产后抑郁症大鼠模型的建立与评价 |
| 1 实验材料 |
| 2 实验方法 |
| 3 研究结果 |
| 4 讨论 |
| 5 小结 |
| 实验二 基于HPG轴探讨产后抑郁症发病机制及逍遥散干预作用机制研究 |
| 1 实验材料 |
| 2 实验方法 |
| 3 研究结果 |
| 4 讨论 |
| 5 小结 |
| 实验三 产后抑郁症大鼠下丘脑中雌激素受体介导的PKA/CREB/BDNF信号通路变化及逍遥散的干预作用机制研究 |
| 1 实验材料 |
| 2 实验方法 |
| 3 研究结果 |
| 4 讨论 |
| 5 小结 |
| 结语 |
| 1 研究总结 |
| 2 创新性 |
| 3 不足之处与展望 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 附录 |
| 在学期间主要研究成果 |
（9）星蒌承气汤治疗急性缺血性卒中痰热腑实证机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 符号说明 |
| 第一部分 文献综述 |
| 第一章 星蒌承气汤药效物质基础及对缺血性卒中神经保护机制研究进展 |
| 1 大黄 |
| 1.1 中医认识 |
| 1.2 化学成分及神经保护作用 |
| 2 胆南星 |
| 2.1 中医认识 |
| 2.2 化学成分及神经保护作用 |
| 3 瓜蒌 |
| 3.1 中医认识 |
| 3.2 化学成分及神经保护作用 |
| 4 羌活 |
| 4.1 中医认识 |
| 4.2 化学成分及神经保护作用 |
| 5 芒硝 |
| 参考文献 |
| 第二章 基于肠道微生态理论的缺血性卒中病因与发病机制研究进展 |
| 1 肠道微生态与肠道微生态失调 |
| 2 菌-肠-脑轴 |
| 3 从肠到脑的上行通路 |
| 4 从脑到肠的下行通路 |
| 5 脑卒中相关危险因素与肠道菌群 |
| 6 卒中并发症的肠道微生态机制 |
| 7 结论 |
| 参考文献 |
| 前言 |
| 第二部分 基于网络药理学与分子对接的星蒌承气汤治疗缺血性卒中的机制研究 |
| 1 研究资料 |
| 2 研究方法 |
| 2.1 星蒌承气汤化学活性成分的检索与筛选 |
| 2.2 星蒌承气汤化学成分及缺血性卒中靶点筛选 |
| 2.3 交集基因蛋白互作网络(PPI)分析 |
| 2.4 基因本体论(Gene ontology,GO)功能富集和京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路富集分析 |
| 2.5 可视化网络构建与分析 |
| 2.6 分子对接 |
| 3 研究结果 |
| 3.1 星蒌承气汤潜在化学活性成分的检索与筛选结果 |
| 3.2 星蒌承气汤活性成分靶点及缺血性卒中靶点预测结果 |
| 3.3 GO富集分析及KEGG代谢通路富集分析结果 |
| 3.4 可视化网络构建与分析 |
| 3.5 分子对接 |
| 4 讨论 |
| 4.1 网络药理学在中医药现代化研究中的应用 |
| 4.2 基于网络药理学方法探讨星蒌承气汤活性成分 |
| 4.3 基于网络药理学方法探讨星蒌承气汤效应机制 |
| 5 小结 |
| 第三部分 实验研究 |
| 实验一 星蒌承气汤对中风急性期痰热腑实证小鼠神经保护作用及网络药理学关键靶点及通路实验验证 |
| 1 实验材料 |
| 1.1 实验对象 |
| 1.2 实验试剂 |
| 1.3 实验仪器设备与耗材 |
| 1.4 实验药物的配置 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 分组与给药 |
| 2.2 模型制备 |
| 2.3 神经功能评分 |
| 2.4 除胶实验 |
| 2.5 TTC染色 |
| 2.6 取材及处理 |
| 2.7 TUNEL法检测皮层梗死周围细胞凋亡情况 |
| 2.8 脑组织ELISA |
| 2.9 脑组织Western blot |
| 2.10 统计分析 |
| 3 研究结果 |
| 3.1 神经功能评分 |
| 3.2 除胶实验 |
| 3.3 脑梗死体积评价 |
| 3.4 对缺血侧脑组织细胞凋亡的影响 |
| 3.5 星蒌承气汤对缺血侧脑组织TNF-α的影响 |
| 3.6 星蒌承气汤对缺血侧脑组织AKT、p-AKt、PI3K及NF-κB蛋白表达的影响 |
| 4 讨论 |
| 4.1 星萎承气汤是治疗中风病急性期痰热腑实证的具有确切临床疗效的代表方剂 |
| 4.2 化痰通腑法代表方星蒌承气汤脑保护作用及中医理论探讨 |
| 4.3 卒中模型神经功能评分探讨 |
| 4.4 卒中模型行为学选择 |
| 4.5 星蒌承气汤与细胞凋亡 |
| 4.6 网络药理学关键靼点及通路实验验证 |
| 5 小结 |
| 实验二 星蒌承气汤对中风急性期痰热腑实证小鼠菌-肠-脑轴影响 |
| 1 实验材料 |
| 1.1 实验对象 |
| 1.2 实验试剂 |
| 1.3 实验仪器设备与耗材 |
| 1.4 实验药物的配置 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 分组与给药 |
| 2.2 模型制备 |
| 2.3 取材及处理 |
| 2.4 免疫组化 |
| 2.5 免疫荧光 |
| 2.6 ELISA检测 |
| 2.8 肠道菌群分析 |
| 2.9 盲肠内容物短链脂肪酸(SCFAs)检测 |
| 2.10 统计分析 |
| 3 结果 |
| 3.1 星蒌承气汤对中风痰热腑实证小鼠肠道菌群的影响 |
| 3.2 星蒌承气汤对中风痰热腑实证小鼠肠道菌群代谢产物短链脂肪酸及短链脂肪酸受体的影响 |
| 3.3 星蒌承气对菌-肠-脑轴神经-内分泌-免疫途径相关指标影响 |
| 4 讨论 |
| 4.1 基于脑肠互动理论探讨化痰通腑法治疗中风病的理论基础 |
| 4.2 星蒌承气汤对短链脂肪酸影响 |
| 4.3 星萎承气汤对菌-肠-脑轴自主神经途径影响 |
| 4.4 星蒌承气汤对菌-肠-脑轴神经内分泌途径影响 |
| 4.5 星萎承气汤对菌-肠-脑轴免疫途径影响 |
| 5 小结 |
| 实验三 星萎承气汤对中风急性期痰热腑实证伪无菌小鼠菌-肠-脑轴影响 |
| 1 实验材料 |
| 1.1 实验对象 |
| 1.2 实验试剂 |
| 1.3 实验仪器设备与耗材 |
| 1.4 实验药物的配置 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 分组与给药 |
| 2.2 模型制备 |
| 2.3 神经功能评分 |
| 2.4 除胶实验 |
| 2.5 TTC染色 |
| 2.6 取材及处理 |
| 2.7 免疫组化、免疫荧光 |
| 2.8 ELISA检测 |
| 2.9 肠道菌群分析 |
| 2.10 盲肠内容物SCFAs分析 |
| 2.11 统计分析 |
| 3 结果 |
| 3.1 神经功能评分 |
| 3.2 除胶实验 |
| 3.3 脑梗死体积评价 |
| 3.4 肠道菌群 |
| 3.5 短链脂肪酸 |
| 3.6 星蒌承气汤对伪无菌小鼠菌-肠-脑轴神经-内分泌-免疫途径相关指标影响 |
| 4 讨论 |
| 4.1 伪无菌模型建立及评价 |
| 4.2 肠道菌群是星蒌承气汤发挥作用的重要靶点 |
| 4.3 星蒌承气汤治疗急性期缺血性卒中机制的初步探讨 |
| 5 小结 |
| 结语 |
| 创新点 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 致谢 |
| 在学期间主要研究成果 |
（10）多穗柯三叶苷对高脂饮食诱导的肥胖大鼠的减肥作用及机理研究（论文提纲范文）
| 缩写词索引 |
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 第1章 文献综述 |
| 1.1 多穗柯的研究进展 |
| 1.1.1 多穗柯概况 |
| 1.1.2 多穗柯的化学成分 |
| 1.1.3 多穗柯的药理作用 |
| 1.1.4 多穗柯安全性评价 |
| 1.2 三叶苷的研究进展 |
| 1.2.1 三叶苷概况 |
| 1.2.2 多穗柯三叶苷的提纯及鉴定方法 |
| 1.2.3 多穗柯三叶苷的药理作用 |
| 1.3 肥胖的研究进展 |
| 1.3.1 肥胖的定义与发展现状 |
| 1.3.2 治疗方式与效果 |
| 1.3.3 减肥机理的研究进展 |
| 1.3.4 植物源黄酮类化合物的减肥作用研究进展 |
| 1.4 棕色脂肪组织与肥胖 |
| 1.4.1 棕色脂肪概况 |
| 1.4.2 棕色脂肪组织在减肥中的研究进展 |
| 1.5 .肠道微生物与肥胖 |
| 1.5.1 肠道微生物研究概况 |
| 1.5.2 肠道微生物与肥胖的研究进展 |
| 1.6 氧化应激与肥胖 |
| 1.6.1 氧化应激研究概况 |
| 1.6.2 氧化应激与肥胖的研究进展 |
| 1.7 立题背景和意义 |
| 1.8 研究内容和技术路线 |
| 1.8.1 研究内容 |
| 1.8.2 技术路线 |
| 第2章 多穗柯三叶苷对高脂饮食诱导肥胖大鼠的减肥作用及机理研究 |
| 2.1 材料与方法 |
| 2.1.1 实验材料 |
| 2.1.2 实验试剂 |
| 2.1.3 实验设备与仪器 |
| 2.1.4 实验方法 |
| 2.2 分析方法 |
| 2.2.1 口服葡萄糖耐量实验(OGTT) |
| 2.2.2 血清生化分析 |
| 2.2.3 廋素、胰岛素和神经肽Y的测定 |
| 2.2.4 组织学检查和分析 |
| 2.2.5 RNA提取 |
| 2.2.6 实时荧光定量(q RT-PCR)分析 |
| 2.3 数据处理与分析 |
| 2.4 结果与分析 |
| 2.4.1 多穗柯三叶苷对肥胖大鼠体重、摄食量的影响 |
| 2.4.2 多穗柯三叶苷对肥胖大鼠脂肪率和肝脏系数的影响 |
| 2.4.3 多穗柯三叶苷对肥胖大鼠血脂水平和动脉硬化指数的影响 |
| 2.4.4 多穗柯三叶苷对肥胖大鼠葡萄糖耐量的影响 |
| 2.4.5 多穗柯三叶苷对肥胖大鼠谷丙转氨酶和谷草转氨酶的影响 |
| 2.4.6 多穗柯三叶苷对肥胖大鼠肝脏组织形态病理分析的影响 |
| 2.4.7 多穗柯三叶苷对肥胖大鼠白色脂肪组织形态的影响 |
| 2.4.8 多穗柯三叶苷对肥胖大鼠脂代谢相关血清激素的影响 |
| 2.4.9 多穗柯三叶苷对肥胖大鼠脂肪合成相关基因表达的影响 |
| 2.4.10 多穗柯三叶苷对肥胖大鼠脂肪分解相关基因表的影响 |
| 2.4.11 多穗柯三叶苷对肥胖大鼠白色脂肪组织褐变的影响 |
| 2.5 讨论 |
| 2.6 本章小结 |
| 第3章 多穗柯三叶苷对Tyk2/STAT3信号通路介导的棕色脂肪组织功能活性的影响 |
| 3.1 材料和方法 |
| 3.1.1 实验材料 |
| 3.1.2 实验耗材和试剂 |
| 3.1.3 实验设备与仪器 |
| 3.1.4 实验方法 |
| 3.2 分析方法 |
| 3.3 数据处理 |
| 3.4 结果与分析 |
| 3.4.1 多穗柯三叶苷对棕色脂肪中Tyk2/STST3蛋白表达的影响 |
| 3.4.2 多穗柯三叶苷对棕色脂肪细胞分化相关蛋白表达的影响 |
| 3.4.3 多穗柯三叶苷对棕色脂肪组织形态的影响 |
| 3.4.4 多穗柯三叶苷对棕色脂肪组织功能活性相关蛋白表达的影响 |
| 3.5 讨论 |
| 3.6 本章小结 |
| 第4章 多穗柯三叶苷对高脂饮食诱导的肥胖大鼠肠道菌群的影响 |
| 4.1 材料与方法 |
| 4.1.1 实验试剂 |
| 4.1.2 仪器与设备 |
| 4.2 实验方法 |
| 4.2.1 实验动物及饲养条件 |
| 4.2.2 肥胖SD大鼠模型的建立 |
| 4.2.3 减肥干预实验 |
| 4.2.4 大鼠血清和组织的采集和处理 |
| 4.2.5 短链脂肪酸分析 |
| 4.2.6 肠道微生物菌群分析 |
| 4.2.7 宏基因组预测分析 |
| 4.2.8 数据分析 |
| 4.3 结果与分析 |
| 4.3.1 多穗柯三叶苷对肥胖大鼠的摄食量、体重、肝重和脂肪重量的影响 |
| 4.3.2 多穗柯三叶苷对肥胖大鼠短链脂肪酸含量的影响 |
| 4.3.3 多穗柯三叶苷对肥胖大鼠肠道菌群多样性和结构的影响 |
| 4.3.4 KEGG功能预测分析 |
| 4.4 讨论 |
| 4.5 本章小结 |
| 第5章 多穗柯三叶苷对高脂饮食诱导的肥胖大鼠体内氧化应激水平的影响 |
| 5.1 材料与方法 |
| 5.1.1 实验材料 |
| 5.1.2 实验试剂 |
| 5.1.3 实验仪器与设备 |
| 5.1.4 实验方法 |
| 5.2 分析方法 |
| 5.2.1 大鼠中丙二醛(MDA)含量的测定 |
| 5.2.2 大鼠中羰基化蛋白(PC)含量的测定 |
| 5.2.3 大鼠中超氧化物歧化酶(SOD)活性的测定 |
| 5.2.4 大鼠中过氧化氢酶(CAT)活性的测定 |
| 5.2.5 大鼠中谷胱甘肽(GSH)含量的测定 |
| 5.2.6 RNA的提取和实时荧光定量分析 |
| 5.3 数据处理 |
| 5.4 结果与分析 |
| 5.4.1 多穗柯三叶苷对肥胖大鼠体内MDA含量的影响 |
| 5.4.2 多穗柯三叶苷对肥胖大鼠体内蛋白质羰基(PC)含量的影响 |
| 5.4.3 多穗柯三叶苷对肥胖大鼠体内SOD活性的影响 |
| 5.4.4 多穗柯三叶苷对肥胖大鼠体内CAT活性的影响 |
| 5.4.5 多穗柯三叶苷对肥胖大鼠体内GSH含量的影响 |
| 5.4.6 多穗柯三叶苷对肥胖大鼠组织内Nrf2转录因子基因表达的影响 |
| 5.5 讨论 |
| 5.6 本章小结 |
| 第6章 结论与展望 |
| 6.1 结论 |
| 6.2 创新点 |
| 6.3 展望 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 攻读博士学位期间取得的研究成果 |
四、常用的中枢神经系统药物体内分析方法（论文参考文献）
- [1]色氨酸及代谢物抑制β-淀粉样蛋白聚集的分子动力学研究 ——对运动延缓阿尔茨海默病的机理初探[D]. 弓烨弘. 上海体育学院, 2021(09)
- [2]基于代谢组学的刺五加叶治疗缺血性脑卒中作用机制研究[D]. 汪戎锦. 吉林大学, 2021(01)
- [3]电刺激联合Cs-Au/GelMA水凝胶对臂丛神经损伤后神经病理性疼痛的疗效及机制研究[D]. 尤荻. 吉林大学, 2021(01)
- [4]基于含硒纳米材料的构建及其治疗脊髓损伤的实验研究[D]. 罗文琪. 吉林大学, 2021(01)
- [5]纳米芳香药物治疗神经精神类疾病的研究[D]. 卢治国. 中国科学院大学(中国科学院过程工程研究所), 2021
- [6]血脑屏障体外微球模型的构建及其在中药神经毒性筛选中的应用[D]. 张雷. 天津中医药大学, 2021(01)
- [7]针对狂犬病病毒及痘苗病毒的抗病毒药物筛选及验证[D]. 吴佳静. 武汉生物制品研究所, 2021(01)
- [8]产后抑郁症中医证候特点分析及逍遥散的干预作用机制研究[D]. 许梦白. 北京中医药大学, 2021(01)
- [9]星蒌承气汤治疗急性缺血性卒中痰热腑实证机制研究[D]. 高强. 北京中医药大学, 2021(01)
- [10]多穗柯三叶苷对高脂饮食诱导的肥胖大鼠的减肥作用及机理研究[D]. 沈海亮. 西南大学, 2021(01)