一、季节效应对绵羊体外受精的影响（论文文献综述）
孙伟[1]（2021）在《奶牛种公牛培育及性别控制冷冻精液生产效率影响因素的研究》文中提出本研究针对我国奶牛养殖产业对优质种公牛培育和良种母牛快速扩繁的迫切需求,创新集成了奶牛育种关键技术体系、研制性别控制冷冻精液生产新技术与新产品,为解决高产奶牛扩繁速度慢的技术瓶颈问题,加快奶牛群体遗传改良进程提供了技术支撑。奶牛育种关键技术体系包括种用胚胎生产与胚胎移植（Embryo Transfer,ET）、青年公牛全基因组检测与遗传评估、生长发育、生产性能测定（Dairy Herd Improvement,DHI）及精液受精与受胎能力相关性分析。奶牛性控冷冻精液生产新技术主要围绕生产效率提升、产品质量改善与人工授精（Artificial Insemination,AI）关键技术开发。具体研究内容及结果如下:1、创新集成了高效的奶牛种用胚胎生产与ET关键技术流程,使每头供体牛平均生产体内胚胎6.6枚,比行业平均水平（5枚）高32.0%;冷冻胚胎移植受胎率为45.0-58.6%、产犊率为38.4-55.8%,均高于行业平均水平。2、利用全基因组检测结合奶牛DHI技术,集成了种公牛遗传-生产性能对比育种评价体系。不同月龄青年公牛生长发育关键指标,与行业标准相比,体重和睾丸周径均高于行业标准平均水平,并筛选出遗传品质优秀的种公牛154头,其中育种综合指数GTPI（General Total Performance Index）≥2600指数的种公牛35头、占比22.7%;AI配种的种母牛一、二和三胎次305天产奶量与商品母牛相比分别提升了823.0 kg、1374.5 kg和976.7 kg,表明全基因组检测遗传评估与生产性能实际表型值的显着关联性。3、体外受精（In vitro fertilization,IVF）与AI受胎率对比分析显示,同一头种公牛精液的IVF受精率与AI受胎率高度关联,证明IVF可作为新的繁殖性状评价指标纳入奶牛种公牛育种评价体系,据此把种公牛受精能力分为三个等级,分别是正常受精率（Normal fertility bulls:45-60%）、较高受精率（Higher fertility bulls:61-80%）、高受精率（Highest fertility bulls:>80%）。4、探究异种动物的精子（山羊、绵羊和鹿）对于奶牛X精子的受精推流效果表明,选择山羊精液受精推流最佳,在此基础上开发了奶牛性控冻精生产新技术,使奶牛性控冻精生产效率提升2倍以上、生产成本降低70%,并确定新产品的标准为:100万分离X精子混合100万山羊精子,该产品可以保持平均56.2%的AI情期受胎率和94.6%的性控准确率。5、添加抗氧化剂VE、SOD、CAT可以明显提升奶牛分离X精子的活力,特别是奶牛性控冻精的体外存活时间由原来的4-6 h延长到8-10 h,该产品的AI受胎率总体提升了5-10%,为奶牛性控冻精产业化推广应用提供了技术支撑。
李娜[2]（2020）在《绵羊IVF 8-细胞、16-细胞、桑椹胚阶段转录组研究》文中进行了进一步梳理绵羊卵裂期早期胚胎经历了受精卵形成、合子基因组激活、卵裂球压实等四个阶段,涉及胚胎转录结构的剧烈变化,研究8-细胞、16-细胞、桑椹胚阶段绵羊体外受精胚胎转录组,对了解早期胚胎生长发育规律十分重要。本研究为获得绵羊体外受精胚胎样本进行转录组测序,对绵羊体外受精培养体系进行优化;分别用单细胞裂解液和PicoPure?RNA Isolation Kit获得RNA,筛选有效单个胚胎RNA获取方法,纯化mRNA,将mRNA逆转录成cDNA,Smart-Seq2扩增cDNA构建绵羊IVF 8-细胞、16-细胞、桑椹胚期单个胚胎转录组测序文库,采用Illumina HiSeq Xten高通量测序技术进行转录组测序;筛选不同卵裂期胚胎差异表达基因,进行GO功能分析及KEGG分析。获得结果如下:1.在绵羊卵母细胞成熟培养液中添加10μg/mL的LH卵母细胞的成熟率为76.60%,卵裂率为63.24%,桑椹胚率为30.81%,显着高于添加0μg/mL、5μg/mL、15μg/mL、20μg/mL LH的成熟培养液（P<0.05）。2.用单细胞裂解液裂解绵羊单个胚胎,纯化mRNA,将mRNA逆转录成cDNA,Smart-Seq2扩增cDNA,检测PCR产物浓度均在60 ng以上,cDNA片段大小集中分布在1kbp2 kbp之间,成功构建绵羊IVF 8-细胞、16-细胞、桑椹胚期单个胚胎转录组测序文库,而采用PicoPure?RNA Isolation Kit提取单个胚胎RNA,检测RNA质量,RIN<1.5且28S/18S<0.2,未满足cDNA扩增要求,无法构建转录组测序文库。3.用DEGSeq软件分析差异表达基因,以FC>2or<0.5且Q-value<0.05为筛选标准,8-细胞VS 16-细胞筛选到170条DEGs,其中上调126条,下调44条;16-细胞VS桑椹胚筛选找到417条DEGs,其中上调47条,下调370条;8-细胞VS桑椹胚筛选到126条DEGs,其中上调36条,下调90条。对差异表达基因进行GO生物功能分析,主要涉及核苷酸化合物合成、代谢调节、有机环化合物生物合成、RNA代谢、化合物代谢等生物过程。对差异表达基因进行KEGG分析结果显示,8-细胞VS 16-细胞DEGs参与到126条通路中,显着富集在癌症中转录失调、Hippo信号通路等11条代谢通路;16-细胞VS桑椹胚DEGs参与到206条代谢通路,显着富集在剪接体、调控干细胞多能性的信号通路2条代谢通路;8-细胞VS桑椹胚DEGs无显着富集代谢通路。
李昊[3]（2019）在《Myostatin基因敲低克隆绵羊的研究》文中研究说明肌肉生长抑制素（Myostatin,MSTN）是一种生长因子,属于TGF-β超家族,主要在骨骼肌细胞中表达,对肌肉的生长具有负调控作用。MSTN基因的过表达可引起肌肉萎缩,而MSTN基因发生突变或被敲除时则会使动物的肌肉量增加,产生双肌现象。本研究利用克隆获得的绵羊MSTN基因构建真核表达载体,同时设计合成MSTN干涉序列并构建RNA干涉载体,共转染293GP细胞后经荧光定量PCR检测获得干涉效率最佳的载体;将其线性化后转染绵羊成纤维细胞后,经G418筛选获得MSTN敲低转基因细胞系;以MSTN敲低转基因细胞为核供体,利用细胞核移植的方法获得MSTN敲低转基因绵羊克隆胚和转基因绵羊,以期建立获得肌肉丰满绵羊新品系的方法。此外,本研究利用CRISPR/Cas9系统,获得了基因编辑胚胎和小鼠,为后续利用CRIISPR/Cas9系统获得基因打靶绵羊奠定基础。本研究的结果与结论如下:1、绵羊MSTN基因RNA干涉载体构建和活性分析（1）绵羊Myostatin基因的克隆:参照GenBank中绵羊MSTN基因序列（AF019622.1）,采用RT-PCR扩增技术,克隆绵羊肌肉生长抑制素基因,将其连接到pcDNA3.1（+）载体,获得肌肉抑制素基因真核表达载体;（2）RNA干涉表达载体的构建:参照绵羊MSTN基因的mRNA序列,设计合成RNA干涉序列并与pRNAT-U6载体连接,获得RNA干涉表达载体。与真核表达载体共转染293GP细胞后,通过实时定量PCR检测干涉效率,获得干涉效果最佳序列。（3）RNA干涉载体表达活性检测:将筛选获得的RNA干涉载体线性化,采用显微注射的方式,注射到小鼠原核时期的胚胎中,注射后的胚胎可以分裂为2细胞,经体外培养最终获得表达绿色荧光蛋白的囊胚,表明所构建的RNA干涉载体可以在胚胎中正常表达并支持胚胎的发育。2、绵羊MSTN敲低转基因成纤维细胞系的建立通过脂质体转染法将线性化的RNA干涉载体转染到绵羊成纤维细胞中,经G418筛选,获得转基因阳性细胞;PCR结果显示,构建的基因已整合到细胞基因组中;对获得的转基因阳性细胞的形态学特征、生长曲线以及冷冻复苏后特征的检测结果表明,转基因细胞具有正常细胞的生物学特征。3、绵羊MSTN敲低转基因胚胎的获得（1）供体细胞的修饰和处理:来源于成纤维细胞的核移植胚胎的卵裂率为44.6%,高于MSTN敲低转基因细胞的33.0%,且差异显着,但两者的桑/囊胚率差异不显着（分别为24.1%和15.6%）;供体细胞不需进行血清饥饿处理,使用接触抑制方法可以达到相同效果。（2）重构胚的融合、激活和培养:采用逐个融合（一次一个）的融合方式能显着提高融合效率,但融合后的胚胎发育能力和批量融合（一次多个）方法比差异不显着;采用A23187+6-DMAP激活卵母细胞与采用Ionomycin+6-DMAP激活方法之间的效果差异不大;重构胚融合后培养34 h后再进行激活可有效提高胚胎卵裂和囊胚发育率。KSOM和SOFaa都可以用来进行绵羊克隆胚的体外培养。4、转基因核移植胚胎的移植和胎儿鉴定（1）重构胚的移植:采用输卵管移植方法,将原核期或2-细胞期的核移植胚胎（242枚）移植到同步发情的受体绵羊（23只）体内,以检验其在体内的发育能力。（2）转基因胎儿鉴定:在23只受体中,最终只有1只受体妊娠,但妊娠期间发生流产,未能获得成活个体,获得流产胎儿1只;对流产胎儿进行PCR鉴定,结果显示,胎儿基因组中整合有目的基因。5、肌肉特异表达Cas9蛋白打靶胚胎的获得（1）Rosa26基因sgRNA的设计和体外验证:根据小鼠Rosa26基因序列设计sgRNA,体外编辑试验表明,所设计的sgRNA可以对Rosa26位点发生编辑作用;（2）肌肉特异打靶载体的构建:通过PCR和同源重组连接,成功构建了肌肉特异表达Cas9蛋白的同源打靶载体Donor-SP-Cas9-DsRed;（3）Rosa26基因编辑胚胎和小鼠的获得:注射Rosa26 sgRNA和Cas9到小鼠胚胎,注射后的胚胎可以正常卵裂并支持囊胚发育,通过PCR和测序结果显示,获得的胚胎为基因编辑胚胎,注射的胚胎经胚胎移植后,获得了 Rosa26基因编辑小鼠;（4）通过将同源打靶载体与Rosa26 sgRNA和Cas9联合注射的方式,获得肌肉特异表达Cas9蛋白的基因打靶胚胎;综上所述,通过构建MSTN基因RNA干涉载体、转染绵羊成纤维细胞建立MSTN敲低转基因细胞系和转基因细胞核移植等程序,可以获得MSTN敲低的绵羊转基因克隆胚,胚胎移植后获得流产胎儿且携带外源基因,表明获得的重构胚具有体内发育能力,可以通过该方法获得MSTN敲低的转基因绵羊。本研究结果为培育MSTN敲低的绵羊新品系提供了依据。此外,通过利用CRISPR/Cas9系统,获得了基因编辑胚胎和小鼠,初步在小鼠上建立了基因编辑和基因打靶体系,为后续利用CRISPR/Cas9系统获得基因打靶绵羊奠定基础。
吕和[4]（2016）在《不同因素对绵羊体外胚胎生产的影响》文中进行了进一步梳理本论文主要研究了不同因素对绵羊体外胚胎生产的影响,主要分为以下几个方面：1.在绵羊卵母细胞成熟液中添加不同浓度的褪黑素（0、10-5、10-7、10-9mol/L）,体外培养24h后,观察各试验组的成熟率。结果表明,褪黑素浓度为10-7M组成熟率最高,但与其他组相比无显着性差异（P>0.05）。各组卵母细胞成熟后进行孤雌激活,体外培养,结果显示,四个组之间卵裂率和囊胚率均无显着差异（P>0.05）,但三个试验组的囊胚凋亡指数（12.22～18.18%）显着低于无添加的对照组（21.30%,P<0.05）。其中,10-9mol·L-1浓度组的凋亡指数最低。2.比较精液常温保存和低温保存对体外受精的影响。采集新鲜的公羊精液,经过稀释后分别进行常温保存和低温保存,然后体外受精,结果表明,低温保存组卵裂率和囊胚率均略高于常温保存组,但两组无显着性差异（P>0.05）。3.比较受精液中不同血清浓度对体外受精的影响。分别用含有2%和20%发情母羊血清的受精液进行体外受精,结果表明,两试验组卵裂率和囊胚率均无显着性差异（P>0.05）。4.比较两种不同的精液稀释保存液对体外受精效果的影响。结果表明,利用稀释保存液LTGC和SOF常温保存处理后的精子,进行体外受精后,两试验组卵裂率和囊胚率均无显着性差异（P>0.05）。5.卵母细胞体外成熟并孤雌激活后,移入添加了不同浓度褪黑素（0、10-5、10-7、10-9mol·L-1）的培养液中进行体外培养,结果表明,四个组之间的卵裂率并无显着差异（P>0.05）,10-7、10-9mol·L-1两个试验组的囊胚率要显着高于其他两组,但两个组间无差异。10-5、10-7、10-9mol·L-1浓度组的胚胎凋亡指数显着低于对照组（P<0.05）,其中10-5mol·L-1组的（17.56%）显着高于10-7、10-9浓度组（13.64%、11.62%,P<0.05）。
唐淑红[5]（2015）在《IGF-I和GSH对不同季节绵羊细管冻精质量的影响》文中指出绵羊是我国重要的经济动物,为人类提供所需的毛、肉等产品。目前,利用冻精进行人工授精、体外受精等手段可提高绵羊的繁殖效率,同时还可降低饲养成本。然而绵羊冻精,特别是非繁殖季节绵羊冻精质量较差,导致冻精的利用率较低。目前仍未找到适合绵羊精子生理特性的冷冻稀释液。为改善全季绵羊冷冻精液品质,本研究分别在繁殖季节（11月）及非繁殖季节（6月）对7只特克赛尔公羊进行采精,并将同季节不同个体精液混和。在冷冻稀释液中分别添加IGF-I和GSH,用一步稀释法制作细管冻精。精液解冻后,分别温育0、1及2 h,应用SYBR-14/PI荧光双染法、低渗肿胀实验和吖啶橙染色分别测定精子的顶体膜、质膜和DNA完整率。利用解冻精子进行体外受精、体外培养,并测定卵裂率和囊胚率。共同探索不同季节条件下对绵羊冷冻精子质量的影响,以及添加IGF-I和GSH对繁殖季节及非繁殖季节冻精质量的影响,为提高冻精利用效率提供理论依据。结果如下:1、不同季节（繁殖季节、非繁殖季节）对冷冻解冻后精子质量的影响:繁殖季节冷冻解冻后精子顶体膜、质膜的完整性以及体外受精后的卵裂率和囊胚率都显着高于非繁殖季节。2、在冷冻稀释液中添加不同浓度IGF-I（0、50、100、150、250 ng/mL）对繁殖季节冻精质量的影响:添加50、100、150 ng/m L IGF-I精子顶体膜完整率在解冻初期显着高于对照组（P<0.05）。添加100 ng/m L IGF-I精子质膜及DNA完整率在解冻温育1 h时显着高于其对照组（P<0.05）,而添加150、250 ng/mL IGF-I显着降低精子顶体膜及质膜的完整率（P<0.05）。因此在冷冻稀释液中添加100 ng/m L IGF-I可提高繁殖季节冷冻解冻后精子顶体膜、质膜、DNA的完整性。3、在冷冻稀释液中添加不同浓度IGF-I（0、50、100、150、250 ng/mL）对非繁殖季节冻精质量的影响:添加100 ng/mL IGF-I在初解冻、解冻后温育1及2 h时能显着提高精子顶体膜完整率（P<0.05）。添加100、150 ng/m L IGF-I在初解冻及解冻后温育1 h时能显着提高精子质膜完整率（P<0.05）。添加250 ng/mL IGF-I在解冻后温育1、2 h时显着降低精子DNA完整率（P<0.05）。添加100、150 ng/m L IGF-I可提高非繁殖季节冻精解冻后体外受精的卵裂率。因此在冷冻稀释液中添加100 ng/m L IGF-I可提高非繁殖季节冷冻解冻后精子顶体膜、质膜的完整性,提高体外受精后的卵裂率。4、在冷冻稀释液中添加不同浓度GSH（0、1、2、2.5、3 m M）对繁殖季节冻精质量的影响:添加1 mM GSH在初解冻及解冻后温育1 h时能提高精子顶体膜完整率（P<0.05）。添加1、2 mM GSH在初解冻及解冻后温育1、2 h时能显着提高精子质膜完整率（P<0.05）。添加1 mM GSH在初解冻及解冻后温育1、2 h时能显着提高精子DNA完整率（P<0.05）。因此在冷冻稀释液中添加1 mM GSH可提高繁殖季节冷冻解冻后精子顶体膜、质膜及DNA的完整性。5、在冷冻稀释液中添加不同浓度GSH（0、1、2、2.5、3 mM）对非繁殖季节冻精质量的影响:添加1 mM GSH在初解冻及解冻后温育1 h时能显着提高精子顶体膜完整率（P<0.05）。添加1 mM GSH在解冻温育1 h时显着提高精子质膜完整率（P<0.05）。在冷冻稀释液中添加1 mM GSH可提高非繁殖季节冻精解冻后体外受精的卵裂率及囊胚率。因此在冷冻稀释液中添加1 mM GSH可提高非繁殖季节冷冻解冻后精子顶体膜、质膜的完整性,提高体外受精后的卵裂率及囊胚率。综上所述,繁殖季节冷冻解冻后精子顶体膜、质膜完整性,及体外受精后的效果都好于非繁殖季节。在冷冻稀释液中添加IGF-I 100 ng/mL或GSH 1 mM对提高繁殖季节顶体膜及质膜完整性效果较好,同时也可改善非繁殖季节冷冻解冻后精子顶体膜、质膜的完整性以及体外受精后的效果。
陆会宁,齐燕姣[6]（2013）在《影响绵羊卵母细胞体外成熟因素研究进展》文中研究表明卵母细胞体外成熟培养技术是现代生物技术中的重要内容之一,为提高绵羊卵母细胞的成熟质量和促进动物生物技术研究,综述了绵羊卵母细胞体外成熟的主要影响因素,主要包括季节因素和绵羊年龄、卵母细胞的来源、培养条件和方法、成熟培养液及其它添加成分等。
任立坤,刘月琴,张英杰,杨少华,王红娜[7]（2012）在《羊卵母细胞体外成熟影响因素》文中研究指明随着哺乳动物体外受精、转基因、核移植、外源基因的导入等生物工程技术研究的不断深入,卵母细胞的体外成熟技术与冷冻保存联系密切也日益受到重视。但迄今为止,与体内成熟卵母细胞相比,体外成熟卵母细胞质量差,胞质成熟鉴定困难,核、质成熟不同步等许多问题还未解决。这些都直接影响着卵母细胞体外成熟的质量,并制约着上述生物技术的发展。因此,完善哺乳动物卵母细胞体外成熟培养体系,提高卵母细胞体外成熟
任立坤,刘月琴,张英杰,杨少华,王红娜[8]（2012）在《羊卵母细胞体外成熟影响因素》文中研究说明随着哺乳动物体外受精、转基因、核移植、外源基因的导入等生物工程技术研究的不断深入,卵母细胞的体外成熟技术与冷冻保存联系密切也日益受到重视。但迄今为止,与体内成熟卵母细胞相比,体外成熟卵母细胞质量差,胞质成熟鉴定困难,核、质成熟不同步等许多问题还未解决。这些都直接影响着卵母细胞体外成熟的质量,并制约着上述生物技术的发展。因此,完善哺乳动物卵母细胞体外成熟培养体系,提高卵母细胞体外成熟的质量,成为亟待解决的问题。影响卵母细胞体外成熟的
常卫华[9]（2011）在《重离子辐射对绵羊卵母细胞体外成熟、受精及发育的影响》文中研究表明体外受精技术是指在实验室条件下,人为模拟雌性动物生殖道内环境,使获能精子和成熟卵子完成受精形成合子的过程。它是继人工授精（AI）技术、胚胎移植（ET）技术以后动物繁殖领域的第三次革命。近年以来,随着市场经济的向前发展,绵羊产业化前景越来越广阔,体外受精技术越来越受到人们的重视。然而,由于受到各种因素的制约,绵羊体外受精技术仍不稳定,体外受精率不高,胚胎发育率低、质量差,而且很难重复。对此,我们进行了重离子辐射对绵羊卵母细胞体外成熟、受精及早期胚胎发育影响的试验研究,主要结果如下:1.成熟液中,添加不同配比浓度的FSH和LH对卵母细胞的体外成熟影响显着,其中10μg/ml FSH+10μg/ml LH（1:1）时卵母细胞体外成熟率最高,为61.2%。2.在绵羊卵母细胞体外成熟液中添加不同浓度的丙酮酸钠,其卵母细胞体外成熟率不同。添加0.2g/L的丙酮酸钠,卵母细胞体外成熟率最高;而添加0.4、0.6g/L的丙酮酸钠,其体外成熟率显着下降。3.重离子束辐射绵羊卵母细胞对其体外成熟影响显着,1.0和1.5Gy的照射剂量与对照组相比可以明显促进卵母细胞的体外成熟,且1.0Gy剂量辐照其促进效果更好,而2.0Gy剂量进行照射则抑制卵母细胞体外成熟。4.在绵羊体外受精过程中,采用冻精或鲜精做体外受精,其早期胚胎的发育情况并无显着性差异。因此,在体外受精的试验过程中,冻精也能获得预期的试验目的。5.重离子束辐射绵羊精液并做体外受精后,早期胚胎发育有着显着变化。0.5、1.0Gy剂量辐照精液,绵羊早期胚胎的卵裂率、桑葚胚率显着升高,囊胚率无显着变化;1.5 Gy剂量辐照精液,卵裂率显着提高,而桑葚胚率和囊胚发育率显着降低;2.0 Gy剂量辐照精液,其卵裂率、桑葚胚率、囊胚发育率均极显着降低。6.0.5、1.0Gy剂量的重离子束辐射绵羊卵母细胞,体外受精后的卵裂率、桑葚胚率、囊胚发育率显着升高;而2.0Gy剂量组的卵裂率、桑葚胚率、囊胚发育率极显着降低,其中囊胚发育率为0。
段明军[10]（2008）在《牛羊体外受精技术条件优化和牛体外受精胚胎玻璃化冷冻保存技术的研究》文中认为本试验探讨了精卵共培养时间和卵泡液对牛体外受精效果的影响,以及卵泡液、精卵共培养时间、精卵共培养液量、颗粒细胞层数以及季节对羊体外受精效果的影响,进一步优化了牛羊体外受精技术条件;本试验还对冷冻保护剂、冷冻方法、冷冻载体以及胚胎不同发育阶段的冷冻效果等进行了研究。牛体外受精技术条件优化的研究:（1）受精10 h组的卵裂率和囊胚率均优于受精7 h组,其中卵裂率差异显着（P<0.05）,囊胚率差异不显着（P>0.05）;（2）在成熟培养液中添加BFF组和SFF组的卵裂率分别为75.41﹪和63.01﹪,差异显着（P<0.05）。牛体外受精胚胎玻璃化冷冻保存的研究:（1） EG组与EG + DMSO组的形态完整率差异不显着（P>0.05）;EG组与对照组的孵育率差异显着（P>0.05）,虽然EG + DMSO组的孵育率高于EG组,但差异不显着（P>0.05）; （2）早期囊胚经OPS法玻璃化冷冻和程序化冷冻法冷冻的孵育率均低于对照组,分别为30.23%、35.56%和39.34%,但差异不显着（P<0.05）,说明采用OPS进行牛早期囊胚玻璃化冷冻能取得与程序化冷冻相当的效果;（3）GMS组与0.25m1细管组的形态完整率差异极显着（p < 0.01）,OPS组与0.25m1细管组的形态完整率差异显着（p < 0.05）,但GMS组与OPS组间的差异不显着（p > 0.05）,说明0.25ml细管的玻璃化冷冻效果欠佳,OPS和GMS的早期囊胚玻璃化冷冻效果相当,可用OPS取代GMS; （4）桑甚胚组与囊胚组的形态完整率差异不显着（P>0.05）;桑堪胚组与对照组的孵育率差异显着（p<0.05）,桑堪胚组与囊胚组差异显着（P<0.05）。（5）桑椹胚组与早期囊胚组形态完整率差异不显着（P>0.05）;桑椹胚组冻前与冻后平均活力差异显着（p<0.05）,早期囊胚组冻前与冻后平均活力差异显着（p<0.05）,孵化囊胚组冻前与冻后平均活力差异显着（p< 0.05）。绵羊体外受精技术条件优化的研究:（1）在成熟培养液中添加SFF组和BFF组的卵裂率分别为65.23﹪和60.43﹪,差异不显着（P>0.05）;囊胚率分别为26.16﹪和17.11﹪,差异显着（P<0.05）;（2）受精22 h组、18 h组和12 h组的卵裂率分别为64.85﹪、54.39﹪和48.72%,受精22h组和18 h组间差异显着（P<0.05）,受精22 h组和12 h组间差异极显着（P<0.01）;（3）精卵共培养液量为100 ul组的卵裂率和囊胚率均优于70 ul组和200 ul组,但差异均不显着（P>0.05）;（4）带有1层～3层颗粒细胞的卵母细胞进行IVF的效果优于0层组,两者的卵裂率和囊胚率均显着（P<0.05）;3层～5层组的卵裂率和囊胚率也优于0层组,但两者差异不显着（P>0.05）;（5）秋季的卵裂率和囊胚率均高于夏季,差异显着（P<0.05）,但秋季与春季相比差异均不显着（P>0.05）。通过上述试验,本实验室已建立了牛体外受精技术,已初步建立了绵羊体外受精技术和牛体外受精胚胎玻璃化冷冻保存技术体系。
二、季节效应对绵羊体外受精的影响（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、季节效应对绵羊体外受精的影响（论文提纲范文）
（1）奶牛种公牛培育及性别控制冷冻精液生产效率影响因素的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 缩略词表 |
| 第一章 文献综述 |
| 1.1 奶牛繁育技术研究进展 |
| 1.1.1 人工输精技术 |
| 1.1.2 MOET育种技术 |
| 1.1.2.1 胚胎移植国内外应用情况 |
| 1.1.2.2 胚胎移植技术存在的问题及解决方法 |
| 1.1.2.3 胚胎移植技术前景 |
| 1.1.3 活体采卵-体外受精技术 |
| 1.1.3.1 体外受精技术的应用情况 |
| 1.1.3.2 体外受精技术存在的问题 |
| 1.1.3.3 体外受精技术的发展前景 |
| 1.1.4 奶牛生产性能测定 |
| 1.2 奶牛分子育种技术研究进展 |
| 1.2.1 分子辅助标记 |
| 1.2.2 全基因组选择 |
| 1.2.2.1 全基因组关联研究 |
| 1.2.2.2 全基因组选择技术 |
| 1.2.2.3 基因组选择的应用 |
| 1.2.3 动物体细胞克隆技术 |
| 1.2.3.1 动物克隆操作技术 |
| 1.2.3.2 动物克隆研究的生物学意义 |
| 1.2.3.3 动物克隆技术的应用前景及存在的问题 |
| 参考文献 |
| 第二章 影响种公牛培育的种用胚胎质量及受胎率相关因素研究 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 材料与方法 |
| 2.2.1 供体母牛选择 |
| 2.2.2 实验材料 |
| 2.2.2.1 仪器与设备 |
| 2.2.2.2 主要试剂耗材 |
| 2.2.3 实验方法 |
| 2.2.3.1 试剂配制 |
| 2.2.3.2 超数排卵处理 |
| 2.2.3.3 供体牛人工授精 |
| 2.2.3.4 牛胚胎采集和鉴定 |
| 2.2.3.5 牛胚胎冷冻保存 |
| 2.2.3.6 牛体外胚胎生产 |
| 2.2.3.7 牛胚胎解冻和移植 |
| 2.2.3.8 妊娠检查 |
| 2.2.4 实验数据处理 |
| 2.3 实验结果 |
| 2.3.1 影响奶牛种用胚胎生产因素的研究 |
| 2.3.1.1 奶牛不同性别X/Y冷冻精子体内胚胎生产效率的比较 |
| 2.3.1.2 添加与未添加抗氧化剂性控冻精对体外性控胚胎生产效率的影响 |
| 2.3.1.3 添加与未添加抗氧化剂对奶牛体内性控胚胎生产效率的影响 |
| 2.3.2 奶牛种用胚胎移植效果的比较 |
| 2.3.2.1 不同季节对牛胚胎移植效果的影响 |
| 2.3.2.2 不同月龄受体母牛对胚胎移植效果比较 |
| 2.4 讨论 |
| 第三章 全基因组选择技术及受精能力检测在奶牛育种中应用效果的研究 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 材料与方法 |
| 3.2.1 试剂 |
| 3.2.2 仪器设备 |
| 3.2.3 实验方法 |
| 3.2.3.1 试剂的配制 |
| 3.2.3.2 青年种公牛生长发育测定 |
| 3.2.3.3 全基因组检测 |
| 3.2.3.4 DHI测定方法 |
| 3.2.4 实验数据处理 |
| 3.3 实验结果 |
| 3.3.1 种公牛全基因组检测及生长发育研究 |
| 3.3.1.1 青年种公牛生长发育指标分析 |
| 3.3.1.2 青年种公牛全基因组检测及遗传评估 |
| 3.3.2 核心种母牛全基因组检测及其生产性能研究 |
| 3.3.3 种公牛精液AI受胎率与IVF受精率相关性研究 |
| 3.3.3.1 常规冷冻精液IVF受精率与AI受胎率的相关性分析 |
| 3.3.3.2 性控冷冻精液IVF受精率与AI受胎率的相关性分析 |
| 3.3.3.3 常规与性控冷冻精液AI受胎率与参配奶牛胎次的影响 |
| 3.3.3.4 常规和性控冷冻精液IVF受精率与AI受胎率的相关性分析 |
| 3.4 讨论 |
| 第四章 添加异种动物精液及抗氧化剂对奶牛性控冷冻精液生产效率和品质的影响 |
| 4.1 引言 |
| 4.2 材料与方法 |
| 4.2.1 实验材料 |
| 4.2.1.1 药品试剂及耗材 |
| 4.2.1.2 器材设备 |
| 4.2.2 实验方法 |
| 4.2.2.1 原精的准备 |
| 4.2.2.2 染色处理 |
| 4.2.2.3 精子分离操作 |
| 4.2.2.4 精子分离平衡和冷冻保存 |
| 4.2.2.5 产品质量检测 |
| 4.2.2.6 输精时精液处理 |
| 4.2.3 实验数据处理 |
| 4.3 实验结果 |
| 4.3.1 添加异种动物精液对奶牛性控冷冻精液生产效率及品质影响 |
| 4.3.1.1 山羊、鹿和绵羊异种精子对牛精子辅助受精推流作用效果比较 |
| 4.3.1.2 奶牛高效性控冷冻精液新产品与常规性控冻精受胎率及性别比例研究 |
| 4.3.2 添加抗氧化剂对奶牛性控冻精品质的影响 |
| 4.3.2.1 添加V_E对奶牛性控冷冻精液品质的影响 |
| 4.3.2.2 添加SOD对奶牛性控冷冻精液品质的影响 |
| 4.3.2.3 添加CAT对奶牛性控冷冻精液品质的影响 |
| 4.3.3 奶牛性控冷冻精液关键技术指标与国内外育种同行企业比较 |
| 4.4 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 攻读博士期间发表的论文 |
（2）绵羊IVF 8-细胞、16-细胞、桑椹胚阶段转录组研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 缩略词表 |
| 第1章 绪论 |
| 1.1 早期胚胎基因表达 |
| 1.1.1 早期胚胎母源基因表达 |
| 1.1.2 早期胚胎DNA甲基化基因表达 |
| 1.1.3 早期胚胎发育阻滞 |
| 1.2 单细胞转录组技术 |
| 1.2.1 单细胞RNA-Seq技术 |
| 1.2.2 单细胞RNA-Seq技术在早期胚胎中的应用 |
| 1.3 绵羊体外胚胎的生产 |
| 1.3.1 卵母细胞质量对绵羊体外胚胎培养的影响 |
| 1.3.2 促性腺激素对绵羊体外胚胎培养的影响 |
| 1.4 研究目的意义 |
| 1.5 技术路线 |
| 第2章 促黄体素对绵羊卵母细胞体外成熟及卵裂的影响 |
| 2.1 材料与方法 |
| 2.1.1 试验材料 |
| 2.1.2 主要试剂配制 |
| 2.1.3 试验方法 |
| 2.1.4 统计分析 |
| 2.2 结果与分析 |
| 2.2.1 不同浓度LH对 COCs成熟率的影响 |
| 2.2.2 不同浓度LH对卵裂率的影响 |
| 2.2.3 不同浓度LH对桑葚胚率的影响 |
| 2.3 讨论 |
| 2.4 小结 |
| 第3章 Smart-Seq2 技术构建绵羊单个胚胎测序文库 |
| 3.1 材料与方法 |
| 3.1.1 主要试剂和仪器 |
| 3.1.2 试验设计 |
| 3.2 结果与分析 |
| 3.2.1 PicoPure?RNA Isolation Kit提取RNA质量检测 |
| 3.2.2 单细胞裂解液获取RNA经 Smart-Seq2 扩增产物质量检测 |
| 3.3 讨论 |
| 3.4 小结 |
| 第4章 绵羊IVF8-细胞、16-细胞、桑椹胚差异表达基因筛选及功能注释研究 |
| 4.1 材料与方法 |
| 4.1.1 试验材料 |
| 4.1.2 试验方法 |
| 4.2 结果 |
| 4.2.1 绵羊8-细胞、16-细胞、桑椹胚转录组测序数据质量分析 |
| 4.2.2 绵羊IVF8-细胞、16-细胞、桑椹胚基因表达水平分析 |
| 4.2.3 绵羊IVF8-细胞、16-细胞、桑椹胚部分基因表达量分析 |
| 4.2.4 绵羊IVF8-细胞、16-细胞、桑椹胚差异表达基因筛选 |
| 4.2.5 绵羊IVF8-细胞、16-细胞、桑椹胚差异表达基因GO富集分析 |
| 4.2.6 绵羊IVF8-细胞、16-细胞、桑椹胚差异基因KEGG通路分析 |
| 4.3 讨论 |
| 4.3.1 差异表达基因及GO功能分析 |
| 4.3.2 早期胚胎发育相关基因分析 |
| 4.3.3 KEGG通路分析 |
| 4.4 小结 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 作者简介 |
（3）Myostatin基因敲低克隆绵羊的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 1 绪论 |
| 1.1 肌肉生长抑制素(Myostatin,MSTN) |
| 1.1.1 MSTN基因的发现 |
| 1.1.2 MSTN基因和蛋白结构 |
| 1.1.3 MSTN基因的表达 |
| 1.1.4 MSTN的作用机制 |
| 1.1.5 MSTN的表达调控机制 |
| 1.1.6 MSTN基因的应用前景 |
| 1.2 RNA干涉 |
| 1.2.1 RNA干涉现象的发现 |
| 1.2.2 RNA干涉的作用机制 |
| 1.2.3 RNA干涉的作用特点 |
| 1.2.4 siRNA和shRNA技术优缺点 |
| 1.2.5 哺乳动物的RNA干涉 |
| 1.2.6 RNA干涉的应用前景 |
| 1.3 卵母细胞的体外成熟 |
| 1.3.1 卵母细胞的成熟 |
| 1.3.2 卵母细胞的成熟调控机制 |
| 1.3.3 卵母细胞成熟的特征 |
| 1.3.4 卵母细胞成熟的影响因素 |
| 1.4 哺乳动物细胞核移植 |
| 1.4.1 哺乳动物胚胎细胞核移植研究进展 |
| 1.4.2 哺乳动物胚胎干细胞核移植研究进展 |
| 1.4.3 哺乳动物体细胞核移植研究进展 |
| 1.4.4 哺乳动物转基因细胞核移植研究进展 |
| 1.4.5 影响细胞核移植结果的因素 |
| 1.4.6 核移植存在的问题 |
| 1.5 CRISPR/Cas9 |
| 1.5.1 CRISPR/Cas9的发现 |
| 1.5.2 Cas9蛋白的结构 |
| 1.5.3 CRISPR/Cas9的作用机制 |
| 1.5.4 CRISPR/Cas9面临的问题和挑战 |
| 1.6 研究的目的与意义 |
| 2 绵羊Myostatin基因RNA干涉载体构建与活性分析 |
| 2.1 材料与方法 |
| 2.1.1 实验动物、细胞和菌株 |
| 2.1.2 实验载体信息 |
| 2.1.3 药品和试剂 |
| 2.1.4 溶液的配制 |
| 2.1.5 主要仪器设备 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 绵羊Myostatin基因克隆与序列分析 |
| 2.2.2 绵羊Myostatin真核表达载体的构建 |
| 2.2.3 绵羊Myostatin基因RNA干涉载体的构建 |
| 2.2.4 293GP细胞的复苏和传代培养 |
| 2.2.5 绵羊Myostatin基因RNA干涉载体效率检测 |
| 2.2.6 绵羊Myostatin基因RNA干涉载体的显微注射 |
| 2.3 结果 |
| 2.3.1 绵羊Myostatin基因的克隆与序列分析 |
| 2.3.2 绵羊Myostatin基因真核表达载体的构建 |
| 2.3.3 绵羊Myostatin基因RNA干涉载体测序 |
| 2.3.4 293GP细胞复苏传代与转染 |
| 2.3.5 RNA干涉效率结果与分析 |
| 2.3.6 RNA干涉载体表达活性分析 |
| 2.4 讨论 |
| 2.5 本章小结 |
| 3 绵羊Myostatin基因敲低成纤维细胞系的建立 |
| 3.1 实验材料 |
| 3.1.1 实验动物 |
| 3.1.2 主要药品和试剂 |
| 3.1.3 溶液配制 |
| 3.1.4 主要仪器设备 |
| 3.2 实验方法 |
| 3.2.1 RNA干涉载体的线性化 |
| 3.2.2 绵羊皮肤成纤维细胞的培养 |
| 3.2.3 G418浓度的筛选 |
| 3.2.4 绵羊皮肤成纤维细胞的转染及筛选 |
| 3.2.5 绵羊MSTN敲低转基因细胞系的鉴定 |
| 3.2.6 绵羊MSTN敲低转基因细胞的冷冻保存 |
| 3.2.7 绵羊MSTN敲低转基因细胞的冷冻复苏 |
| 3.3 实验结果 |
| 3.3.1 绵羊皮肤成纤维细胞的原代培养 |
| 3.3.2 最适G418浓度的筛选 |
| 3.3.3 转基因细胞的生物学特征 |
| 3.3.4 转基因阳性细胞的PCR鉴定 |
| 3.3.5 冷冻复苏的转基因细胞的生物学特征 |
| 3.4 讨论 |
| 3.5 本章小结 |
| 4 绵羊Myostatin基因敲低细胞核移植 |
| 4.1 实验材料 |
| 4.1.1 实验动物 |
| 4.1.2 药品试剂 |
| 4.1.3 溶液配制 |
| 4.1.4 仪器设备 |
| 4.2 实验方法 |
| 4.2.1 绵羊卵母细胞的获取 |
| 4.2.2 绵羊卵母细胞的体外成熟 |
| 4.2.3 绵羊成熟卵母细胞的孤雌激活 |
| 4.2.4 绵羊皮肤成纤维细胞的复苏 |
| 4.2.5 显微操作前的实验准备 |
| 4.2.6 核供体细胞的准备 |
| 4.2.7 核受体卵母细胞的准备 |
| 4.2.8 卵母细胞的去核和注核 |
| 4.2.9 重构胚的融合与激活 |
| 4.2.10 重构胚的体外培养 |
| 4.2.11 转基因胚胎的分子鉴定 |
| 4.2.12 转基因胚胎的移植 |
| 4.2.13 数据统计 |
| 4.3 结果 |
| 4.3.1 卵巢的保存和运输对绵羊卵母细胞成熟的影响 |
| 4.3.2 绵羊卵母细胞的采集方法和分级对卵成熟的影响 |
| 4.3.3 卵密度和不同成熟液对绵羊卵母细胞成熟的影响 |
| 4.3.4 绵羊卵母细胞成熟时间对成熟和去核的影响 |
| 4.3.5 不同的激活方法对绵羊卵母细胞孤雌激活的影响 |
| 4.3.6 供体细胞修饰和处理对绵羊重构胚发育的影响 |
| 4.3.7 绵羊重构胚融合方式对核移植胚胎发育的影响 |
| 4.3.8 重构胚激活前培养时间对绵羊重构胚发育的影响 |
| 4.3.9 不同培养液对绵羊核移植重构胚发育的影响 |
| 4.3.10 转基因重构胚的获得和PCR鉴定 |
| 4.3.11 胚胎移植和流产胎儿鉴定 |
| 4.4 讨论 |
| 4.4.1 卵巢的保存和运输 |
| 4.4.2 卵母细胞的采集、分级和培养 |
| 4.4.3 供体细胞的遗传修饰和处理 |
| 4.4.4 重构胚的融合、激活和培养 |
| 4.4.5 转基因动物的生产 |
| 4.5 本章小结 |
| 5 肌肉特异表达Cas9蛋白打靶胚胎的获得 |
| 5.1 实验材料 |
| 5.1.1 实验动物和菌株 |
| 5.1.2 实验载体信息 |
| 5.1.3 药品和试剂 |
| 5.1.4 溶液的配制 |
| 5.1.5 主要仪器设备 |
| 5.2 实验方法 |
| 5.2.1 小鼠Rosa26基因sgRNA的设计与获得 |
| 5.2.2 Rosa26基因sgRNA体外编辑效率检测 |
| 5.2.3 肌肉特异性小鼠Rosa26同源打靶载体的构建 |
| 5.2.4 小鼠胚胎的显微注射 |
| 5.2.5 注射后囊胚的基因分型和检测 |
| 5.2.6 胚胎移植和基因分型检测 |
| 5.3 结果 |
| 5.3.1 sgRNA获得与体外编辑效率检测 |
| 5.3.2 肌肉特异表达同源打靶载体的构建 |
| 5.3.3 小鼠Rosa26基因编辑胚胎的获得 |
| 5.3.4 Rosa26基因编辑小鼠的获得 |
| 5.3.5 肌肉特异表达Cas9蛋白小鼠胚胎的获得 |
| 5.4 讨论 |
| 5.5 本章小结 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 |
| 致谢 |
（4）不同因素对绵羊体外胚胎生产的影响（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 缩略语表 |
| 1 引言 |
| 1.1 研究目的及意义 |
| 1.2 卵母细胞的体外成熟 |
| 1.2.1 卵母细胞的发育成熟过程 |
| 1.2.2 影响卵母细胞体外成熟的因素 |
| 1.3 绵羊精液的保存和获能 |
| 1.3.1 精液稀释 |
| 1.3.2 精液的保存方法 |
| 1.3.3 精子获能 |
| 1.4 褪黑素对动物繁殖的作用 |
| 1.4.1 褪黑素受体 |
| 1.4.2 褪黑素的生理作用 |
| 1.4.3 褪黑素对卵母细胞体外成熟的影响 |
| 1.4.4 褪黑素对早期胚胎发育的影响 |
| 2 褪黑素对绵羊卵母细胞体外成熟的影响 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.1.1 主要药品与试剂 |
| 2.1.2 主要仪器 |
| 2.1.3 主要溶液的配制 |
| 2.2 实验方法及设计 |
| 2.2.1 实验方法 |
| 2.2.2 试验设计 |
| 2.3 数据处理与分析 |
| 2.4 试验结果 |
| 2.5 讨论 |
| 3 精液的不同处理方法对卵母细胞体外受精的影响 |
| 3.1 实验材料 |
| 3.1.1 药品与试剂 |
| 3.1.2 主要仪器 |
| 3.1.3 主要溶液的配制 |
| 3.2 实验方法及设计 |
| 3.2.1 实验方法 |
| 3.2.2 试验设计 |
| 3.3 数据处理与分析 |
| 3.4 试验结果 |
| 3.5 讨论 |
| 4 褪黑素对绵羊早期胚胎发育的影响 |
| 4.1 实验材料 |
| 4.1.1 主要药品与试剂 |
| 4.1.2 主要仪器及耗材 |
| 4.1.3 主要溶液的配制 |
| 4.2 实验方法及设计 |
| 4.2.1 实验方法 |
| 4.2.2 试验设计 |
| 4.3 数据处理与分析 |
| 4.4 试验结果 |
| 4.5 讨论 |
| 5 结论 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 作者简介 |
（5）IGF-I和GSH对不同季节绵羊细管冻精质量的影响（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 第1章 绪论 |
| 1.1 引言 |
| 1.2 精液冷冻保存的机理及影响因素 |
| 1.3 季节绵羊冻精的研究现状 |
| 1.4 冷冻稀释液的研究进展 |
| 1.5 研究的目的意义 |
| 第2章 不同季节对绵羊细管冻精质量的影响 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.3 实验结果 |
| 2.4 讨论 |
| 第3章 IGF-I对不同季节绵羊细管冻精质量的影响 |
| 3.1 实验材料 |
| 3.2 实验方法 |
| 3.3 实验结果 |
| 3.4 讨论 |
| 第4章 GSH对不同季节绵羊细管冻质量的影响 |
| 4.1 实验材料 |
| 4.2 材料与方法 |
| 4.3 实验结果 |
| 4.4 讨论 |
| 第5章 结论 |
| 5.1 实验结论 |
| 5.2 创新 |
| 5.3 展望 |
| 附录 主要试剂配制 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 作者简介 |
（6）影响绵羊卵母细胞体外成熟因素研究进展（论文提纲范文）
| 1 季节因素和绵羊年龄 |
| 1.1 季节因素 |
| 1.2 绵羊年龄 |
| 2 卵母细胞来源 |
| 2.1 卵巢的贮存时间和温度 |
| 2.2 卵母细胞的采集方法 |
| 2.3 卵泡的大小 |
| 2.4 细胞的类型和形态 |
| 3 培养方法和条件 |
| 4 成熟培养液及其添加成分 |
| 4.1 血清 |
| 4.2 激素 |
| 4.3 卵泡液 |
| 4.4 抗氧化物质 |
| 4.5 生长因子 |
| 4.5.1 上皮细胞生长因子 |
| 4.5.2 转化生长因子 |
| 4.5.3 胰岛素类生长因子 (IGF-1和IGF-II) |
| 4.5.4 血管内皮生长因子 |
| 5 结论 |
（8）羊卵母细胞体外成熟影响因素（论文提纲范文）
| 1 激素对绵羊卵母细胞体外成熟的影响 |
| 2 生长因子对绵羊卵母细胞体外成熟的影响 |
| 3 年龄、采卵方法对绵羊卵母细胞体外成熟的影响 |
| 4 季节对绵羊卵母细胞采集和体外成熟的影响 |
| 5 卵泡直径大小对绵羊卵母细胞体外成熟的影响 |
（9）重离子辐射对绵羊卵母细胞体外成熟、受精及发育的影响（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Summary |
| 缩略词表 |
| 第一章 文献综述 |
| 1.1 哺乳动物卵母细胞体外成熟研究进展 |
| 1.1.1 卵母细胞体外成熟的研究现状 |
| 1.1.2 卵母细胞采集方法 |
| 1.1.3 卵母细胞体外成熟的影响因素 |
| 1.1.3.1 培养条件 |
| 1.1.3.2 培养基 |
| 1.2 哺乳动物体外受精的研究进展 |
| 1.2.1 研究概况 |
| 1.2.2 主要影响因素 |
| 1.3 哺乳动物早期胚胎体外培养最新研究进展 |
| 1.3.1 概况 |
| 1.3.2 主要影响物质 |
| 1.3.2.1 能量 |
| 1.3.2.2 氨基酸 |
| 1.3.2.3 蛋白质 |
| 1.3.2.4 细胞因子与生长因子 |
| 1.3.2.5 抗氧化物质 |
| 1.4 辐射对哺乳动物生殖细胞及早期胚胎影响的研究进展 |
| 1.4.1 辐照的特点与机理 |
| 1.4.2 辐照在生物育种上的研究现状 |
| 1.4.2.1 辐射育种在植物上的应用 |
| 1.4.2.2 辐射在哺乳动物生殖细胞及早期胚胎方面的研究 |
| 1.5 小结 |
| 第二章 绵羊卵母细胞体外成熟试验 |
| 2.1 材料与方法 |
| 2.1.1 材料 |
| 2.1.1.1 试验材料 |
| 2.1.1.2 主要药品与试剂 |
| 2.1.1.3 主要仪器设备 |
| 2.1.2 绵羊卵巢的采集及运输 |
| 2.1.3 卵母细胞的获取及体外培养 |
| 2.1.4 卵母细胞体外成熟效果的观察 |
| 2.1.5 试验设计 |
| 2.1.5.1 不同FSH 与LH 浓度配比对绵羊卵母细胞体外成熟的影响 |
| 2.1.5.2 丙酮酸钠浓度对绵羊卵母细胞体外成熟的影响 |
| 2.1.5.3 重离子束辐照处理 |
| 2.1.6 试验数据的统计分析 |
| 2.2 结果与分析 |
| 2.2.1 不同浓度FSH 与LH 的配比对卵母细胞体外成熟的影响 |
| 2.2.2 不同浓度的丙酮酸钠对卵母细胞体外成熟的影响 |
| 2.2.3 重离子束辐照对绵羊卵母细胞体外成熟的影响 |
| 2.3 讨论 |
| 2.3.1 不同浓度的FSH 与LH 配比对卵母细胞体外成熟的影响 |
| 2.3.2 不同浓度的丙酮酸钠对卵母细胞体外成熟的影响 |
| 2.3.3 重离子束辐照对绵羊卵母细胞体外成熟的影响 |
| 第三章 绵羊卵母细胞体外受精试验 |
| 3.1 材料与方法 |
| 3.1.1 材料 |
| 3.1.1.1 试验材料 |
| 3.1.1.2 主要药品与试剂 |
| 3.1.1.3 主要仪器设备 |
| 3.1.1.4 主要操作液配方 |
| 3.1.2 方法 |
| 3.1.2.1 颗粒细胞的制备 |
| 3.1.2.2 体外受精 |
| 3.1.3 试验设计 |
| 3.1.3.1 冷冻精液对早期胚胎发育的影响 |
| 3.1.3.2 重离子辐射绵羊精子细胞对早期胚胎发育的影响 |
| 3.1.3.3 重离子辐射绵羊卵母细胞对早期胚胎发育的影响 |
| 3.1.4 试验数据的统计分析 |
| 3.2 结果与分析 |
| 3.2.1 冷冻精液对早期胚胎发育的影响 |
| 3.2.2 重离子辐射绵羊精子细胞对早期胚胎发育的影响 |
| 3.2.3 重离子辐射绵羊卵母细胞对早期胚胎发育的影响 |
| 3.3 讨论 |
| 3.3.1 冷冻精液对早期胚胎发育的影响 |
| 3.3.2 重离子辐射绵羊精子细胞对早期胚胎发育的影响 |
| 3.3.3 重离子辐射绵羊卵母细胞对早期胚胎发育的影响 |
| 第四章 结论 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 导师简介 |
| 个人简介 |
（10）牛羊体外受精技术条件优化和牛体外受精胚胎玻璃化冷冻保存技术的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 缩略词 |
| 前言 |
| 文献综述 |
| 第一章 体外受精技术的研究进展 |
| 1. 体外受精技术的研究进展 |
| 1.1 卵母细胞的体外成熟 |
| 1.2 精子体外获能和体外受精(IVF) |
| 1.3 早期胚胎的体外培养 |
| 1.4 展望 |
| 第二章 牛体外受精胚胎玻璃化冷冻保存技术的研究进展 |
| 1. 胚胎玻璃化冷冻保存技术的研究进展 |
| 1.1 胚胎玻璃化冷冻保存的意义 |
| 1.2 胚胎冷冻保存的发展概况 |
| 1.3 胚胎玻璃化冷冻保存机理 |
| 1.4 胚胎玻璃化冷冻方法 |
| 1.5 展望 |
| 试验研究 |
| 第三章 牛体外受精技术条件优化的研究 |
| 1 材料和方法 |
| 1.1 仪器设备 |
| 1.2 试剂 |
| 1.3 卵泡液的制备 |
| 1.4 卵巢与卵母细胞的采集和卵母细胞体外成熟培养 |
| 1.5 精子获能处理和卵母细胞体外受精 |
| 1.6 早期胚胎体外培养 |
| 1.7 实验设计 |
| 1.8 统计分析 |
| 2 结果与分析 |
| 2.1 精卵共培养时间对卵母细胞体外受精的影响 |
| 2.2 牛羊卵泡液对牛卵母细胞体外成熟和体外受精的影响 |
| 3 讨论 |
| 3.1 精卵共培养时间对卵母细胞体外受精的影响 |
| 3.2 卵泡液对卵母细胞体外成熟和体外受精的影响 |
| 4 结论 |
| 第四章 牛体外受精胚胎玻璃化冷冻保存的研究 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.2 方法 |
| 1.3 试验设计 |
| 1.4 统计分析 |
| 2 结果与分析 |
| 2.1 冷冻保护剂对OPS法玻璃化冷冻胚胎发育率的影响 |
| 2.2 冷冻方法对体外受精胚胎发育率的影响 |
| 2.3 冷冻载体对OPS法玻璃化冷冻胚胎发育率的影响 |
| 2.4 不同发育阶段牛体外受精胚胎的 OPS 法玻璃化冷冻 |
| 2.5 不同发育阶段体外受精胚胎的活力检测 |
| 3 讨论 |
| 3.1 冷冻保护剂对OPS法玻璃化冷冻胚胎发育率的影响 |
| 3.2 冷冻方法对体外受精胚胎发育率的影响 |
| 3.3 冷冻载体对OPS法玻璃化冷冻胚胎发育率的影响 |
| 3.4 不同发育阶段牛体外受精胚胎的OPS 法玻璃化冷冻 |
| 3.5 不同发育阶段体外受精胚胎的活力检测 |
| 4 结论 |
| 第五章 绵羊体外受精技术条件优化的研究 |
| 1 材料和方法 |
| 1.1 仪器设备 |
| 1.2 试剂 |
| 1.3 卵泡液的制备 |
| 1.4 卵巢与卵母细胞采集和卵母细胞体外成熟培养 |
| 1.5 精子获能处理和卵母细胞的体外受精 |
| 1.6 早期胚胎的体外培养 |
| 1.7 实验设计 |
| 1.8 统计分析 |
| 2 结果与分析 |
| 2.1 牛羊卵泡液对绵羊卵母细胞体外成熟和体外受精的影响 |
| 2.2 精卵共培养时间对卵母细胞体外受精的影响 |
| 2.3 精卵共培养液量对卵母细胞体外受精的影响 |
| 2.4 颗粒细胞层数对卵母细胞体外受精的影响 |
| 2.5 季节对卵母细胞体外成熟和体外受精的影响 |
| 3 讨论 |
| 3.1 卵泡液对卵母细胞体外成熟和体外受精的影响 |
| 3.2 精卵共培养时间对卵母细胞体外受精的影响 |
| 3.3 精卵共培养液量对卵母细胞体外受精的影响 |
| 3.4 颗粒细胞层数对卵母细胞体外受精的影响 |
| 3.5 季节对卵母细胞体外成熟和体外受精的影响 |
| 4 结论 |
| 参考文献 |
| 附图 |
| 致谢 |
| 作者简介 |
| 石河子大学硕士研究生学位论文导师评阅表 |
四、季节效应对绵羊体外受精的影响（论文参考文献）
- [1]奶牛种公牛培育及性别控制冷冻精液生产效率影响因素的研究[D]. 孙伟. 内蒙古大学, 2021(10)
- [2]绵羊IVF 8-细胞、16-细胞、桑椹胚阶段转录组研究[D]. 李娜. 塔里木大学, 2020(12)
- [3]Myostatin基因敲低克隆绵羊的研究[D]. 李昊. 东北林业大学, 2019(01)
- [4]不同因素对绵羊体外胚胎生产的影响[D]. 吕和. 内蒙古农业大学, 2016(02)
- [5]IGF-I和GSH对不同季节绵羊细管冻精质量的影响[D]. 唐淑红. 新疆农业大学, 2015(06)
- [6]影响绵羊卵母细胞体外成熟因素研究进展[J]. 陆会宁,齐燕姣. 黑龙江农业科学, 2013(09)
- [7]羊卵母细胞体外成熟影响因素[A]. 任立坤,刘月琴,张英杰,杨少华,王红娜. 中国畜牧兽医学会养羊学分会2012年全国养羊生产与学术研讨会议论文集, 2012
- [8]羊卵母细胞体外成熟影响因素[J]. 任立坤,刘月琴,张英杰,杨少华,王红娜. 中国草食动物科学, 2012(S1)
- [9]重离子辐射对绵羊卵母细胞体外成熟、受精及发育的影响[D]. 常卫华. 甘肃农业大学, 2011(04)
- [10]牛羊体外受精技术条件优化和牛体外受精胚胎玻璃化冷冻保存技术的研究[D]. 段明军. 石河子大学, 2008(01)