一、程氏东毕吸虫不宜定为独立种（论文文献综述）
陈佳[1]（2009）在《东毕吸虫病ELISA诊断方法的建立》文中指出东毕吸虫病（orientobilharziasis）是由多种东毕吸虫（Orientobilharzia spp.）寄生于牛、羊等动物门静脉和肠系膜静脉内而引起的一种血吸虫病。该病主要分布于亚洲和欧洲的一些国家和地区,常呈地方性流行,对畜牧业危害十分严重,同时东毕吸虫的尾蚴可以引起人的尾蚴性皮炎,严重影响人类的健康,是一种非常重要的人兽共患寄生虫病。东毕吸虫病的早期准确诊断是有效的控制该病的发生和蔓延的重要手段,传统的诊断方法主要为病原学检查和免疫学检测,如粪便水洗沉淀法、毛蚴孵化法、间接血凝试验和酶联免疫吸附试验等。然而病原检查检出率低,且虫体感染已过急性期,延误了有效治疗时间而影响了对该病的控制,免疫学检测常用抗原通常为成虫抗原和虫卵抗原,这两种抗原成分复杂、制备成本高、周期长,限制该法的广泛应用。因此,本试验拟利用分子生物学手段,对在血吸虫诊断中起重要作用的信号蛋白14-3-3基因采用RACE技术进行克隆,并制备成重组蛋白,建立间接ELISA诊断方法。本试验根据GenBankTM上发表的日本血吸虫、曼氏血吸虫和牛血吸虫信号蛋白14-3-3序列,依其保守区设计合成一对引物,以提取的东毕吸虫总RNA为模板,PT-PCR方法扩增信号蛋白14-3-3基因的中间片段,连接pMD18-T载体并转化到TG1宿主菌中,经鉴定,获得阳性克隆,并进行序列分析。根据测得的序列信息,再设计一对引物,利用5’RACE和3’RACE技术分别扩增目的基因的5’端和3’端,鉴定正确后并测序。利用分子生物学软件拼接三段序列得到全长序列信息。其次,根据东毕吸虫信号蛋白14-3-3全长cDNA序列设计两条加有EcoRⅠ、XhoⅠ酶切位点的引物,利用RT-PCR从东毕吸虫总RNA中扩增信号蛋白14-3-3全长序列,连接pMD18-T载体并转化到TG1宿主菌中,经鉴定及序列分析,获得阳性克隆。阳性质粒pMD18-T-信号蛋白14-3-3和表达载体pET-30a（+）,经EcoRⅠ、XhoⅠ双酶切后回收、连接、转化到TG1宿主菌,提取质粒,酶切鉴定正确后,阳性质粒转化到最佳宿主菌BL21（DE3）中,构建其原核重组表达载体pET-30a-信号蛋白14-3-3,经酶切鉴定和DNA序列分析证实,构建的重组质粒pET-30a-信号蛋白14-3-3中含有信号蛋白14-3-3基因,且基因序列和阅读框架均正确。将重组菌株BL21（pET-30a-信号蛋白14-3-3）按1%的量接种到含有Kan（50μg/mL）的LB液体培养基中,37℃振荡培养2.5h,然后用1mmol/L IPTG诱导4h,融合目的蛋白获得高效表达。经Western blot检测,重组菌株表达的融合蛋白能够被东毕吸虫特异性抗体所识别。以纯化的重组信号蛋白14-3-3作为抗原包被酶标板,通过对间接ELISA各反应条件的优化,确定了最佳反应条件为:最佳封闭液为5%脱脂奶粉,封闭条件为37℃1h;抗原最佳包被浓度为5.0μg/mL;抗原的最佳包被液为50mM pH9.6的碳酸盐缓冲液;最佳血清稀释液为5%脱脂奶粉,血清稀释倍数为100倍;HRP-兔抗羊IgG的最适工作浓度为1:5 000。采用已确立的间接ELISA反应条件,对105份阴性血清的检测结果进行统计学分析,确定了间接ELISA方法判定标准,即OD450值大于等于0.31为阳性,小于0.31为阴性。应用建立的间接ELISA方法对105份阴性血清和65份阳性血清（经剖检法和形态鉴定证实）的检测结果表明,ELISA方法的特异性为91.5%,敏感性为88.6%。而且与肝片吸虫、鹿前后盘吸虫、扩展莫尼茨绦虫和捻转血矛线虫阳性血清均无交叉反应。采用本研究建立的方法,对来自于不同地区的240份绵羊血清进行了检测,结果阳性率为35.3%,与省内的感染情况基本相似。
李利,邢继兰,王春仁,翟延庆,何国声[2]（2008）在《4种终末宿主土耳其斯坦东毕吸虫cox1和nad1基因的序列分析》文中研究说明收集黑龙江省大庆地区牛源、绵羊源、绒山羊源和山羊源土耳其斯坦东毕吸虫,以SDS-蛋白酶K法抽提其基因组DNA,用特异性引物通过PCR扩增土耳其斯坦东毕吸虫成虫细胞色素C氧化酶亚基1基因（cox1）和烟酰胺腺嘌呤二核苷酸脱氢酶亚基1基因（nad1）并进行测序,应用Chromas和DNAStar软件分析扩增产物的变异情况。结果表明,大庆地区4种终末宿主土耳其斯坦东毕吸虫cox1基因均为1 125 bp,nad1基因均为518 bp;且其线粒体基因存在差异,cox1的同源性为99.0%99.7%,nad1的同源性为98.3%99.4%。
李利[3]（2008）在《土耳其斯坦东毕吸虫分子种系发生的研究》文中提出土耳其斯坦东毕吸虫（Orientobilharzia turkestanicum）是寄生于牛、羊等多种动物门静脉和肠系膜静脉的一种血吸虫。它与所在属内的其它血吸虫寄生于动物导致的疾病称为东毕吸虫病（orientobilharziasis）,主要分布于亚洲和欧洲的一些国家和地区,常呈地方性流行,对畜牧业危害十分严重。近年来,土耳其斯坦东毕吸虫的研究主要集中在其形态特征描述、生活史研究及东毕吸虫病的流行病学调查、诊断、药物防治和预防措施等方面,关于其分子分类和种系发生的基础研究少见报道。核糖体DNA是细胞核内编码核糖体RNA的基因,为一类中度重复序列,以串联多拷贝的形式存在于细胞核内染色体DNA中,每个重复单位由非转录间隔区（non-transcribed spacer regions, NTS）、内部转录间隔区（internal transcribed spacer region, ITS）和3种核糖体基因编码区（18S、5.8S、28S）组成,不同区域其进化速率不同。线粒体为母系遗传,其基因间很少重组,所以可以反映出母系的进化历史,这样线粒体一个基因就可以代表整个线粒体基因组的变异情况。因此,我们以土耳其斯坦东毕吸虫核糖体内转录间隔区（ITS）序列、28S核糖体DNA大亚基序列（28S ribosomal DNA large-subunit sequences, 28S rDNA-LSU）、线粒体细胞色素c氧化酶亚基1（cytochrome c oxidase subunit 1 gene, cox1）基因和烟酰胺腺嘌呤二核苷酸脱氢酶亚基1（nicotinamide adenine dinucleotide dehydrogenase subunit 1 gene, nad1）基因为研究对象,对目的片段进行克隆和序列测定,构建分子系统发生树,探讨土耳其斯坦东毕吸虫在裂体科中的系统发生位置。从自然感染黄牛、绵羊、绒山羊和山羊的肝门静脉及肠系膜静脉内采集虫体,经形态学鉴定为土耳其斯坦东毕吸虫。以SDS-蛋白酶K法抽提不同终末宿主的土耳其斯坦东毕吸虫基因组DNA,根据GenBank上发表的土耳其斯坦东毕吸虫及相关血吸虫序列,利用Oligo6.0软件设计特异引物,PCR扩增ITS区序列、28S rDNA-LSU序列、线粒体cox1基因和nad1基因,扩增产物经纯化后克隆于pMD18-T载体,转化到JM109感受态细胞,提取质粒DNA,经PCR和双酶切鉴定后,阳性质粒测序,应用DNAStar软件比较不同终末宿主土耳其斯坦东毕吸虫核苷酸序列的同源性,并应用DNAMAN软件分析28S rDNA-LSU序列RNA二级结构的改变情况。检索GenBank,查找血吸虫相关基因序列,应用Clustal X1.83软件对相关序列进行排序,提交引导树,使用MEGA软件采用邻接法（neighbor-joining method, NJ）和最大简约法（maximum parsimony method, MP）,绘制系统发生树。序列分析结果表明,土耳其斯坦东毕吸虫核糖体ITS区序列、28S rDNA-LSU序列、线粒体cox1编码基因、nad1编码基因大小分别为874 bp,1 304 bp,1 125 bp和518 bp;不同终末宿主土耳其斯坦东毕吸虫ITS区序列、28S rDNA-LSU序列、cox1基因序列和nad1基因序列存不同程度的差异,绵羊、绒山羊和山羊源土耳其斯坦东毕吸虫28S rDNA-LSU序列RNA二级结构相同或相似,黄牛源与羊源土耳其斯坦东毕吸虫28S rDNA-LSU序列RNA二级结构存在较大差异。以肝片形吸虫作外群,基于核糖体ITS区序列、28S rDNA-LSU序列、线粒体cox1基因序列和nad1基因序列采用NJ法和MP法构建的系统发生树,其结果一致,均显示土耳其斯坦东毕吸虫的分类地位处于裂体属内,同时土耳其斯坦东毕吸虫归属非洲血吸虫种群。
艾琳,王春仁,唐剑栋,林瑞庆,朱兴全[4]（2007）在《绒山羊和绵羊源东毕吸虫ITS rDNA的PCR扩增及序列分析》文中进行了进一步梳理目的扩增绒山羊和绵羊源东毕吸虫的ITS rDNA序列并进行分析比较。方法运用PCR方法,以保守引物BD1和BD2扩增从黑龙江绒山羊和绵羊体内分离的东毕吸虫（Orientobilharzia spp.）rDNA的内转录间隔区（ITS-1及ITS-2）。PCR产物经测序后进行序列分析。结果黑龙江绒山羊和绵羊东毕吸虫的ITS序列总长均为875bp,其中ITS-1序列长为384bp,5.8S序列长为159bp,ITS-2序列长为332bp。黑龙江绒山羊和绵羊东毕吸虫的ITS序列相似性为99.9%,只有一个碱基差异,存在于ITS-2序列中。结论本研究在国际上首次报道了绒山羊和绵羊东毕吸虫的ITS序列,证实绒山羊和绵羊源东毕吸虫代表同一个种。这些结果为东毕吸虫分子生物学的进一步研究奠定了基础,并为寄生虫分子系统学研究提供了新资料。
周庆民,仇建华,曲家华,赵金萍,王春仁[5]（2006）在《齐齐哈尔市羊寄生虫感染情况调查》文中研究说明为了摸清齐齐哈尔市羊寄生虫的感染情况,给综合防治提供科学依据,作者对齐齐哈尔、富裕等8个市县的160只绵（山）羊进行了寄生虫学检查。结果共检出寄生虫27种,隶属于4门6纲19科24属,其中吸虫3种,绦虫（蚴）5种,线虫10种、蜘蛛昆虫8种、原虫1种。鹿前后盘吸虫（Paramphistomum cervi）、蛇形毛圆线虫（Tricho-strongylus colubriform is）、哥伦比亚食道口线虫（O esophagostomum colum bianum）、羊鼻蝇蛆（O estrum ovis’s larve）、捻转血矛线虫（Haem onchus contortus）、兰氏鞭虫（Trichuris lani）等6种感染率高、感染强度大、分布广,为齐齐哈尔市羊寄生虫的优势虫种。
王春仁,马桂芬,赵金萍,王忠福,刘秀利,刘薇,宫学君[6]（2005）在《黑龙江西部羊寄生虫的调查及控制技术的建立》文中研究表明黑龙江西部地区是该省主要牧业基地,羊的饲养主要集中在那里。为了摸清西部地区羊寄生虫的种类、感染率、感染强度和地理分布情况,对该地的124只羊进行了剖检,共检出寄生虫26种,隶属于4门6纲19科23属,其中吸虫3种,绦虫（蚴）5种,线虫9种、原虫1种、蜘蛛昆虫8种。蛇形毛圆线虫、鹿前后盘吸虫、哥伦比亚食道口线虫、捻转血矛线虫、土耳其斯坦东毕吸虫、艾美尔球虫、肝片吸虫等7种虫体为黑龙江西部地区羊寄生虫的优势虫种。在此基础上,建立了黑龙江西部地区羊寄生虫病的综合控制技术。
王春仁,马桂芬,王忠福,刘秀利,刘薇,翟宝库,宫学君,石阿蔷,王业玲,朱玉兰[7]（2005）在《大庆市羊寄生虫病病原学调查及综合控制技术的建立》文中指出
刘娟,李雍龙[8]（2004）在《DNA序列分析在吸虫种株基因差异研究方面的应用》文中指出近年来 ,分子生物学技术在现代寄生虫学种、株基因差异的研究中得到了广泛的应用 ,本文综述了核糖体、线粒体DNA序列分析技术在吸虫种、株基因差异研究的进展
邢继兰[9]（2004）在《土耳其斯坦东毕吸虫cDNA文库的构建及原肌球蛋白基因的克隆和表达》文中进行了进一步梳理东毕吸虫病（orientobilharziasis）是由东毕属吸虫寄生于牛、羊等多种动物的门静脉和肠系膜静脉内引起的一种血吸虫病，其尾蚴也可感染人类引起尾蚴性皮炎（cercarial dermatitis），是一种重要的人兽共患寄生虫病。我国以土耳其斯坦东毕吸虫为主，该病在我国分布广泛，常呈地方和季节性流行，严重危害人们的健康并给畜牧业带来巨大经济损失。由于东毕吸虫感染人后特殊的发育过程，从而引起了人们广泛关注。目前东毕吸虫研究相对滞后于曼氏、日本血吸虫，因此深入研究东毕吸虫就显得尤为重要。 本文利用SMART cDNA文库构建试剂盒成功构建了土耳其斯坦东毕吸虫成虫cDNA文库。采用RT-PCR结合RACE和已构建的cDNA文库克隆了土耳其斯坦东毕吸虫原肌球蛋白（tropomyosin，TM）基因，提交GenBank，登录号为AY560898。TM部分编码序列亚克隆至原核表达载体pET28a（+），重组质粒pET28-TM在大肠杆菌BL21中经IPTG诱导表达出可溶性融合蛋白，其分子量为37.5KDa左右，利用Ni-NTA亲和层析纯化目的蛋白。Western-blotting结果表明纯化蛋白可以识别自然感染东毕吸虫的山羊血清；将纯化蛋白与法国Montanide ISA 206佐剂等体积混合免疫家兔，并收集血清到免疫后第10周。Western-blotting结果表明纯化蛋白可以被特异性免疫后血清识别，表明纯化蛋白可以刺激实验兔产生抗TM抗体。ELISA结果表明抗体在第5周时达到峰值，从第7周到第10周抗体一直保持较高水平。原肌球蛋白较好的免疫原性表明其在疫苗和诊断试剂研制方面有重要的应用前景。上述结果为进一步研究东毕吸虫病的免疫提供重要的基础。
王春仁[10]（2003）在《黑龙江省牛羊东毕吸虫病综合防制技术的研究》文中研究说明东毕吸虫病（Orientobilharziasis）是由东毕属吸虫（Orientobilharzia sp.）寄生于牛、羊等动物的门静脉和肠系膜静脉引起的一种血吸虫病，主要分布于亚洲和欧洲，我国有23个省（市）自治区发生此病。关于东毕吸虫病的流行情况，印度、伊朗及我国的吉林、四川、陕西等地曾有报道，但不同的地理位置，其流行情况不同，因此本研究对黑龙江省牛、羊东毕吸虫病的流行情况进行了调查。结果表明，按照传统分类法，黑龙江省有三种东毕吸虫，即土耳其斯坦东毕吸虫（O.turkestanica）、土耳其斯坦东毕吸虫结节变种（O.turkestanica var.tuberculata）和程氏东毕吸虫（O.cheni）；中间宿主有耳萝卜螺（Radix auricularia）、卵萝卜螺（R.ovata）和小土窝螺（Galba pervia）三种；该病为黑龙江省牛、羊的主要寄生虫病，其平均感染率分别为43.97％（714／1624）和61.98％（1503／2425），齐齐哈尔地区感染最为严重，牛、羊的平均感染率分别达到62.73％（345／550）和76.93％（1017／1322）。大庆、绥化、哈尔滨、北安地区感染率也较高，佳木斯、黑河、鸡西地区属零星发生，牡丹江地区未检出。本试验对在黑龙江省牛、羊体内检出的在光镜下鉴定为土耳其斯坦东毕吸虫结节变种和程氏东毕吸虫的二种虫体进行了体表扫描电镜观察，同时与唐崇惕所作土耳其斯坦东毕吸虫体表扫描电镜结果进行了比较和分析，初步认定程氏东毕吸虫与土耳其斯坦东毕吸虫结节变种为同一种，与土耳其斯坦东毕吸虫可能是同物异名或为其亚种或地域株。 东毕吸虫病防制的关键在于早期特异性诊断和有效治疗药物的研制。本研究建立了牛、羊东毕吸虫病早期特异性诊断方法——斑点金渗滤试验（DIGFA）。结果表明，该法具有操作简单、敏感性高，特异性强及检出时间早等优点。与剖检法相比，阳性符合率为98.53％（67／68），阴性符合率为97.78％（44／45），与肝片吸虫阳性血清有2.86％（1／35）的交叉反应，与鹿前后盘吸虫、胰阔盘吸虫阳性血清未产生交叉反应；该法与ELISA一样都可在人工感染后第7天检出抗体。试验结果经X2检验，DIGFA与沉淀法和孵化法比较，差异显着（P＜0.01），与ELISA相比差异不显着（P＞0.05）；在治疗药物研制方面，本研究以吡喹酮为主要原料，经复方配合，研制出7.5％复方吡喹酮注射液。采用15mg／kg体重的剂量对绵羊进行驱虫试验，东毕吸虫的虫卵转阴率和虫卵减少率分别为85％和95.69％，与口服40mg／kg体重用药的疗效相似，节约药量62.5％，同时该药对绵羊体内的消化道线虫、莫尼茨绦虫也有很强的驱除作用，是一种高效、广谱、低毒的驱虫药。 本研究通过对黑龙江省牛、羊东毕吸虫病的流行情况、东毕吸虫虫种的分类地位、诊断方法及治疗药物的研究，基本摸清了黑龙江省牛、羊东毕吸虫的种类、感染率、感染强度、地理分布特征以及中间宿主螺的种类、消长规律和三种东毕吸虫之间的分类关系；建立了良好的诊断方法、研制了有效的治疗药物。这对控制黑龙江省东毕吸虫病，有十分重要的意义。
二、程氏东毕吸虫不宜定为独立种（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、程氏东毕吸虫不宜定为独立种（论文提纲范文）
（1）东毕吸虫病ELISA诊断方法的建立（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 第一章 绪论 |
| 1.1 东毕吸虫病研究进展 |
| 1.2 东毕吸虫分子生物学研究进展 |
| 1.3 血吸虫诊断抗原基因的研究进展 |
| 1.4 研究目的和意义 |
| 第二章 材料与方法 |
| 2.1 材料 |
| 2.2 方法 |
| 第三章 结果 |
| 3.1 信号蛋白 14-3-3 基因中间片段的克隆 |
| 3.2 东毕吸虫信号蛋白14-3-3 基因5’端和3’端的克隆 |
| 3.3 东毕吸虫信号蛋白 14-3-3 全长序列的克隆 |
| 3.4 东毕吸虫信号蛋白 14-3-3 基因的表达 |
| 3.5 临床样本检测 |
| 第四章 讨论 |
| 4.1 目的基因的选择 |
| 4.2 RACE 技术的选择 |
| 4.3 RNA 的提取 |
| 4.4 表达系统的选择 |
| 4.5 其他 |
| 4.6 ELISA 条件的摸索 |
| 4.7 ELISA 方法的临床应用 |
| 第五章 结论 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 附录 |
| 作者简历 |
（2）4种终末宿主土耳其斯坦东毕吸虫cox1和nad1基因的序列分析（论文提纲范文）
| 1 材料与方法 |
| 1.1 土耳其斯坦东毕吸虫成虫的采集 |
| 1.2 虫体基因组DNA的提取 |
| 1.3 cox1基因和nad1基因的PCR扩增 |
| 1.4 PCR产物的纯化、克隆及测序 |
| 1.5 测序结果的分析比较 |
| 2 结果 |
| 2.1 cox1基因和nad1基因的PCR扩增 |
| 2.2 土耳其斯坦东毕吸虫cox1基因和nad1基因序列的测定与分析 |
| 3 讨论 |
（3）土耳其斯坦东毕吸虫分子种系发生的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 第一章 引言 |
| 1.1 东毕吸虫与东毕吸虫病研究进展 |
| 1.2 血吸虫分类和遗传变异的研究进展 |
| 1.3 标记基因的研究进展 |
| 1.4 研究的目的和意义 |
| 第二章 材料与方法 |
| 2.1 材料 |
| 2.2 方法 |
| 第三章 结果 |
| 3.1 虫体的鉴定 |
| 3.2 土耳其斯坦东毕吸虫各基因序列PCR 扩增及阳性质粒鉴定 |
| 3.3 测序 |
| 3.4 序列分析 |
| 3.5 土耳其斯坦东毕吸虫285 RDNA-LSU 序列RNA 二级结构分析 |
| 3.6 基于土耳其斯坦东毕吸虫各基因序列构建的系统发生树 |
| 第四章 讨论 |
| 4.1 遗传标记的选择 |
| 4.2 遗传标记的序列分析 |
| 4.3 关于RNA 二级结构进行分析 |
| 4.4 关于系统发生树构建方法 |
| 4.5 土耳其斯坦东毕吸虫系统发生树 |
| 第五章 结论 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 附录一 |
| 附录二 |
| 个人简历 |
（5）齐齐哈尔市羊寄生虫感染情况调查（论文提纲范文）
| 1 材料与方法 |
| 1.1 地理位置 |
| 1.2 动物的选择 |
| 1.3 试验方法 |
| 1.3.1 体外寄生虫的检查 |
| 1.3.2 原虫的检查 |
| 1.3.3 体内寄生虫的采集、保存、标本制作及鉴定 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
（8）DNA序列分析在吸虫种株基因差异研究方面的应用（论文提纲范文）
| 1 核糖体DNA的研究 |
| 1.1 核糖体DNA转录区的研究 |
| 1.2 核糖体DNA非转录区的研究 |
| 2 线粒体DNA的研究 |
| 2.1 线粒体基因细胞色素C氧化酶亚基Ⅰ (COⅠ) 的研究 |
| 2.2 线粒体基因NADH脱氢酶1 (ND1) 的研究 |
| 3 结 语 |
（9）土耳其斯坦东毕吸虫cDNA文库的构建及原肌球蛋白基因的克隆和表达（论文提纲范文）
| 摘要 |
| 英文摘要 |
| 前言 |
| 1 东毕吸虫和东毕吸虫概述 |
| 2 东毕吸虫病的诊断和防治 |
| 3 东毕吸虫分子生物学方面的研究 |
| 第一部分 土耳其斯坦东毕吸虫cDNA文库的构建 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 实验材料 |
| 1.2 主要试剂 |
| 1.3 主要工具酶 |
| 1.4 主要溶液的配制 |
| 1.5 主要仪器 |
| 1.6 实验方法 |
| 2 结果 |
| 2.1 总RNA的提取 |
| 2.2 双链cDNA鉴定结果 |
| 2.3 文库重组率的PCR鉴定结果 |
| 3 结论 |
| 第二部分 土耳其斯坦东毕吸虫原肌球蛋白基因的克隆与表达 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 2.1 总RNA的提取 |
| 2.2 反转录(RT) |
| 2.3 原肌球蛋白基因(tropomyosin，TM)中间大片段的克隆 |
| 2.4 用5’-RACE(Rapid amplify cDNA end)克隆TM基因的5’端序列 |
| 2.5 TM基因的3’端克隆 |
| 2.6 TM基因全序列的拼接 |
| 2.7 TM中间大片段的原核表达和动物免疫研究 |
| 3 结果 |
| 3.1 原肌球蛋白基因TM中间大片段的克隆 |
| 3.2 重组质粒pGEM-TM和pET28-TM的鉴定 |
| 3.3 TM基因3’端序列克隆 |
| 3.4 5’RACE克隆TM基因的5’端序列 |
| 3.5 TM全长基因的拼接 |
| 3.6 重组菌pET28-TM／BL21的诱导表达和纯化 |
| 3.7 蛋白的纯化 |
| 3.8 纯化的目的蛋白Western-blotting检测 |
| 3.9 琼脂糖凝胶扩散试验 |
| 3.10 原肌球蛋白抗体的消长规律初步研究 |
| 4 结论 |
| 全文讨论 |
| 1 关于cDNA文库构建 |
| 2 关于原肌球蛋白全长基因的克隆和表达 |
| 3 关于纯化的TM蛋白的免疫和抗体消长规律的初探 |
| 全文小结 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 1 cDNA文库构建的原理和流程 |
| 2 TM基因克隆和表达的技术路线图 |
| 3 pGEM-T easy vector图谱 |
| 4 pET28a(+)表达载体图谱 |
| 致谢 |
| 作者简历 |
（10）黑龙江省牛羊东毕吸虫病综合防制技术的研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 1 引言 |
| 1.1 项目研究的目的和意义 |
| 1.2 东毕吸虫及东毕吸虫病研究进展 |
| 1.2.1 东毕属的建立与分类 |
| 1.2.2 东毕吸虫病的流行病学 |
| 1.2.3 东毕吸虫病的免疫诊断 |
| 1.2.4 东毕吸虫病的治疗 |
| 1.3 亟待解决的问题 |
| 1.3.1 东毕属吸虫的分类问题 |
| 1.3.2 东毕吸虫病免疫诊断抗原问题 |
| 1.3.3 东毕吸虫病的治疗问题 |
| 1.4 本研究课题的来源及主要研究内容 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 主要仪器和试剂 |
| 2.2 黑龙江省东毕吸虫中间宿主调查 |
| 2.3 黑龙江省牛羊东毕吸虫种类调查 |
| 2.3.1 光镜形态学观察 |
| 2.3.2 成虫体表扫描电镜观察 |
| 2.4 黑龙江省牛羊东毕吸虫病感染情况与地理分布特征 |
| 2.4.1 水洗沉淀法和毛蚴孵化法 |
| 2.4.2 局部蠕虫剖检法 |
| 2.4.3 斑点免疫金渗滤试验 |
| 2.5 东毕吸虫病的诊断 |
| 2.5.1 DIGFA方法的建立 |
| 2.5.2 DIGFA准确性和特异性试验 |
| 2.5.3 DIGFA敏感性检查 |
| 2.5.4 DIGFA重复性检查 |
| 2.5.5 DIGFA稳定性检查 |
| 2.5.6 DIGFA与其它诊断法的比较 |
| 2.6 东毕吸虫病治疗药物的研制与药效试验 |
| 2.6.1 复方吡喹酮注射液的研制 |
| 2.6.2 复方吡喹酮注射液的检测 |
| 2.6.3 复方吡喹酮注射液安全性试验 |
| 2.6.4 复方吡喹酮注射液对羊东毕吸虫及其它寄生虫的驱杀试验 |
| 3 结果 |
| 3.1 中间宿主 |
| 3.2 东毕吸虫种类 |
| 3.3 牛羊东毕吸虫感染情况及地理分布 |
| 3.4 DIGFA诊断结果 |
| 3.5 东毕吸虫病治疗药物的研制与药物试验结果 |
| 4 讨论 |
| 4.1 关于东毕属三种吸虫的分类地位 |
| 4.2 东毕吸虫病在黑龙江省的流行情况 |
| 4.3 关于东毕吸虫的中间宿主 |
| 4.4 关于诊断方法 |
| 4.5 关于治疗药物 |
| 5 结论 |
| 参考文献 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
四、程氏东毕吸虫不宜定为独立种（论文参考文献）
- [1]东毕吸虫病ELISA诊断方法的建立[D]. 陈佳. 黑龙江八一农垦大学, 2009(S2)
- [2]4种终末宿主土耳其斯坦东毕吸虫cox1和nad1基因的序列分析[J]. 李利,邢继兰,王春仁,翟延庆,何国声. 中国兽医科学, 2008(04)
- [3]土耳其斯坦东毕吸虫分子种系发生的研究[D]. 李利. 黑龙江八一农垦大学, 2008(09)
- [4]绒山羊和绵羊源东毕吸虫ITS rDNA的PCR扩增及序列分析[J]. 艾琳,王春仁,唐剑栋,林瑞庆,朱兴全. 热带医学杂志, 2007(03)
- [5]齐齐哈尔市羊寄生虫感染情况调查[J]. 周庆民,仇建华,曲家华,赵金萍,王春仁. 中国兽医寄生虫病, 2006(04)
- [6]黑龙江西部羊寄生虫的调查及控制技术的建立[J]. 王春仁,马桂芬,赵金萍,王忠福,刘秀利,刘薇,宫学君. 黑龙江八一农垦大学学报, 2005(04)
- [7]大庆市羊寄生虫病病原学调查及综合控制技术的建立[J]. 王春仁,马桂芬,王忠福,刘秀利,刘薇,翟宝库,宫学君,石阿蔷,王业玲,朱玉兰. 黑龙江畜牧兽医, 2005(08)
- [8]DNA序列分析在吸虫种株基因差异研究方面的应用[J]. 刘娟,李雍龙. 国外医学(寄生虫病分册), 2004(03)
- [9]土耳其斯坦东毕吸虫cDNA文库的构建及原肌球蛋白基因的克隆和表达[D]. 邢继兰. 中国农业科学院, 2004(04)
- [10]黑龙江省牛羊东毕吸虫病综合防制技术的研究[D]. 王春仁. 东北农业大学, 2003(03)