一、添加不同发情时期山羊血清对牛胚胎体外发育的影响（论文文献综述）
黄飞,赵建清,陶维昆,刘波,朱文靓,方翟,高庆华[1]（2021）在《绵羊ICSI胚胎培养液中发情绵羊血清浓度优化研究》文中进行了进一步梳理在胚胎培养液中添加适量的发情绵羊血清（ESS）有利于提高胞浆内单精子注射（ICSI）胚胎后期的发育潜力。为了探讨在ICSI胚胎培养液中添加不同浓度的ESS对绵羊ICSI胚胎桑椹胚率的影响及其最优的ESS浓度,本试验采用ICSI技术得到ICSI胚胎,然后在ICSI胚胎培养液中添加不同浓度的ESS（A组0%、B组5%、C组10%、D组15%及E组20%）,进行ICSI胚胎的体外培养。结果表明:在ICSI胚胎培养液中添加10%的ESS,ICSI胚胎的桑椹胚率为23.78%,显着高于A组（11.47%）、B组（17.87%）、D组（16.77%）、E组（12.86%）（P<0.05）。说明在ICSI胚胎培养液中添加10%ESS能显着提升绵羊ICSI胚胎的桑椹胚率。
彭巍[2]（2019）在《牦牛冷暖季卵巢差异分析及添加褪黑素对牦牛卵母细胞体外成熟、胚胎体外发育的影响》文中研究指明(1)试验利用组织学和转录组学技术,对在暖季（W-yak）和冷季（C-yak）的牦牛卵巢状态变化进行研究。收集的卵巢样品分为W-yak和C-yak两组,分别测定其黄体数量、卵泡发育和RNA-Seq分析。结果表明:（1）W-yak牦牛黄体数量明显高于C-yak（P<0.05）,其中8月和9月的牦牛排卵最为集中;（2）C-yak（11月）卵巢中卵泡发育过程中断,与W-yak（7月）相比,这是由于窦卵泡的异常积聚所导致;（3）多囊泡现象代表C-yak卵巢窦卵泡内颗粒细胞功能紊乱;（4）RNA-seq数据显示,如FST,CYP1A1,GNAI2和PI3K等雌激素分泌和代谢信号通路在C-yak卵巢中是紊乱的,本研究获得W-yak和C-yak之间卵巢形态变化和不同基因表达,并提供了与卵巢状态相关的试验数据。卵巢功能的这些重要变化与繁殖能力紧密相关。结果表明季节和气候变化不利于雌性生殖健康,并为长期营养缺乏和低温胁迫下可能导致卵巢功能障碍提供理论依据。（2）研究在卵母细胞成熟和/或胚胎培养液中添加不同浓度的褪黑素对牦牛卵母细胞体外成熟和胚胎体外发育的影响;结果表明,在试验1中,与对照组相比,IVC+10-9组和IVC+10-11组,卵母细胞成熟率显着提高（67.9%vs 82.4%,78.4%）,囊胚率形成显着提高（36.8%,34.4%vs 26.3%）,成熟卵母细胞降低ROS水平、细胞凋亡率和纺锤体错位与染色体异常的发生率,提高线粒体膜电位;在试验2中,在胚胎体外培养中,与对照组相比,IVC+10-9组和IVC+10-11组囊胚率显着提高（26.3%vs 35.4%,31.8%）。此外,与对照组相比,在IVC+10-9组中观察到囊胚中凋亡细胞的数量和百分比降低（6.9±0.6;5.5%vs 3.5±0.4;3.0%）。在试验3中,IVC+10-9组减少囊胚凋亡细胞数,抗氧化基因（SOD2）和热休克蛋白（HSPB1）mRNA表达量升高,促凋亡基因p53、Bax和capase-3的表达量降低,抗凋亡基因BCL2L1、Survivin的表达水平显着高于对照组;与IVM+10-9相比,IVM/IVC+10-9处理组的活性氧物质产量升高。总之,添加10-9M浓度的褪黑素在牦牛胚胎体外生产阶段直接影响胚胎发育能力和质量。（3）褪黑素作为一种抗氧化剂在多种细胞中扮演着重要的角色,保护细胞内的分子免受氧化应激,褪黑素在牦牛胚胎中的抗氧化作用机制尚不清楚。在H2O2氧化应激下,通过对牦牛胚胎培养过程中添加不同浓度的褪黑素,考察牦牛胚胎发育过程中卵裂及囊胚形成的影响,并通过检测受精卵内活性氧水平、线粒体膜电位、抗氧化酶活性、细胞数量及内细胞团（ICM）/细胞总数（TCN）的比值等指标,考察褪黑素在牦牛胚胎中的抗氧化作用机制,结果表明,牦牛受精卵暴露于褪黑素的环境下,保护牦牛胚胎发育免受过氧化氢（H2O2）诱导的氧化应激损伤,保持受精卵线粒体功能稳定,T-AOC、GSH-Px、CAT活性升高,降低了H2O2诱导的细胞内ROS水平,进一步证明褪黑素通过保存抗氧化酶来保护着床前胚胎免受氧化损伤。这些结果共同证实了褪黑素对牦牛胚胎发育过程中的抗氧化作用,显着提高了牦牛胚胎体外生产中囊胚的数量和质量。（4）褪黑素减少了牦牛SCNT胚胎的细胞凋亡和ROS水平,增加了细胞数量,ICM细胞数量,以及ICM与TCN的比例;基因表达分析表明,褪黑素抑制促凋亡基因p53和Bax的表达,并刺激SCNT囊胚中抗氧化基因SOD2和Gpx4,抗凋亡基因BCL2L1和多能性相关基因SOX2的表达。在囊胚期添加褪黑素,SCNT-T组胚胎的全基因组H3K9ac水平高于SCNT组胚胎。结论,外源性褪黑素可以影响与细胞凋亡,抗氧化功能和发育相关的基因的表达,减少牦牛SCNT胚胎的细胞凋亡和ROS水平,提高胚泡质量,从而最终提高牦牛的克隆效率。（5）探讨褪黑素处理成纤维细胞后,将其作为供体细胞对牦牛体细胞核移植隆牦牛胚胎体外发育能力和质量的影响。在10-9 M褪黑素浓度下,显着增强成纤维细胞（PFF）的增殖,供体细胞甲基化水平H3K9me3、H3K9me2、和H3K18ac显着升高,促凋亡基因p53、Bax的表达水平明显降低,抗凋亡基因BCL2L1的表达水平明显增加,并且在10-9 M褪黑素处理的供体细胞组中囊胚率显着增加,细胞总数和ICM细胞数以及囊胚的ICM:TCN的比率显着提高;降低囊胚期胚胎凋亡细胞的发生率和细胞内ROS水平,提高的全基因组H3K9ac和H3K18ac乙酰化水平;囊胚中发育相关基因OCT4和多能性相关基因SOX2,抗氧化基因SOD2、Gpx4和热应激蛋白HSPB1的表达水平在SCNT-T组中显着上调,促凋亡基因p53和Bax的表达水平显着低于SCNT组,抗凋亡基因BCL2L1和Survivin表达水平显着高于对照组和SCNT组。本研究确定了供体细胞的经褪黑素处理可以促进牦牛克隆胚胎的发育。10-99 M褪黑素的最佳浓度处理的重构胚,可以增强牦牛SCNT囊胚的形成和改善胚胎质量。
王士勇[3]（2014）在《梅花鹿、水貂、蓝狐及貉—牛异种体细胞核移植技术研究》文中认为为了探索梅花鹿-牛异种体细胞核移植技术，为梅花鹿胚胎工程研究奠定技术基础，本论文对其供核细胞的培养和冷冻保存、受体卵母细胞的体外成熟、显微操作、重组胚胎外培养等技术环节进行了探索研究，并在水貂、蓝狐和貉等毛皮动物上验证了建立的异种体细胞核移植技术体系。主要内容如下：（1）梅花鹿、水貂、蓝狐和貉耳皮肤成纤维细胞（Ear Skin Fibriblasts，ESF）经组织块法原代培养，利用酶消化时间差与贴壁时间差法处理3～5次纯化，结果显示细胞生长特点为贴壁生长、呈梭形、具伪足，F5代细胞生长曲线呈“潜伏期-对数生长期-停滞期”的模式。DMSO作为抗冻保护剂时，梅花鹿、水貂、蓝狐和貉ESF解冻复苏后复苏率分别为89.64%、92.44、91.24和91.04，显着高于甘油作为抗冻保护剂。结论：梅花鹿、水貂、蓝狐和貉ESF具有典型的皮肤成纤维细胞生长特点，通过酶消化时间与贴壁时间差的方法对其纯化可行，冷冻保存时可采用10%DMSO作为抗冻保护剂。（2）牛卵丘-卵母细胞复合体（Cumulus Oocyte Complexes，COCs）经22h体外成熟培养之后，LH+FSH和PMSG+HCG组成熟率分别为79.1%和75.2%，差异不显着，但是两组成熟率均显着高于对照组；牛COCs经（Brilliant Cresyl Blue, BCB）染色染色90min后卵母细胞着色率为68.1%，显着高于30、60min组，辨识难度为“中”；牛COCs经39μM的BCB染色后，着色率为64.5%，显着高于13μM组的29.3%；BCB+组和BCB-组的成熟率与对照组比较差异均不显着；在体外成熟培养液中添加50ng/mL表皮生长因子（Epidermal Growth Factor，EGF）后培养牛的COCs，22h后成熟率为77.4%，显着高于0、10、20ng/mL组。结论：在牛卵母细胞体外成熟培养液中添加国产激素10IU/mL PMSG、15IU/mL HCG和50ng/mL的EGF能显着提高其体外成熟率；BCB法筛选优质卵母细胞在本试验体系下不适用。（3）牛COCs经体外成熟20、21、22h后，0.4μg/mL脱羰秋水仙碱（Demecolcine，DEME）诱导显核率分别为61.0%、65.3%和66.7%，差异不显着；经0.4μg/mL DEME处理60、120min后，显核率分别为70.0%和71.9%，显着高于30min组；经0.5μg/mL DEME处理60min之后，显核率为78.9%，显着高于0.3、0.4μg/mL组；DEME辅助法的去核率为100.0%，显着高于挤压法和盲吸法，三种去核方法的去核时间差异不显着；带下注核与全细胞胞质内注核的成功率分别为100%和94.8%，注核时间分别为31.0s和35.1s，与破膜后胞质内注核比较差异均显着；一步操作和两步操作的相同注核方法处理组之间在激活率、卵裂率和囊胚率方面均无显着差异；0、0.25、0.50和1.00μM白藜芦醇对梅花鹿-牛ISCNT胚胎卵裂率没有显着影响，0.50和1.00μM组囊胚发育率分别为38.0%和36.7%，显着高于0、0.25μM组；梅花鹿-牛ISCNT胚胎用体细胞共培养时，水貂ESF组的卵裂率为55.7%，显着高于对照组，牛卵丘细胞组囊胚发育率为59.4%，显着高于对照组和其他两组。结论：梅花鹿-牛ISCNT研究可采用下面的技术程序：牛卵母细胞经IVM20～22h后，用0.5μg/mL DEME处理60min诱导显核，Pizeo辅助破膜胞质内注核的一步显微操作核移植，激活后的重组胚用牛卵丘细胞共培养。（4）采用Pizeo辅助全细胞胞质内注核的方法构建毛皮动物-牛ISCNT胚胎时，水貂、蓝狐和貉ESF作为供核细胞，在注核成功率、卵裂率和囊胚率之间差异不显着；牛卵丘细胞作为共培养细胞时，水貂、蓝狐、貉-牛ISCNT胚胎的囊胚率分别为43.6%、40.1%和42.1%，均显着高于对照组。结论：梅花鹿-牛ISCNT技术程序同样适用于水貂、蓝狐和貉等三种毛皮动物与牛的ISCNT。
李佳佳,马利兵,籍凤宇,陈秀莉[4]（2012）在《发情牛血清对绵羊卵母细胞体外成熟及孤雌胚发育的影响》文中指出在动物卵母细胞体外成熟及胚胎体外培养体系中添加一定浓度的发情牛血清可能提高卵母细胞的成熟率及胚胎的发育率。本研究以屠宰场卵巢来源的绵羊卵母细胞为试验材料,探讨了发情牛血清对绵羊卵母细胞体外成熟及孤雌胚发育的影响。结果表明,成熟液中添加10%第1天的发情牛血清能显着提高绵羊卵母细胞的体外成熟率及孤雌胚卵裂率（P<0.05）;孤雌胚体外培养72h后,向培养液中添加10%第7天的发情牛血清能显着提高绵羊孤雌胚的桑囊胚率（P<0.05）。结果表明,发情牛血清能够促进绵羊卵母细胞的体外成熟率及孤雌胚发育率。
权富生,刘琴,王丽君,马会明,王勇胜,张涌[5]（2011）在《β-巯基乙醇和发情羊血清对牛颗粒细胞体外培养的影响》文中指出为满足实验室卵母细胞体外成熟共培养和胚胎共培养的需要以及进行卵巢颗粒细胞生物学功能等研究的需要,进行牛卵巢颗粒细胞的体外培养研究。在基础培养液TCM199中分别添加12.5、25、50、100、200μmol/L的β-巯基乙醇（BME）,观察颗粒细胞生长状况;在基础培养液中分别添加体积分数为10%的发情山羊第1天血清、体积分数为10%的发情山羊第11天血清和体积分数为10%的胎牛血清,观察颗粒细胞生长和增殖情况。体外培养颗粒细胞的活细胞率随着添加BME浓度的增大而增加,在25μmol/L时达到最高,此后随浓度的增大而降低;发情山羊第1天的血清组中,颗粒细胞生长和增殖情况最好。BME可以提高颗粒细胞体外培养的活率,最佳添加浓度为25μmol/L;发情山羊第1天的血清可有效促进颗粒细胞体外培养生长和增殖。
彭辉[6]（2008）在《黄牛孤雌胚胎体外培养体系的优化及体细胞核移植胚构建初探》文中研究指明本试验通过在成熟基础液中添加不同浓度的HMG（人尿促性素）和ITS（胰岛素-转铁蛋白-硒酸钠）以观察对黄牛卵母细胞体外成熟率的影响,分析了卵巢运输过程中保存温度和时间及卵巢所处性周期阶段与黄牛卵母细胞体外成熟及孤雌胚胎体外发育的关系;探讨了培养过程中培养微滴大小、每次换液量、添加血清是否灭活及血清添加时间和添加浓度对黄牛孤雌胚胎体外发育潜力的影响,并比较了4种培养液的培养效果;研究了有无颗粒细胞单层、不同类型及种属的颗粒细胞单层、颗粒细胞单层体外培养时间及在不同时间更换培养单层对黄牛孤雌胚胎体外发育的影响,旨在优化黄牛孤雌胚胎体外培养体系;对以黄牛颗粒细胞为核供体,去核卵母细胞为核受体构建核移植胚胎进行了初步探讨。结果如下:1.在成熟基础液中添加0.05IU/mL和0.1IU/mL的HMG卵母细胞成熟率极显着高于0.025 IU/mL组（71.26%,74.30%/31.52%;P<0.01）;而添加10μL/mL ITS则对卵母细胞体外成熟率和卵裂率影响不大（71.52%/69.47%;84.96%/ 82.42%）,但可以提高卵母细胞孤雌激活后的囊胚发育率（41.67%/32.0%）;就卵母细胞成熟率和囊胚率而言,卵巢置于20～29℃保存（61.11%/33.33%）与10～19℃（41.18%/17.65%）和30～39℃保存（71.34%/41.84%）无显着差异（P>0.05）,但后两组之间差异显着（P<0.05）;30～39℃中保存1～3h抽出的卵母细胞较保存8～10h抽出的卵母细胞有较高的成熟率、卵裂率和囊胚发育率（68.57%/32.29%,86.11%/25.81%,40.32%/0;P<0.05）;黄体期无黄体组与有黄体组均低于卵泡期卵母细胞的体外成熟率、卵裂率和囊胚发育率,但差异不显着（P>0.05）。2.与50μL组和200μL组相比,黄牛孤雌胚胎体外培养在100μL微滴中可以获得较高的囊胚率,3组之间无显着差异（43.20%/31.34%/38.82%） （P>0.05）;每次更换培养液体积的1/2组比每次更换1/4组和3/4组更有利于黄牛孤雌胚胎的体外发育,就囊胚率而言有显着差异（41.84%/26.39%/25.71%）（P<0.05）;添加的血清是否进行灭活对牛孤雌胚胎体外发育的影响不大,未灭活组的囊胚率和孵出囊胚率（40.23%/57.14%）略优于灭活组（38.95%/51.35%）。在黄牛卵母细胞孤雌激活后的第3d添加血清可得到较高的囊胚率和孵出囊胚率（46.55%/53.70%）,而以孤雌激活后的第3d添加10%FBS囊胚发育率最高（45.97%）;综合卵裂率和囊胚发育率,对4种培养液比较后认为黄牛孤雌胚胎的体外培养液应首选SOFaa。3 .孤雌胚胎体外培养时有颗粒细胞单层组的卵裂率、囊胚率和孵出囊胚率（85.10%/41.81%/52.70%）较对照组（66.13%/7.32%/0%）均差异显着（P<0.05）;壁颗粒细胞和丘颗粒细胞单层均能较好地支持黄牛孤雌胚胎的体外发育,其卵裂率、囊胚率和孵出囊胚率分别为86.11%/ 83.72%、40.32% /41.67%、52. 0% /53.33%,无显着差异（P>0.05）;来自黄牛、猪和小鼠的颗粒细胞单层在支持黄牛孤雌胚胎体外发育方面无种属特异性,其卵裂率、囊胚率和孵出囊胚率分别为83.42% / 85.16% / 82.58%、42.17% / 41.67% / 39.45%、54.29% / 52.73% / 48.84%,3组之间无显着差异（P>0.05）;将培养2d和4d后的颗粒细胞单层分别用于胚胎的体外共培养,其卵裂率和囊胚发育率与对照组相比差异不显着（P>0.05）,但4d组与对照组之间差异显着（P<0.05）,3组在孵出囊胚率方面均无显着差异（P>0.05）;就囊胚发育率而言,共培养的第3/6d两次更换单层与共培养的第4d更换单层和始终不更换单层的对照组相比无显着差异（P>0.05）,但第4d更换单层与对照组相比差异显着（P<0.05）,3组在孵出囊胚率方面差异不显着（P>0.05）。4.将卵母细胞在体外成熟培养17～19h、19～21h和21～23h后分别进行去核并构建核移植胚胎,3组的卵裂率和囊胚率无显着差异（P>0.05）,17～19h组和19～21h组的去核率高于21～23h组且差异显着（P<0.05）,而19～21h组的囊胚发育率优于其它两组;卵母细胞体外成熟培养19～21h后去核并构建核移植胚胎,经体外培养1～3h、3～5h和5～7h后再进行激活,结果表明核移植胚胎在体外培养3～5h进行化学激活可以得到较高的卵裂率（75.0%）和囊胚发育率（11.46%）。
胡林勇[7]（2008）在《牛体外受精技术体系的优化研究》文中研究说明自1982年第一头牛体外受精后代出生以来,虽然国内外学者对牛的体外受精（in vitro fertilization,IVF）技术进行了不断的完善,但是目前对于一些因素对IVF效率的影响还存争议。因此,有必要对牛的IVF体系进行优化研究。这不仅有助于进一步明确这些因素对IVF的影响,而且对于提高IVF胚胎生产效率及加速IVF技术在生产上的推广应用都有重要的意义。本研究在目前国内外体外受精研究的基础上,对牛卵母细胞体外成熟（in vitro maturation,IVM）、IVF及早期胚胎的体外培养（in vitro culture,IVC）作了进一步的优化研究,并重点研究了葡萄糖对牛IVF及早期胚胎体外培养的影响。旨在建立一套经过优化的牛IVF技术体系。1.在卵母细胞体外培养中,比较了不同蛋白质添加物（胎牛血清,fetal bovine serum,FBS;新生牛血清,newborn calf serum,NCS;牛血清白蛋白,bovine serum albumin,BSA）以及表皮生长因子（epidermal growth factor,EGF）对卵母细胞IVM的影响。结果表明,与BSA相比,血清可以显着促进卵母细胞的成熟,而FBS对成熟效果要好于NCS。EGF添加量在20 ng/mL时即明显促进卵母细胞的成熟率,随着其浓度的增加,卵母细胞成熟率并未相应增加。2.在精子获能和受精中,不同公牛个体对体外受精卵裂率、8-细胞胚胎发育率及囊胚率均有明显影响,就体外受精卵裂率来讲,2号牛（62.3%）和3号牛（67.4%）显着高于5号牛（35.8%, P<0.01）。精子获能液中肝素的添加剂量对体外受精的影响仅表现在卵裂率的差异,50 ng/mL组的卵裂率（71.3%）显着高于10 ng/mL组（62.1%, P<0.05）。就卵裂率及囊胚率来讲,获能液和受精液中的葡萄糖添加与否对IVF无明显影响。3.受精卵体外培养时,无论在开始进行胚胎培养时就加入葡萄糖,还是先在不含葡萄糖的培养液中培养48 h后添加葡萄糖,5.6 mmol/L组的囊胚发育率均明显低于其他各组。这表明,在体外高浓度的葡萄糖会抑制牛IVF胚胎的体外发育。在培养开始时即加入3.0 mmol/L葡萄糖时,其8-细胞胚胎发育率低于不添加葡萄糖组（50.9% vs 60.6%, P<0.05）;而在培养48 h后加入3.0 mmol/L葡萄糖时,其8-细胞胚胎与不添加葡萄糖组无明显差异（59.8%, 59.3%, P>0.05）,这提示葡萄糖对胚胎发育的影响与其添加时期有关。在以FBS为蛋白质添加物时,添加1.5 mmol/L葡萄糖与否并未显着影响IVF胚胎的囊胚发育率;而在以BSA为蛋白质添加物时,添加1.5 mmol/L葡萄糖却明显促进了IVF胚胎的囊胚发育率（23.1% vs. 17.3%, P<0.05）。这说明葡萄糖对IVF胚胎体外发育的影响还与蛋白质添加物有关。另外,在培养液中添加1.5 mmol/L葡萄糖时,以FBS为蛋白质添加物组的囊胚发育率显着高于以BSA作为蛋白质添加物组（37.8% vs 23.1%,P<0.05）。这进一步说明FBS可以提高牛IVF体系的胚胎生产效率,在牛IVF体系中具有重要作用。
宋继梅[8]（2007）在《东北虎体细胞异种核移植》文中指出1.本研究用两种不同的组织块培养法进行了东北虎体细胞的原代培养,并比较了不同培养基、不同血清浓度及不同浓度的表皮生长因子（EGF）和胰岛素（insulin）对第7代东北虎皮肤成纤维细胞生长的影响,结果表明,用组织块培养法、冷消化过夜后组织块培养法,均能成功地进行东北虎皮肤成纤维细胞的原代培养;培养基DMEM/F-12及以DMEM/F-12为基础培养基添加20% （V/V）FBS更适于东北虎皮肤成纤维细胞的培养;以含10% FBS的DMEM/F-12为基础培养基添加1ng/mL EGF、10ng/mL EGF均能显着促进细胞生长,而添加5μg/mL、50μg/mL insulin对细胞生长无促进作用。2.用组织块直接培养法和冷消化过夜处理后组织块培养法,均能成功地分离培养东北虎耳皮肤成纤维细胞。培养的细胞具有正常的成纤维细胞形态和正常的生长曲线及染色体数目;通过流式细胞仪检测细胞周期发现,随着汇合程度的增加,G0/G1期细胞所占的比例也升高。40%～50%与80%～90%、95%～100%汇合程度的细胞间G0/G1期和S期所占比例显着差异;80%～90%与95%～100%两汇合程度的细胞间G0/G1期和S期所占比例差异不显着。对相同汇合度（80%～90%）的细胞进行0.5%血清饥饿处理组与未处理组比较,饥饿处理组G0/G1期细胞比例略高,但差异不显着。95%～100%汇合组G0/G1期细胞比例稍高于饥饿组,但差异不显着。所以在核移植中,供体细胞不必进行常规血清饥饿处理,当细胞达到80%～90%以上汇合时,单就G0/G1期细胞比例而言,血清饥饿处理完全可以由接触抑制来代替。3.在基础成熟液中,添加20%（V/V）发情当天、3天牛血清（OCSD0、OCSD3）能显着提高牛卵母细胞的成熟率;添加20%（V/V）发情第5天、7天牛血清（OCSD5、OCSD7）与对照组（添加20%FBS）相比无显着差异。添加30ng/mL EGF、50μg/mL insulin及50μg/mL insulin+30ng/mL EGF,与对照组相比,30ng/mL EGF组极显着地提高了牛卵母细胞成熟率,而添加50μg/mL insulin及50μg/mL insulin+30ng/mL EGF组牛卵母细胞成熟率稍低于对照组,但差异不显着。添加0.1μg/mL孕酮,成熟率显着降低;添加有溶血和无溶血的OCSD3,无溶血组显着提高牛卵母细胞成熟率,溶血组则显着降低。4.用离子酶素联合6D激活牛卵母细胞,卵裂率和囊胚率分别为79%和20%以上,可以满足体细胞核移植的需要。用7%乙醇、7%乙醇联合6D及用离子酶素联合6D激活兔卵母细胞其卵裂率分别为75.6%、76.3%、77.8%;囊胚率分别为18.4%、14.3%、18.6%,差异均不显着,三种方法都可有效地激活兔卵母细胞。5.本研究比较了在成熟液中添加发情当天的牛血清（OCSD0）、在胚胎培养液中添加EGF、insulin及孕酮、不同时期的发情牛血清对孤雌激活胚胎发育潜力的影响。结果显示,成熟培养液中添加OCSD0与FBS组相比,囊胚发育率无显着差异;培养液中添加EGF、insulin、孕酮与对照组相比,卵裂率和囊胚发育率均有显着提高。其中,添加孕酮组,卵裂率最高,为87.9%;添加insulin组,囊胚发育率最高,为61.3%。培养液中添加不同时期发情牛血清与对照组相比,卵裂率无显着差异,发情当天、3天、5天、7天牛血清组囊胚发育率显着高于对照组,7天组为最高,为65.8%。6.分别以处于40%～50%汇合、80%～90%汇合、95%～100%汇合及经0.5%的血清饥饿3天处理的东北虎皮肤成纤维细胞（80%～90%汇合）为供体细胞时,四组的重组胚卵裂率、囊胚发育率均无显着差异, 95%～100%汇合组,卵裂率和囊胚发育率均稍高于其它各组。在比较注核与重组胚激活的不同时间间隔（0.5h、1h、2h、3h）对重构胚卵裂和囊胚发育的影响时,结果发现,重组胚激活前供体细胞在受体卵母细胞胞质内停留的时间越长,重组胚的卵裂率越高;而囊胚发育率则均无显着差异,但随着间隔时间的延长,囊胚发育率有增加的趋势。表明在核移植时,延长核质相互作用时间,可以提高重组胚的卵裂率和囊胚发育率。7.用培养的东北虎皮肤成纤维细胞以每次1×106细胞/只的量腹腔注射免疫小鼠,每2周1次,共免疫2次。4周后尾静脉采血分离血清,测定效价为1:256。早期传代东北虎成纤维细胞及对照牛成纤维细胞以免疫血清为一抗,荧光标记兔抗鼠IgG为二抗,原位染色,荧光显微镜观察,结果显示免疫血清对东北虎皮肤成纤维细胞具有特异性,而牛成纤维细胞无特异性反应。东北虎成纤维细胞免疫小鼠血清作为一抗,荧光标记兔抗鼠IgG为二抗,进行荧光染色,检测不同时期重组克隆胚表面抗原,结果显示,桑葚胚之前着色不明显,桑葚胚以后着色明显,而对照成熟牛卵母细胞则染色不明显,说明供体东北虎体细胞表面抗原在重组胚细胞中表达,重组胚中遗传物质来自供体东北虎皮肤成纤维细胞。8.采用生物软件DNASTAR分析牛东北虎线粒体基因组,利用PCR反应延伸过程中,3′端碱基不配对,PCR反应不能启动的PCR原理,以牛虎线粒体基因组中碱基差异较大的位点作为引物的3′端来设计引物,进行PCR扩增,从而分析牛-虎异种克隆胚中线粒体的变化情况。结果表明,重构胚发育到囊胚时期,来自东北虎的线粒体已经检测不到。
马学海[9]（2007）在《牛体外成熟卵母细胞与性控精子体外受精的研究》文中研究指明本文研究牛卵母细胞的体外成熟培养、与性别分离精子体外受精及早期胚胎体外培养程序的优化,目的是为建立一套完善的牛性控胚胎体外生产体系,从而为该技术走出实验室,在实践中得以应用提供理论依据。同时为核移植、转基因等胚胎工程后技术的应用奠定基础。试验一研究牛卵母细胞体外成熟的培养方法,以提高牛卵母细胞的体外成熟率。通过添加不同激素、以及不同血清,比较不同浓度的激素水平,不同血清及其浓度对牛卵母细胞体外成熟的影响。以期找出在本实验室条件下,牛卵母细胞IVM所需要添加的适宜的激素浓度,血清种类及浓度。为进一步做IVF、IVC打下基础。结果表明,选用胞质均一致密,外围至少有3层以上卵丘细胞包裹的A级卵母细胞。添加10μg/mlFSH、10μg/mlLH、1μg/mlE2,成熟培养22～24h可显着提高卵母细胞体外培养的成熟率;与添加5%血清相比,添加10%的血清成熟效果更好,单独添加10%发情牛血清（OCS）能起到与10%胎牛血清（FCS）在外源激素参与下联合培养同等或者更好的效果。说明在牛细胞培养液中只添加10%OCS而不使用激素是完全可行的,在相同效果的前提下可大大降低成本。试验二研究不同精子获能添加物、不同精子密度、不同精子获能液对性别分离精子IVF的影响。目的是优化性控精液体外受精条件,筛选出简便、高效的获能处理方法。为提高体外成熟卵母细胞的受精质量和数量提供理论基础。研究表明受精液中同时添加一定浓度的肝素（l0μg/ml）与咖啡因（5mM）,能较好地促进牛分离精子体外获能与受精;精子密度在1.0×106个/ml左右比较适合牛分离精子IVF;用BO液和TALP液对牛性控精子进行获能和受精处理,其受精效果差异不显着（P>0.05）,但BO液对早期胚胎的发育影响较小。试验三通过优化培养程序,筛选培养液,以建立适合牛胚胎体外发育的培养体系。通过对共培养体系、不同早期胚胎培养液及分离精子和未分离精子IVF的研究表明,在牛早期胚胎培养过程中,在共培养条件下基础培养液选用配制简单的SOF或CR1,添加一定量的BSA,可获得较高的囊胚发育率和卵裂率。颗粒细胞与输卵管上皮细胞间对胚胎的发育并没有显着差异（P>0.05）,但两组均显着优于非共培养体系（P<0.05）。分离精子和未分离精子在共培养条件下的体外受精效果表明,两者的卵裂率和囊胚率差异不显着（P>0.05）,但未分离精子体外受精效果稍好于分离精子。
刘赛[10]（2007）在《牛体外受精卵体外发育影响因素的研究》文中研究说明本研究的目的是在已有的基础上对牛卵母细胞体外成熟、体外受精及早期胚胎体外发育作进一步研究,重点进行了血清的添加浓度和牛胎儿睾丸支持细胞（Sertoli cells, SCs）对牛体外受精卵体外发育的影响的研究。旨在提高牛体外受精卵的卵裂率和囊胚发育率。本试验从以下几个方面进行研究:1.为了探讨在牛受精卵培养液中添加血清替代品对体外受精卵发育的影响,确定血清在合成输卵管液（Synthetic oviduct fluid, SOF）中合适的添加浓度及添加时期,以筛选优良的牛体外受精卵体外培养体系。在SOF液中分别添加10%新生牛血清（New born bovine serum, NBS）、8 g/L牛血清白蛋白（Bovine serum albumin, BSA）和1 g/L聚乙烯醇（Polyvinyl alcohol, PVA）进行牛体外受精卵的全程培养。结果显示,SOF培养液中添加PVA,BSA替代血清时卵裂率和囊胚发育率都明显下降,说明PVA或BSA不能达到血清的效果。在受精卵培养的最初48 h用5%NBS,之后用10%NBS培养液时,卵裂率（66.3%）和囊胚发育率（30.9%）与SOF+10%NBS全程培养组（58.7%, 29.3%）差异不显着（P>0.05）。说明体外培养时在SOF培养液中添加一定浓度的血清以及改变血清的添加方式,不会影响牛体外受精卵体外发育效果。比较发情第7天的母牛血清（7th day oestrus cow serum, OCS）与NBS的效果,结果SOF+10%NBS组与SOF+10%OCS组的卵裂率、囊胚率差异不显着,发情牛血清可替代NBS用于牛早期胚胎的体外培养。2.研究体外不同阶段牛胎儿睾丸SCs对牛受精卵体外发育的影响。从屠宰场采集5～7月龄牛胎儿睾丸,经原代和传代培养制备牛胎儿睾丸SCs单层,对比原代与传代胎牛睾丸SCs饲养层与牛体外受精卵共培养时受精卵的发育情况;分别以4×104 /mL与2×104 /mL两个密度接种传代胎牛睾丸支持细胞与牛受精卵共培养,并设对照组。牛体外受精卵与传代牛胎儿睾丸SCs共培养组,卵裂率（79.3%）高于原代SCs组（69.2%）,差异不显着（P>0.05）;囊胚发育率（41.3%）极显着高于原代SCs组（16.7%）（P<0.01）。传代2.0×104 /mL密度SCs共培养组卵裂率与传代4.0×104 /mL密度SCs共培养组的卵裂率差异不显着,胚胎发育率随着饲养层的密度增大明显下降。结论为,传代牛胎儿睾丸SCs制备的饲养层能有效促进牛体外受精卵的体外发育,提高囊胚质量;传代接种的牛胎儿睾丸SCs饲养层密度过大,将严重影响牛体外受精卵的发育。
二、添加不同发情时期山羊血清对牛胚胎体外发育的影响（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、添加不同发情时期山羊血清对牛胚胎体外发育的影响（论文提纲范文）
（1）绵羊ICSI胚胎培养液中发情绵羊血清浓度优化研究（论文提纲范文）
| 1 材料与方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.1.1 主要试剂 |
| 1.1.2 试剂配制 |
| 1.1.3 主要仪器 |
| 1.2 方法 |
| 1.2.1 发情绵羊血清的制备 |
| 1.2.2 绵羊精液采集 |
| 1.2.3 显微操作针的制作 |
| 1.2.4 绵羊卵巢采集 |
| 1.2.5 卵丘-卵母细胞复合体的采集与筛选 |
| 1.2.6 COCs的培养 |
| 1.2.7 胞浆内单精子注射并激活处理 |
| 1.2.8 胚胎体外培养 |
| 1.2.9 统计分析 |
| 2 结果与分析 |
| 3 讨论 |
| 4 结论 |
（2）牦牛冷暖季卵巢差异分析及添加褪黑素对牦牛卵母细胞体外成熟、胚胎体外发育的影响（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 第一章 牛卵母细胞体外成熟及胚胎体外培养研究进展 |
| 1.1 卵泡分化对卵母细胞体外成熟的影响 |
| 1.1.1 卵母细胞发育能力的获得 |
| 1.1.2 染色质结构和卵母细胞发育能力 |
| 1.1.3 卵泡细胞对染色质重塑过程的贡献 |
| 1.2 褪黑素调控卵母细胞和早期胚胎发育的机制研究进展 |
| 1.2.1 生殖中的自由基(ROS/RNS) |
| 1.2.2 氧化应激 |
| 1.2.3 氮化应激 |
| 1.2.4 褪黑素和ROS/RNS |
| 1.2.5 褪黑素调节合子和体外生产的氧化应激 |
| 1.2.6 褪黑素对抗硝化应激的潜在应用 |
| 1.3 牛胚胎体外培养基因表达及表观遗传分析研究进展 |
| 1.3.1 牛胚胎体外生产 |
| 1.3.2 输卵管对胚胎发育和质量的影响 |
| 1.3.3 体外胚胎质量评价 |
| 1.3.4 基因表达分析评价移植胚胎质量 |
| 1.3.5 早期环境对胚胎表型的重要性 |
| 1.4 牦牛胚胎体外培养研究进展 |
| 1.5 本研究的目的意义 |
| 第二章 牦牛卵巢活动的关键信号调控网络分析 |
| 2.1 材料与方法 |
| 2.1.1 卵巢采集 |
| 2.1.2 切片制作与HE染色 |
| 2.1.3 免疫组化检测牦牛卵巢组织中VASA定位 |
| 2.1.4 RNA提取及转录组分析 |
| 2.1.5 qRT-PCR验证分析 |
| 2.1.6 数据的统计和分析 |
| 2.2 结果 |
| 2.2.1 母牦牛季节性排卵特征 |
| 2.2.2 冷季牦牛卵巢从窦状卵泡向成熟卵泡发育受阻 |
| 2.2.3 冷季牦牛卵巢窦状卵泡内颗粒细胞功能紊乱 |
| 2.2.4 RNA-Seq数据分析 |
| 2.2.5 牦牛卵巢基因表达的季节性影响 |
| 2.2.6 KEGG通路富集分析 |
| 2.2.7 暖季牦牛卵巢和冷季牦牛卵巢差异基因表达量验证 |
| 2.3 讨论 |
| 2.4 结论 |
| 第三章 褪黑素对牦牛卵母细胞体外成熟及体外受精胚胎的影响 |
| 3.1 材料与方法 |
| 3.1.1 卵母细胞的采集与体外成熟 |
| 3.1.2 体外受精与胚胎培养 |
| 3.1.3 试验设计 |
| 3.1.4 卵母细胞内ROS、GSH和 DNA损伤的测定 |
| 3.1.5 卵母细胞凋亡水平的测定 |
| 3.1.6 卵母细胞线粒体膜电位的测定 |
| 3.1.7 胚胎内ROS和 GSH的测定 |
| 3.1.8 胚胎免疫荧光染色 |
| 3.1.9 胚胎凋亡细胞TUNEL染色分析 |
| 3.1.10 囊胚中相关基因qRT-PCR分析 |
| 3.1.11 数据的统计和分析 |
| 3.2 结果 |
| 3.2.1 褪黑素对牦牛卵母细胞体外成熟后胚胎发育的影响 |
| 3.2.2 褪黑素对牦牛IVF胚胎发育质量的影响 |
| 3.2.3 培养液中添加褪黑素(10~(-9)M)对牦牛IVM和 IVF胚胎发育的影响 |
| 3.3 讨论 |
| 3.4 结论 |
| 第四章 褪黑素对牦牛胚胎体外发育中H2O2 诱导氧化损伤的保护机制研究 |
| 4.1 材料与方法 |
| 4.1.1 动物及试剂 |
| 4.1.2 卵母细胞采集与体外成熟 |
| 4.1.3 体外受精和胚胎培养 |
| 4.1.4 褪黑素和H2O2 处理 |
| 4.1.5 胚胎凋亡细胞TUNEL染色分析 |
| 4.1.6 胚胎免疫荧光染色 |
| 4.1.7 Caspase-3 活性检测 |
| 4.1.8 实时荧光定量PCR |
| 4.1.9 细胞内ROS的测定 |
| 4.1.10 细胞内ATP含量测定 |
| 4.1.11 MMP检测 |
| 4.1.12 氧化剂及抗氧化能力测定 |
| 4.1.13 数据统计与分析 |
| 4.2 结果 |
| 4.2.1 褪黑素对牦牛胚胎着床前发育过程中H_2O_2诱导的氧化应激的具有保护作用 |
| 4.2.2 褪黑素对暴露于H2O2 条件下的牦牛受精卵-囊胚发育阶段的胚胎保护作用. |
| 4.2.3 褪黑素降低牦牛受精卵中H2O2 诱导的细胞内ROS水平 |
| 4.2.4 褪黑素能抑制受精卵中H2O2 诱导的线粒体功能障碍 |
| 4.2.5 褪黑素保护着床前胚胎免受抗氧化酶的氧化损伤 |
| 4.3 讨论 |
| 4.4 结论 |
| 第五章 褪黑素对牦牛体细胞核移植胚胎发育的影响 |
| 5.1 材料和方法 |
| 5.1.1 卵母细胞选择和体外成熟 |
| 5.1.2 体外受精与胚胎培养 |
| 5.1.3 供体细胞的准备与牦牛SCNT |
| 5.1.4 胚胎免疫荧光染色 |
| 5.1.5 细胞内ROS测定 |
| 5.1.6 胚胎凋亡细胞TUNEL染色分析 |
| 5.1.7 褪黑素对牦牛SCNT胚胎基因表达的影响 |
| 5.1.8 数据统计与分析 |
| 5.2 结果 |
| 5.2.1 褪黑素对牦牛SCNT胚胎的发育能力的影响 |
| 5.2.2 褪黑素对牦牛SCNT胚胎质量的影响 |
| 5.2.3 褪黑素对牦牛SCNT胚胎囊胚凋亡率的影响 |
| 5.2.4 褪黑素对牦牛SCNT胚胎ROS水平的影响 |
| 5.2.5 褪黑素对牦牛SCNT胚胎表观遗产修饰的影响 |
| 5.2.6 褪黑素对牦牛SCNT胚胎相关基因表达的影响 |
| 5.3 讨论 |
| 5.4 结论 |
| 第六章 褪黑素处理供体细胞对牦牛体细胞核移植胚胎发育的影响 |
| 6.1 材料和方法 |
| 6.1.1 卵母细胞选择和体外成熟 |
| 6.1.2 体外受精与胚胎培养 |
| 6.1.3 供体细胞的准备与体细胞核移植 |
| 6.1.4 褪黑素对供体细胞表观修饰的影响 |
| 6.1.5 供体细胞TUNEL染色分析 |
| 6.1.6 褪黑素对供体细胞相关基因的表达分析 |
| 6.1.7 胚胎免疫荧光染色 |
| 6.1.8 细胞内ROS测定 |
| 6.1.9 胚胎凋亡细胞TUNEL染色分析 |
| 6.1.10 褪黑素对牦牛SCNT胚胎基因表达的影响 |
| 6.1.11 数据统计与分析 |
| 6.2 结果 |
| 6.2.1 褪黑素对牦牛供体细胞增殖和凋亡的影响 |
| 6.2.2 褪黑素处理对供体细胞表观遗传的影响 |
| 6.2.3 褪黑素处理对供体细胞发育相关功能基因表达的影响 |
| 6.2.4 褪黑素处理对牦牛SCNT胚胎发育的影响 |
| 6.2.5 褪黑素对牦牛SCNT胚胎质量的影响 |
| 6.2.6 褪黑素对牦牛SCNT囊胚凋亡率的影响 |
| 6.2.7 褪黑素对牦牛SCNT胚胎ROS水平的影响 |
| 6.2.8 褪黑素对牦牛SCNT胚胎表观遗产修饰的影响 |
| 6.2.9 褪黑素对牦牛SCNT胚胎相关基因表达的影响 |
| 6.3 讨论 |
| 6.4 结论 |
| 全文结论 |
| 创新点 |
| 不足之处和进一步研究计划 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 缩略词 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
| 攻读博士学位期间参与的科研项目及发表论文 |
（3）梅花鹿、水貂、蓝狐及貉—牛异种体细胞核移植技术研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 英文缩略表 |
| 第一章 绪论 |
| 1.1 梅花鹿的繁殖特点及繁育生物技术 |
| 1.1.1 梅花鹿的繁殖特点 |
| 1.1.2 梅花鹿的繁育生物技术 |
| 1.2 水貂、蓝狐及貉的经济价值与繁育生物技术 |
| 1.2.1 水貂的经济价值与繁育生物技术 |
| 1.2.2 蓝狐和貉的经济价值与繁育生物技术 |
| 1.3 异种体细胞核移植技术研究进展 |
| 1.3.1 ISCNT 研究历史 |
| 1.3.2 ISCNT 关键技术环节 |
| 1.3.3 ISCNT 的研究意义 |
| 1.3.4 ISCNT 研究存在的问题 |
| 1.4 本研究的内容、目的及意义 |
| 1.4.1 梅花鹿、水貂、蓝狐和貉耳皮肤成纤维细胞培养及冷冻保存 |
| 1.4.2 牛卵母细胞体外成熟培养条件的优化 |
| 1.4.3 梅花鹿-牛 ISCNT 技术方法的研究 |
| 1.4.4 水貂、蓝狐及貉-牛 ISCNT 胚胎的制备 |
| 第二章 供核细胞培养及冷冻保存 |
| 2.1 材料和方法 |
| 2.1.1 材料 |
| 2.1.2 方法 |
| 2.1.3 试验设计 |
| 2.1.4 统计分析 |
| 2.2 结果与分析 |
| 2.2.1 梅花鹿、水貂、蓝狐和貉耳皮肤成纤维细胞的生长特性 |
| 2.2.3 DMSO 和甘油对不同供核细胞的冷冻保护效果 |
| 2.3 讨论 |
| 2.3.1 梅花鹿、水貂、蓝狐和貉耳皮肤成纤维细胞的培养 |
| 2.3.2 梅花鹿、水貂、蓝狐和貉耳皮肤成纤维细胞的纯化 |
| 2.3.3 梅花鹿、水貂、蓝狐和貉耳皮肤成纤维细胞的冷冻保存 |
| 2.4 小结 |
| 第三章 牛卵母细胞体外成熟体系的优化 |
| 3.1 材料和方法 |
| 3.1.1 材料 |
| 3.1.2 方法 |
| 3.1.3 测定指标与评定方法 |
| 3.1.4 统计分析 |
| 3.2 结果与分析 |
| 3.2.1 不同激素组合对牛卵母细胞体外成熟的影响 |
| 3.2.2 BCB 染色优选牛卵母细胞体外成熟 |
| 3.2.3 EGF 对牛卵母细胞体外成熟的影响 |
| 3.3 讨论 |
| 3.3.1 激素对牛卵母细胞体外成熟的影响 |
| 3.3.2 BCB 染色对牛卵母细胞体外成熟的作用 |
| 3.3.3 EGF 对牛卵母细胞体外成熟的影响 |
| 3.4 小结 |
| 第四章 梅花鹿-牛 ISCNT 技术研究 |
| 4.1 材料和方法 |
| 4.1.1 材料 |
| 4.1.2 方法 |
| 4.1.4 统计分析 |
| 4.2 结果与分析 |
| 4.2.1 DEME 诱导牛卵母细胞显核的研究 |
| 4.2.2 梅花鹿-牛 ISCNT 显微操作的研究 |
| 4.2.3 梅花鹿-牛 ISCNT 胚胎体外培养的研究 |
| 4.3 讨论 |
| 4.3.1 DEME 处理对牛卵母细胞显核的影响 |
| 4.3.2 梅花鹿-牛 ISCNT 显微操作 |
| 4.3.3 梅花鹿-牛 ISCNT 胚胎体外培养 |
| 4.4 小结 |
| 第五章 水貂、蓝狐及貉-牛 ISCNT 胚胎的制备 |
| 5.1 材料和方法 |
| 5.1.1 材料 |
| 5.1.2 方法 |
| 5.1.3 试验设计 |
| 5.1.4 统计分析 |
| 5.2 结果与分析 |
| 5.2.1 供核细胞对全细胞胞质内注射制备 ISCNT 胚胎的影响 |
| 5.2.2 共培养对毛皮动物-牛 ISCNT 胚胎体外发育的影响 |
| 5.3 讨论 |
| 5.3.1 供核细胞对全细胞胞质内注射制备 ISCNT 胚胎的影响 |
| 5.3.2 共培养对水貂、蓝狐及貉-牛 ISCNT 胚胎体外发育的影响 |
| 5.4 小结 |
| 第六章 全文结论 |
| 6.1 结论 |
| 6.2 研究的创新点 |
| 6.3 后续研究工作 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 作者简介 |
（4）发情牛血清对绵羊卵母细胞体外成熟及孤雌胚发育的影响（论文提纲范文）
| 1 材料与方法 |
| 1.1 试剂 |
| 1.2 发情牛血清的制备 |
| 1.3 绵羊卵母细胞的采集 |
| 1.4 不同天数发情牛血清对绵羊卵母细胞体外成熟的影响 |
| 1.5 不同浓度发情牛血清对绵羊卵母细胞体外成熟的影响 |
| 1.6 不同天数发情牛血清对绵羊孤雌胚体外发育的影响 |
| 1.7 统计分析 |
| 2 结果与分析 |
| 2.1 不同天数发情牛血清对绵羊卵母细胞体外成熟的影响 |
| 2.2 不同浓度发情牛血清对绵羊卵母细胞体外成熟的影响 |
| 2.3 不同天数发情牛血清对绵羊孤雌胚体外发育的影响 |
| 3 讨论 |
（5）β-巯基乙醇和发情羊血清对牛颗粒细胞体外培养的影响（论文提纲范文）
| 1 材料与方法 |
| 1.1 材 料 |
| 1.1.1 试验试剂 |
| 1.1.2 卵 |
| 1.1.3 发情羊血清 (ESS) |
| 1.1.4 颗粒细胞 |
| 1.2 方 法 |
| 1.2.1 颗粒细胞的计数和存活率评定 |
| 1.2.2 不同浓度BME对颗粒细胞体外培养的影响 |
| 1.2.3 不同类型血清对颗粒细胞体外培养的影响 |
| 1.2.4 数据分析 |
| 2 结果与分析 |
| 2.1 BME对颗粒细胞生长的影响 |
| 2.2 不同类型血清对颗粒细胞生长的影响 |
| 3 结论与讨论 |
（6）黄牛孤雌胚胎体外培养体系的优化及体细胞核移植胚构建初探（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 文献综述 |
| 第一章 哺乳动物卵母细胞体外成熟和早期胚胎体外培养的研究进展 |
| 1.1 哺乳动物卵母细胞体外成熟的研究进展 |
| 1.1.1 卵泡卵母细胞的获得 |
| 1.1.2 卵母细胞成熟的机理 |
| 1.1.3 卵母细胞成熟的标志 |
| 1.1.4 卵母细胞成熟的判断 |
| 1.1.5 卵母细胞体外成熟的影响因素 |
| 1.1.6 存在的问题和展望 |
| 1.2 哺乳动物早期胚胎体外培养的研究进展 |
| 1.2.1 研究概况 |
| 1.2.2 早期胚胎的发育阻滞 |
| 1.2.3 胚胎体外培养方法 |
| 1.2.4 影响早期胚胎体外发育的因素 |
| 1.2.5 存在的问题与展望 |
| 第二章 哺乳动物体细胞核移植研究进展 |
| 2.1 哺乳动物细胞核移植研究概况 |
| 2.1.1 胚胎细胞核移植 |
| 2.1.2 同种体细胞核移植 |
| 2.2 核移植的基本程序 |
| 2.2.1 供体细胞的选择 |
| 2.2.2 受体细胞的选择和去核 |
| 2.2.3 供体细胞与受体细胞重组 |
| 2.2.4 重组胚的激活 |
| 2.2.5 重组胚的体外培养 |
| 2.3 哺乳动物核移植相关机理的研究 |
| 2.3.1 供体核与受体胞质的相互作用 |
| 2.3.2 供体核的重编程 |
| 2.4 影响核移植效率的因素 |
| 2.4.1 细胞周期同步化对核移植胚的影响 |
| 2.4.2 卵母细胞成熟质量对核移植胚的影响 |
| 2.4.3 供体细胞对核移植胚的影响 |
| 2.4.4 去核操作对核移植胚的影响 |
| 2.4.5 融合－激活方案对核移植胚的影响 |
| 2.5 体细胞核移植存在的问题 |
| 2.5.1 总效率低，成本高 |
| 2.5.2 流产率高，产仔率低 |
| 2.5.3 动物出生体重过大，死亡率高 |
| 实验研究 |
| 第三章 黄牛卵母细胞的体外成熟培养 |
| 3.1 材料 |
| 3.1.1 牛卵巢的采集 |
| 3.1.2 主要试剂 |
| 3.1.3 主要仪器 |
| 3.2 方法 |
| 3.2.1 牛卵丘-卵母细胞复合体的回收 |
| 3.2.2 卵母细胞的体外成熟培养 |
| 3.2.3 成熟卵母细胞孤雌激活和孤雌胚的体外培养 |
| 3.2.4 试验设计 |
| 3.2.5 数据分析 |
| 3.3 结果 |
| 3.3.1 不同浓度HMG 对牛卵母细胞体外成熟的影响 |
| 3.3.2 ITS 对牛卵母细胞体外成熟的影响 |
| 3.3.3 卵巢保存温度对牛卵母细胞体外成熟的影响 |
| 3.3.4 卵巢保存时间对牛卵母细胞体外成熟的影响 |
| 3.3.5 卵巢所处性周期阶段对牛卵母细胞体外成熟的影响 |
| 3.4 讨论 |
| 3.4.1 不同浓度HMG 对牛卵母细胞体外成熟的影响 |
| 3.4.2 ITS 对牛卵母细胞体外成熟的影响 |
| 3.4.3 卵巢保存温度对牛卵母细胞体外成熟的影响 |
| 3.4.4 卵巢保存时间对牛卵母细胞体外成熟的影响 |
| 3.4.5 卵巢所处性周期阶段对牛卵母细胞体外成熟的影响 |
| 3.5 小结 |
| 第四章 黄牛孤雌胚胎体外培养体系的优化 |
| 4.1 材料 |
| 4.1.1 牛卵巢的采集 |
| 4.1.2 主要试剂 |
| 4.1.3 主要仪器 |
| 4.2 方法 |
| 4.2.1 卵丘卵母细胞复合体（COCs）的获得与体外成熟培养 |
| 4.2.2 成熟卵母细胞的孤雌激活和孤雌胚的体外培养 |
| 4.2.3 试验设计 |
| 4.2.4 数据处理 |
| 4.3 结果 |
| 4.3.1 不同微滴体积对黄牛孤雌胚体外发育的影响 |
| 4.3.2 不同换液体积对黄牛孤雌胚体外发育的影响 |
| 4.3.3 血清灭活对黄牛孤雌胚体外发育的影响 |
| 4.3.4 不同添加血清时间对黄牛孤雌胚体外发育的影响 |
| 4.3.5 不同添加血清浓度对黄牛孤雌胚体外发育的影响 |
| 4.3.6 不同培养体系对黄牛孤雌胚体外发育的影响 |
| 4.4 讨论 |
| 4.4.1 不同微滴体积对黄牛孤雌胚体外发育的影响 |
| 4.4.2 不同换液体积对黄牛孤雌胚体外发育的影响 |
| 4.4.3 血清灭活对黄牛孤雌胚体外发育的影响 |
| 4.4.4 血清添加时间和添加浓度对黄牛孤雌胚体外发育的影响 |
| 4.4.5 不同培养体系对黄牛孤雌胚体外发育的影响 |
| 4.5 小结 |
| 第五章 颗粒细胞单层对黄牛孤雌胚体外发育的影响 |
| 5.1 材料 |
| 5.1.1 牛卵巢的采集 |
| 5.1.2 主要试剂 |
| 5.1.3 主要仪器 |
| 5.2 方法 |
| 5.2.1 卵丘卵母细胞复合体（COCs）的获得与体外成熟培养 |
| 5.2.2 颗粒细胞单层的制备 |
| 5.2.3 成熟卵母细胞的孤雌激活和孤雌胚的体外培养 |
| 5.2.4 试验设计 |
| 5.2.5 数据处理 |
| 5.3 结果 |
| 5.3.1 有无颗粒细胞单层对黄牛孤雌胚胎体外发育的影响 |
| 5.3.2 不同类型的颗粒细胞单层对黄牛孤雌胚胎体外发育的影响 |
| 5.3.3 不同种属的颗粒细胞单层对黄牛孤雌胚胎体外发育的影响 |
| 5.3.4 颗粒细胞单层体外培养时间对黄牛孤雌胚胎体外发育的影响 |
| 5.3.5 不同时间更换单层对黄牛孤雌胚胎体外发育的影响 |
| 5.4 讨论 |
| 5.4.1 有无颗粒细胞单层对黄牛孤雌胚体外发育的影响 |
| 5.4.2 不同类型颗粒细胞单层对黄牛孤雌胚体外发育的影响 |
| 5.4.3 不同种属的颗粒细胞单层对黄牛孤雌胚胎体外发育的影响 |
| 5.4.4 颗粒细胞单层体外培养时间对黄牛孤雌胚胎体外发育的影响 |
| 5.4.5 不同时间更换单层对黄牛孤雌胚胎体外发育的影响 |
| 5.5 小结 |
| 第六章 黄牛体细胞核移植胚的构建初探 |
| 6.1 材料 |
| 6.1.1 牛卵巢的采集 |
| 6.1.2 主要试剂 |
| 6.1.3 主要仪器 |
| 6.2 方法 |
| 6.2.1 卵丘卵母细胞复合体（COCs）的获得与体外成熟培养 |
| 6.2.2 卵母细胞的去核 |
| 6.2.3 供体细胞的准备 |
| 6.2.4 核移植胚的构建 |
| 6.2.5 核移植胚的激活 |
| 6.2.6 核移植胚的体外培养 |
| 6.2.7 试验设计 |
| 6.2.8 数据处理 |
| 6.3 结果 |
| 6.3.1 不同成熟时间对核移植胚胎体外发育的影响 |
| 6.3.2 不同核/质作用时间对核移植胚胎体外发育的影响 |
| 6.4 讨论 |
| 6.4.1 不同体外成熟培养时间对核移植胚胎体外发育的影响 |
| 6.4.2 不同核/质作用时间对核移植胚胎体外发育的影响 |
| 6.5 小结 |
| 全文结论 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 缩略词 |
| 致谢 |
| 个人简介 |
（7）牛体外受精技术体系的优化研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 综述部分 |
| 第一章 牛体外受精技术研究进展 |
| 1.1 体外受精研究概况 |
| 1.2 卵母细胞的体外成熟 |
| 1.2.1 卵母细胞体外成熟和调节机制 |
| 1.2.2 卵母细胞的获取 |
| 1.2.3 卵母细胞成熟的特征 |
| 1.2.4 卵母细胞成熟的判定 |
| 1.2.5 影响卵母细胞成熟的因素 |
| 1.3 精子的体外获能 |
| 1.3.1 精子获能的机理 |
| 1.3.2 精子体外获能的方法 |
| 1.3.3 获能的基础培养液 |
| 1.3.4 影响精子体外获能的因素 |
| 1.4 体外受精 |
| 1.4.1 受精的机理 |
| 1.4.2 多精受精 |
| 1.4.3 影响IVF 的因素 |
| 1.5 受精卵的体外培养 |
| 1.5.1 发育阻滞 |
| 1.5.2 发育阻滞的克服 |
| 1.5.3 早期胚胎体外培养的方法 |
| 1.5.4 影响胚胎体外培养的因素 |
| 1.6 存在问题及前景展望 |
| 试验部分 |
| 第二章 血清及EGF 对牛卵巢卵母细胞体外成熟的影响 |
| 2.1 材料和方法 |
| 2.1.1 材料 |
| 2.1.2 试验方法 |
| 2.2 结果 |
| 2.2.1 不同类型的血清或其替代物对牛卵母细胞体外成熟的影响 |
| 2.2.2 EGF 对牛卵母细胞体外成熟的影响 |
| 2.3 讨论 |
| 2.4 小结 |
| 第三章 公牛、肝素及葡萄糖对牛体外受精的影响 |
| 3.1 材料和方法 |
| 3.1.1 材料 |
| 3.1.2 试验方法 |
| 3.2 结果 |
| 3.2.1 来源于不同公牛的精子对IVF 的影响 |
| 3.2.2 肝素浓度对牛IVF 的影响 |
| 3.2.3 获能液和受精液中添加葡萄糖对牛IVF 的影响 |
| 3.3 讨论 |
| 3.4 小结 |
| 第四章 不同浓度葡萄糖对牛体外受精胚胎体外发育的影响 |
| 4.1 材料和方法 |
| 4.1.1 材料 |
| 4.1.2 试验方法 |
| 4.2 结果 |
| 4.2.1 IVF 胚胎培养时即添加不同浓度的葡萄糖对其体外发育的影响 |
| 4.2.2 IVF 胚胎培养48 h 后添加不同浓度的葡萄糖对其体外发育的影响 |
| 4.2.3 在不同蛋白添加物条件下葡萄糖对IVF 胚胎体外发育的影响 |
| 4.3 讨论 |
| 4.4 小结 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 附图 |
| 致谢 |
| 作者简介 |
（8）东北虎体细胞异种核移植（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 第一章 虎的现况和研究进展 |
| 1.1 虎的现况和濒危原因 |
| 1.1.1 虎的现况 |
| 1.1.2 虎面临的危机 |
| 1.2 虎的形态与分类 |
| 1.2.1 形态特征 |
| 1.2.2 分类 |
| 1.3 虎的生物学研究进展 |
| 1.3.1 雌性东北虎生殖系统形态及组织学 |
| 1.3.2 生理生化 |
| 1.3.3 遗传 |
| 1.4 虎的生态学研究进展 |
| 1.4.1 分布与数量 |
| 1.4.2 栖息地 |
| 1.4.3 食性 |
| 1.4.4 行为 |
| 1.5 辅助繁殖技术研究进展 |
| 1.5.1 虎的人工采精技术 |
| 1.5.2 人工授精 |
| 1.5.3 试管内授精及胚胎移植 |
| 1.5.4 精子的低温储藏 |
| 1.6 拯救措施 |
| 1.6.1 老虎面临的危机 |
| 1.6.2 世界自然基金会近年来的工作 |
| 1.6.3 国际野生物保护学会近年来的工作 |
| 1.6.4 我国在虎保护方面所做的工作 |
| 1.6.5 展望 |
| 第二章 异种细胞核移植技术研究进展 |
| 2.1 异种细胞核移植技术研究现状 |
| 2.2 影响种间核移植成功的因素 |
| 2.2.1 不同的杂交组合对杂合重构胚胎的发育率的影响 |
| 2.2.2 胞质的量和培养条件的影响 |
| 2.2.3 哺乳动物异种间的胚胎移植后的胚胎附植 |
| 2.3 异种核移植中线粒体的命运 |
| 2.4 异种细胞核移植技术的意义与应用前景 |
| 2.4.1 拯救濒危动物 |
| 2.4.2 分离克隆人类胚胎干细胞 |
| 2.4.3 研究核质互作 |
| 第三章 东北虎体细胞的培养 |
| 3.1 材料与方法 |
| 3.1.1 试验试剂及仪器 |
| 3.1.2 东北虎耳部皮块的采取 |
| 3.1.3 东北虎皮肤成纤维细胞的分离与原代培养 |
| 3.1.4 东北虎皮肤成纤维细胞培养液的筛选 |
| 3.1.5 不同血清浓度对东北虎皮肤成纤维细胞传代细胞的影响 |
| 3.1.6 不同浓度的EGF 和胰岛素对东北虎皮肤成纤维细胞传代细胞的影响 |
| 3.1.7 细胞的冻存 |
| 3.1.8 冷冻细胞的解冻和培养 |
| 3.2 结果 |
| 3.2.1 东北虎耳皮肤组织的原代培养 |
| 3.2.2 培养液的筛选 |
| 3.2.3 不同的血清浓度对传代细胞生长的影响 |
| 3.2.4 不同浓度的EGF 和胰岛素对传代细胞生长的影响 |
| 3.3 讨论 |
| 3.3.1 细胞原代培养 |
| 3.3.2 不同培养液对东北虎皮肤成纤维细胞生长的影响 |
| 3.3.3 不同血清浓度对东北虎皮肤成纤维细胞生长的影响 |
| 3.3.4 添加EGF、胰岛素对传代东北虎皮肤成纤维细胞生长的影响 |
| 3.4 小结 |
| 第四章 东北虎体细胞生物学特性和染色体检测 |
| 4.1 材料和方法 |
| 4.1.1 形态观察 |
| 4.1.2 生长曲线 |
| 4.1.3 染色体检测 |
| 4.1.4 流式细胞仪检测细胞周期 |
| 4.2 结果 |
| 4.2.1 形态 |
| 4.2.2 生长曲线 |
| 4.2.3 染色体检查 |
| 4.2.4 细胞周期 |
| 4.3 讨论 |
| 4.3.1 形态和生长曲线 |
| 4.3.2 染色体核型分析 |
| 4.3.3 细胞周期 |
| 4.4 小结 |
| 第五章 受体卵母细胞的成熟 |
| 5.1 材料和方法 |
| 5.1.1 试验材料及主要试剂仪器 |
| 5.1.2 操作液 |
| 5.1.3 方法 |
| 5.2 结果 |
| 5.2.1 不同发情时期牛血清对牛卵母细胞成熟效果的影响 |
| 5.2.2 EGF、胰岛素对牛卵母细胞体外成熟的影响 |
| 5.2.3 OM 液中添加孕酮对牛卵母细胞体外成熟的影响 |
| 5.2.4 发情牛血清有无溶血对卵母细胞成熟的影响 |
| 5.3 讨论 |
| 5.3.1 卵母细胞成熟在核移植中的作用 |
| 5.3.2 激素和生长因子在卵母细胞成熟中的作用 |
| 5.3.3 不同发情时期牛血清对牛卵母细胞成熟的影响 |
| 5.4 小结 |
| 第六章 卵母细胞孤雌激活 |
| 6.1 材料和方法 |
| 6.1.1 试验材料及主要试剂仪器 |
| 6.1.2 操作液 |
| 6.1.3 方法 |
| 6.2 结果 |
| 6.2.1 牛卵母细胞孤雌激活 |
| 6.2.2 不同激活方法对兔卵母细胞激活效果的影响 |
| 6.3 讨论 |
| 6.3.1 卵母细胞的激活 |
| 6.3.2 乙醇激活 |
| 6.4 小结 |
| 第七章 孤雌激活早期胚胎的体外培养 |
| 7.1 材料和方法 |
| 7.1.1 牛卵巢的采集卵母细胞的采集 |
| 7.1.2 牛卵巢卵母细胞的采集 |
| 7.1.3 牛卵丘-卵母细胞复合体的体外成熟 |
| 7.1.4 成熟卵母细胞的激活 |
| 7.1.5 孤雌激活牛胚胎的体外培养 |
| 7.1.6 实验设计 |
| 7.2 结果 |
| 7.2.1 OM 液中添加OCSD0 对早期孤雌胚胎发育的影响 |
| 7.2.2 胚胎培养液中添加EGF、胰岛素、孕酮对孤雌激活胚胎发育潜力的影响 |
| 7.2.3 添加不同时期的发情牛血清对孤雌激活胚胎发育潜力的影响 |
| 7.3 讨论 |
| 7.3.1 在成熟液中添加OCSD0 对早期胚胎发育的影响 |
| 7.3.2 生长因子和激素对早期胚胎发育的影响 |
| 7.3.3 不同发情时期牛血清对牛孤雌胚胎的发育的影响 |
| 7.4 小结 |
| 第八章 东北虎体细胞的异种核移植 |
| 8.1 材料和方法 |
| 8.1.1 牛卵巢的采集、运输及卵母细胞的采集 |
| 8.1.2 牛卵母细胞的体外成熟培养 |
| 8.1.3 卵母细胞的去核操作 |
| 8.1.4 供体细胞的准备 |
| 8.1.5 供体细胞的注射 |
| 8.1.6 重组胚的激活 |
| 8.1.7 克隆胚胎的体外培养 |
| 8.2 结果 |
| 8.2.1 用不同方法处理的供体细胞对重组胚发育的影响 |
| 8.2.2 重构胚激活前不同培养时间对克隆胚胎发育潜力的影响 |
| 8.3 讨论 |
| 8.3.1 供体细胞不同处理方法对核移植结果的影响 |
| 8.3.2 核质相互作用时间对核移植结果的影响 |
| 8.4 小结 |
| 第九章 异质克隆重组胚的鉴定 |
| 9.1 材料与方法 |
| 9.1.1 材料 |
| 9.1.2 方法 |
| 9.2 结果 |
| 9.2.1 一抗制备 |
| 9.2.2 核移胚间接荧光免疫 |
| 9.3 讨论 |
| 9.4 小结 |
| 第十章 异质克隆胚线粒体DNA 的检测 |
| 10.1 材料和方法 |
| 10.1.1 材料 |
| 10.1.2 工具酶及试剂 |
| 10.1.3 PCR 模板的制备 |
| 10.1.4 引物设计 |
| 10.1.5 引物特异性及不同阶段线粒体的检测 |
| 10.2 结果 |
| 10.2.1 引物特异性检测 |
| 10.2.2 不同阶段胚胎扩增结果 |
| 10.3 讨论 |
| 10.4 小结 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 作者简介 |
（9）牛体外成熟卵母细胞与性控精子体外受精的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 前言 |
| 第一章 文献综述 |
| 一、哺乳动物体外受精技术研究进展 |
| 1 体外受精技术研究进展 |
| 1.1 国内外体外受精技术的研究概况 |
| 1.2 性控精子体外受精研究概况 |
| 2 牛卵母细胞体外成熟培养 |
| 2.1 卵母细胞体外成熟研究进展 |
| 2.2 卵母细胞的成熟过程及调节机制 |
| 2.3 卵母细胞体外成熟标志 |
| 2.4 卵母细胞的获取 |
| 2.5 卵母细胞体外成熟的影响因素 |
| 3 分离精子的获能和体外受精 |
| 3.1 精子分离的原理 |
| 3.2 分离精子的体外获能（capacitation） |
| 4 早期胚胎体外培养的研究进展 |
| 4.1 胚胎早期发育阻滞(block of development) |
| 4.2 影响早期胚胎体外发育的因素 |
| 5 存在问题与前景 |
| 第二章 试验研究 |
| 实验一 牛卵母细胞体外成熟的研究 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.2 实验方法 |
| 1.3 实验设计 |
| 1.4 统计分析 |
| 2 结果 |
| 2.1 促性腺激素对卵母细胞体外成熟的影响 |
| 2.2 雌二醇对卵母细胞体外成熟的影响 |
| 2.3 不同血清及其不同浓度对牛卵母细胞成熟的影响 |
| 3 讨论 |
| 3.1 促性腺激素与卵母细胞体外成熟 |
| 3.2 雌二醇与卵母细胞体外成熟 |
| 3.3 不同血清及其不同浓度对牛卵母细胞成熟的影响 |
| 4 结论 |
| 实验二 获能液及精子密度对性控精子IVF 的影响 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.2 试验方法 |
| 1.3 试验设计 |
| 1.4 统计分析 |
| 2 结果 |
| 2.1 获能液中肝素和咖啡因的添加对卵母细胞IVF 影响 |
| 2.2 不同精子密度对牛卵母细胞IVF 的影响 |
| 2.3 不同受精液对牛卵母细胞IVF 的影响 |
| 3 讨论 |
| 3.1 获能液中咖啡因和肝素的添加对卵母细胞IVF 影响 |
| 3.2 不同性控精子密度对牛卵母细胞IVF 的影响 |
| 3.3 不同受精液对牛性控精子IVF 的影响 |
| 4 结论 |
| 实验三 牛性控IVF 胚胎体外培养条件的研究 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.2 试验方法 |
| 1.3 试验设计 |
| 1.4 统计分析 |
| 2 结果 |
| 2.1 体细胞共培养对牛IVF 胚胎体外发育的影响 |
| 2.2 不同受精卵培养液在共培养系统下对早期胚胎体外发育的影响 |
| 2.3 分离和未分离精子在共培养条件下的受精和胚胎发育情况比较 |
| 3 讨论 |
| 3.1 体细胞共培养对牛IVF 胚胎体外发育的影响 |
| 3.2 不同受精卵培养液在共培养系统下对早期胚胎体外发育的影响 |
| 3.3 分离和未分离精子的受精和胚胎发育情况的比较 |
| 4 结论 |
| 附表 |
| 附图 |
| 致谢 |
| 石河子大学硕士研究生学位论文导师评阅表 |
（10）牛体外受精卵体外发育影响因素的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 综述部分 |
| 第一章 牛体外受精研究进展 |
| 1.1 牛体外受精研究简史 |
| 1.2 牛卵母细胞的采集 |
| 1.3 牛卵母细胞的体外成熟 |
| 1.4 精子的体外获能 |
| 1.5 精卵共孵育 |
| 1.6 早期胚胎体外培养（IN VITRO CULTURE, IVC） |
| 试验研究 |
| 第二章 培养液中血清或其替代物对牛体外受精卵体外发育的影响 |
| 2.1 材料与方法 |
| 2.2 结果 |
| 2.3 讨论 |
| 2.4 小结 |
| 第三章 牛体外受精卵与牛胎儿睾丸支持细胞体外共培养研究 |
| 3.1 材料与方法 |
| 3.2 结果 |
| 3.3 讨论 |
| 3.4 小结 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 作者简介 |
四、添加不同发情时期山羊血清对牛胚胎体外发育的影响（论文参考文献）
- [1]绵羊ICSI胚胎培养液中发情绵羊血清浓度优化研究[J]. 黄飞,赵建清,陶维昆,刘波,朱文靓,方翟,高庆华. 塔里木大学学报, 2021(02)
- [2]牦牛冷暖季卵巢差异分析及添加褪黑素对牦牛卵母细胞体外成熟、胚胎体外发育的影响[D]. 彭巍. 西北农林科技大学, 2019(08)
- [3]梅花鹿、水貂、蓝狐及貉—牛异种体细胞核移植技术研究[D]. 王士勇. 中国农业科学院, 2014(10)
- [4]发情牛血清对绵羊卵母细胞体外成熟及孤雌胚发育的影响[J]. 李佳佳,马利兵,籍凤宇,陈秀莉. 中国畜牧兽医, 2012(04)
- [5]β-巯基乙醇和发情羊血清对牛颗粒细胞体外培养的影响[J]. 权富生,刘琴,王丽君,马会明,王勇胜,张涌. 西北农业学报, 2011(12)
- [6]黄牛孤雌胚胎体外培养体系的优化及体细胞核移植胚构建初探[D]. 彭辉. 西北农林科技大学, 2008(11)
- [7]牛体外受精技术体系的优化研究[D]. 胡林勇. 西北农林科技大学, 2008(11)
- [8]东北虎体细胞异种核移植[D]. 宋继梅. 西北农林科技大学, 2007(01)
- [9]牛体外成熟卵母细胞与性控精子体外受精的研究[D]. 马学海. 石河子大学, 2007(06)
- [10]牛体外受精卵体外发育影响因素的研究[D]. 刘赛. 西北农林科技大学, 2007(06)